- •Билет 1
- •1) Антибиотики. Определение. Классификация по спектру и типу антимикробного действия. Примеры антибиотиков.
- •Билет 2
- •1) Антитела. Основные классы иммуноглобулинов и их свойства. Строение молекул IgG, IgM, IgA.
- •1) Fab; 2) Fc; 3) тяжелая цепь; 4) легкая цепь; 5) антиген-связывающийся участок; 6) шарнирный участок
- •2) Микрофлора тела человека и ее роль в нормальных физиологических процессах и патологиях. Гнотобиология.
- •Билет 3
- •1) Микробиология как наука.
- •2) Реакция связывания комплемента (рск).
- •Билет 4
- •1) Основные методы исследования морфологии микроорганизмов. Простые и сложные методы окраски. Протравы и дифференцирующие вещества. Окраска по Граму.
- •2) Патогенные и вирулентные микроорганизмы. Факторы патогенности.
- •Билет 5
- •2) Токсические вещества, синтезируемые бактериями. Секретируемые и несекретируемые токсины. Классификация, основные свойства и т.Д.
- •Билет 6
- •1) Плазмиды.
- •2) Инфекционный процесс. Стадии и периоды инфекционной болезни, условия возникновения.
- •Билет 7
- •1) Простые и сложные методы окраски, протравы и дифференцирующие вещества. Метод Грама.
- •2) Инфекционные аллергены. Типы. IV тип. Кожно-аллергическая проба.
- •Билет 8
- •1) Энергетический метаболизм микроорганизмов. Дыхание, брожение. Типы брожения. Дыхательная цепь.
- •2) Серологические реакции. Реакция непрямой гемагглютинации (рнга).
- •Билет 9
- •1) Микробиология как наука. Связь с другими науками.
- •2) Вакцина. Классификация, характеристика, требования к вакцинам. Инактивированные и рекомбинантные вакцины.
- •Билет 10
- •1) Микоплазмы. Таксономия, биологические свойства, методы изучения. Роль микоплазм.
- •2) Роль иммунного лизиса (гемолиза, бактериолиза).
- •Билет 11
- •1) Структура бактериальной клетки. Нуклеоид. Биологические функции, методы выявления.
- •2) Дисбактериоз. Профилактика и коррекция. Биопрепараты.
- •Билет 12
- •1) Свойства вирусов. Вирион. Морфологические формы вирусов. Размеры, ультраструктуры, типы симметрии.
- •2) Естественная резистентность организма. Гуморальные факторы врожденного иммунитета, механизм их действия.
- •Билет 13
- •1) Питание микроорганизмов. Способы поступления питательных веществ в бактериальную клетку. Классификация по типам питания. Зависимость от источника углерода и энергии. Факторы роста.
- •2) Методы лабораторной диагностики вирусной инфекции: микроскопический, вирусологический, серологический, молекулярно-генетический. Их характеристика.
- •Билет 14
- •1) Свойства вирусов. Вирион. Химический состав вируса. Универсальная классификация.
- •2) Методы микробиологической диагностики заболеваний (микроскопический, серологический, бактериальный, аллергический, биологический и молекулярно-генетический), их характеристика.
- •Билет 15
- •1) Плазмиды. Классификация, свойства, использование в генной инженерии.
- •2) Методы выделения и культивирования вирусов. Типы клеточных культур, применяемых в вирусологии.
- •Билет 16
- •1) Патогенные риккетсии. Таксономия. Свойства, состав и метаболизм. Культивирование. Роль патогенных риккетсий.
- •2) Комплемент. Свойства, компоненты, пути активации. Участие в серологических реакциях.
- •Билет 17
- •1) Простые и сложные методы окраски. Протравы, дифференцирующие вещества. Окраска по Цилю-Нильсену.
- •Билет 18
- •1) Этапы развития микробиологиии. Роль Луи Пастера.
- •2) Иммуноферментный анализ (ифа).
- •Билет 19
- •1) Этапы развития микробиологии. Роль Коха.
