Добавил:
Upload Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:
Mikra_bilety.docx
Скачиваний:
1
Добавлен:
01.05.2025
Размер:
494.96 Кб
Скачать

Билет 17

1) Простые и сложные методы окраски. Протравы, дифференцирующие вещества. Окраска по Цилю-Нильсену.

Основные методы исследования морфологии микроорганизмов - это исследование нативных препаратов и исследование фиксированных окрашенных препаратов.

Нативные препараты = живые. Исследуются в форме "раздавленной" и "висячей" капель.

"Раздавленная" капля - капля микроорганизма в жидкости, нанесенная на предметное стекло и покрытая другим покровным стеклом.

"Висячая" капля - капля жидкости с микроорганизмом, нанесенная на покровное стекло и погруженная в лунку на специальном предметсом стекле.

Простые методы окраски - одноэтапные, с использованием 1го красителя. Препарат фиксируют в пламени горелки, проведя предметное стекло 3 раза через него, окрашивают бумажкой с красителем (добавляя на нее воду и оставляя на 3-5 мин), промывают, высушивают, микроскопируют в иммерсионной системе. Красители: фуксин, эозин, метиленовый синий, генцианвиолет.

Сложные методы окраски - осуществляются в несколько этапов, препарат красится несколькими красителями, используют протравы и дифференцирующие вещества.

Протравы - химические и физические вещества, повышающие окрашиваемость микроорганизмов. Уплотняют цитоплазму и делают окраску более прочной, либо разрыхляют клеточную стенку и способствуют проникновению краски в клетку (раствор Люголя в методе Грама, HCl в методе Ожешко, фенол и высокая температура в методе Циля-Нильсена).

Дифференцирующие вещества - избирательно обесцвечивают один вид микроорганизмов или определенную анатомическую структуру (спирт в методе Грама, серная кислота в методе Циля-Нильсена и Ожешко).

Сложные методы окраски подразделяются на дифференциальные (позволяют отличить один вид микроорганизмов от другого - метод Грама и Циля-Нильсена) и методы, позволяющие выявить анатомические структуры микроорганизмов (споры - Ожешко, клеточную стенку - метод Пешкова, капсулы - метод Бурри-Гинса, зерна волютина - метод Нейссера).

Метод Циля-Нильсена: дифференциальный сложный метод окраски. Позволяет отличить кислотоустойчивые микроорганизмы от некислотоустойчивых.

Техника:

  • в пламени горелки фиксируют препарат;

  • на белую фильтровальную бумажку наливают фуксин Циля (карболовый р-р фуксина) и проводят в пламени горелки 3-4 раза до появления белых паров;

  • снимают бумажку, остужают препарат, промывают водой;

  • проводят дифференциацию 5% серной кислотой (опускают препарат в нее 2-3 раза);

  • промывают водой;

  • без бумажки наливают р-р метинового синего (5 мин);

  • промывают водой, сушат, микроскопируют в иммерсионной среде.

На препарате видно красные кислотоустойчивые бактерии и синие некислотоустойчивые бактерии на голубом фоне среды (мокроты, например, если окрашивали ее ради вывления туберкулезной палочки).

2) Конъюгация. Половой F-фактор, его свойства. F+ и Hfr штаммы. Этапы конъюгации, ее значение.

Конъюгация - форма обмена генетическим материалом ежду бактериями при их непосредственном клеточном контакте. Этот процесс контролируется F-плазмидами, а также другими конъюгативными плазмидами. При конъюгации донорами являются "мужские" клетки, содержащие F-плазмиды, называемые F-фактором. Реципиентами являются "женские" F- (минус) клетки, у которых плазмида отсутствует. F-плазмида может находиться в цитоплазме клетки-донора в виде циркулярно-замкнутой двунитевой молекулы ДНК и реплицироваться автономно, а может быть встроена в бактериальную хромосому, реплицируясь в ее составе.

Донорные клетки, содержащие F-плазмиды, носят название F+ клеток. Бактериальные штаммы, в хромосому которых интегрирована F-фактор, называются Hfr-штаммами, они способны переносить гены с высокой частотой. F-фактор способен включаться в различные участки бактериальной хромосомы.

Интегрированный F-фактор способен выщепляться из бактериальной хромосомы, снова становят автономной циркулярной плазмидой. При неправильном выходе из хромосомы в лазмидную ДНК могут включаться бактериальные гены. Образуется т.н. F`-фактор (замещенный), несущий в себе несколько бактериальных генов.

Клетки-доноры можно отличить от реципиентных по наличию F-пилей, дополнительного поверхностного антигена, по чувствительности к некоторым РНК-бактериофагам и по ряду физико-химических свойств.

Типы скрещивания:

  • F+ x F-. Передается только F-плазмида. Донорская клетка прикрепляется к реципиентной с помощью F-пили, образуя конъюгационный мостик. Далее происходит разрыв и деспирализация ДНК. Образовавшаяся нить ДНК по каналу конъюгационного мостика 5` концом проникает в клетку-реципиент, где достраивается вторая нить ДНК и восстанавливается кольцевая F-плазмида. F- становится F+.

  • Hfr x F-. Передаются бактериальные гены. Процесс тот же, но F-фактор может не передаться, т.к. конъюгационный мостик рвется раньше, чем вся ДНК-нить успеет перейти в клетку-реципиента.

  • F` x F-. Аналогично скрещиванию F+ x F-. Передается F-плазмида с генами бактериальной клетки, которые потом могут рекомбинировать с гомологичным участком хромосомы реципиента, образуя рекомбинанты.

Соседние файлы в предмете [НЕСОРТИРОВАННОЕ]