- •2) Реакция преципитации. Метод двойной дифференцировки по Оухтерлони. Иммуноэлектрофорез.
- •Билет 20
- •1) Спирохеты. Таксономия. Свойства, морфология. Методы изучения.
- •2) Учение Мечникова об иммунитете. Фагоцитоз, его роль. Виды фагоцитоза, клеточные стадии. Завершенный и незавершенный фагоцитоз.
- •Билет 21
- •1) Дыхание микроорганизмов. Дыхательная цепь. Методы культивирования анаэробов.
- •2) Реакция агглютинации.
- •Билет 22
- •1) Инфекционный иммунитет. Формы проявления иммунитета. Антитоксический и антимикробный иммунитет. Стерильный и нестерильный иммунитет. Местный иммунитет.
- •Билет 23
- •1) Принципы систематики прокариот. Определитель по Берджи. Таксономия: семейство, род, вид, биовар, серовар, фаговар.
- •2) Диагностика иммунных сывороток. Типы агглютинирующих сывороток. Моноклональные антитела, принципы получения.
- •Билет 24
- •1) Инфекционный иммунитет. Работы Мечникова, Эрлиха. Виды иммунитета по происхождению, формам, проявлениям, характеристика.
- •2) Методы выявления чистых культур аэробов и анаэробов. Метод Дригальского.
- •2 Этап.
- •Билет 25
- •1) Свойства вирусов. Вирион. Химический состав. Функция и локализация нуклеиновых кислот, белков, гликопротеидов и липидов.
- •2) Комплемент, его свойства, пути активации, биологическая функция. Пропердин.
- •Билет 26
- •2) Серологические реакции. Реакция нейтрализации токсина антитоксином.
- •Билет 27
- •1) Бактериофаги. Природа и свойства фагов. Умеренные фаги (профаги). Лизогения. Фаговая конверсия.
- •2) Реакция преципитации, кольцепреципитации. Преципитация в геле по Оухтерлони. Иммуноэлектрофорез.
- •Билет 28
- •1) Антибиотики. Типы устойчивости бактерий, механизмы формирования устойчивости. Множественная лекарственная устойчивость и пути ее преодоления.
- •2) Врожденная резистентность, ее механизмы. Клеточные и гуморальные факторы. Защитные свойства кожи, слизистых. Лизоцим. Комплемент. Пропердин.
- •Билет 29
- •1) Анатомическая структура бактериальной клетки. Цитоплазма, цитоплазматическая мембрана, рибосомы, мезосомы, строение.
- •2) Генетические рекомбинанты. Конъюгация, ее этапы и значение.
- •Билет 30
- •2) Репродукция вирусов, ее этапы и особенности. Рнк-содержащие вирусы.
- •Билет 31
- •1) Генотип и фенотип. Транспозоны. Бактериальные хромосомы и плазмиды.
- •2) Реакция агглютинации и преципитации, их сходства и различия.
- •Билет 32
- •1) Врожденный и приобретенный противовирусный иммунитет. Факторы иммунитета. Биологические свойства интерферонов.
- •2) Микроскопическое изучение микроорганизмов. Метод фазово-контрастной и темнопольной микроскопии.
- •Билет 33
- •1) Рекомбинация у бактерий. Трансформация. Стадии трансформации.
- •2) Реакция нейтрализации вирусов.
- •In vitro.
- •In vivo.
- •Билет 34
- •1) Ферменты бактерий, их характеристика.
- •2) Реакция непрямой гемагглютинации (рнга). Реакция обратной непрямой гемагглютинации (ронга). Реакция нейтрализации антител (рнат).
- •Билет 35
- •1) Структура бактериальной клетки. Цитоплазма. Рибосомы, строение и функции. Цитоплазматические включения, способы их выявления.
- •2) Врожденный и приобретенный противовирусный иммунитет. Интерфероны. Механизмы противовирусного действия.
- •Билет 36
- •1) Плазмиды, их характеристика.
- •2) Дисбактериоз.
- •Билет 37
- •1) Микрофлора организма человека, индигенная и транзиторная.
- •2) Генетическая рекомбинация у бактерий. Трансдукция, типы и значение.
- •Билет 38
- •1) Структура бактериальной клетки. Строение цитоплазматической мембраны и мезосом, их роль.
- •2) Применение культур клеток в диагностике вирусной инфекции. Цитопатическое действие вирусов (цпд), формы проявления.
- •Билет 39
- •1) Этапы развития микробиологии. Роль Луи Пастера.
- •2) Типы культур клеток, методы их культивирования. Питательные среды и солевые растворы.
- •Билет 40
- •1) Хламидии. Таксономия, биологические свойства.
- •2) Лечебно-профилактические и антитоксические сыворотки.
- •Билет 41
- •1) Капсула бактерий, ее условия образования и химическая природа. Значение и методы выявления капсулы.
- •2) Характеристика реакции антиген-антитело.
- •Билет 42
- •1) Бактериофаги, их природа и свойства. Взаимодействие с клеткой.
- •2) Формы инфекций. Классификация инфекций в зависимости от путей передачи.
- •Билет 43
- •1) Патогенность, вирулентность. Факторы.
- •2) Лечебно-профилактические сыворотки. Иммуноглобулины.
- •Билет 44
- •1) Антибиотики. Механизм действия бета-лактамов, аминогликозидов, макролидов, тетрациклинов, хинолонов, полиенов. Методы определения чувствительности.
- •2) Антигены.
- •Билет 45
- •1) Структура бактериальной клетки. Жгутики, типы их расположения, значение. Способы выявления жгутиков. Ворсинки (пили, фимбрии).
- •2) Молекулярная гибридизация. Полимеразная цепная реакция (пцр).
- •Билет 46
- •1) Споры бактерий, их строение, условия образования и причины устойчивости. Методы выявления спор.
- •2) Лечебно-профилактические сыворотки. Иммуноглобулины.
- •Билет 47
- •1) Микроскопические грибы. Морфология плесневелых и дрожжевых грибов рода Candida. Методы изучения грибов и их роль.
- •2) Антигены бактериальной клетки. Локализация, химическая природа, антигенная мимикрия. Протективные антигены.
- •Билет 48
- •1) Внутрибольничная инфекция, ее типы. Госпитальные штаммы. Особенности лабораторной диагностики внутрибольничных инфекций.
- •2) Характеристика современных вакцин. Требования к вакцинам. Живые вакцины.
- •Билет 49
- •1) Генная инженерия.
- •2) Дисбактериоз.
- •Билет 50
- •1) Стерилизация и дезинфекция, основные методы и характеристика. Аппаратура.
- •2) Микрофлора толстого кишечника, количественный и качественный состав. Характеристика. Способ изучения. Значение нормальной микрофлоры для организма человека.
2) Методы выделения и культивирования вирусов. Типы клеточных культур, применяемых в вирусологии.
Культура клеток – клетки какой-либо ткани животных или человека, способные расти и размножаться в искусственных условиях.
Используются в диагностике вирусных инфекций, производстве вакцин, научных исследованиях в области вирусологии.
Универсальный способ выделения и культивирования вирусов.
Удобно то, что цитопатическое действие вирусов видно, легко обнаружить присутствие вирусов.
Культуры клеток создают стандартные условия культивирования вирусов, т.к. состоят из однородных клеток в сходных условиях, не содержат Ат и неспецифических ингибиторов.
Недостатки: трудоемкость приготовления; нередкая зараженность латентными вирусными инфекциями, контаминация (загрязненность) микоплазмами, грибами, бактериями.
Условия получения клеточных культур.
Необходима сбалансированная физиологическая среда со всеми компонентами, необходимыми для жизнедеятельности. Для этого используют: солевые растворы, вирусологические питательные среды.
Питательные потребности клеток обеспечиваются:
наличием глюкозы, витаминов (особо группы В), сыворотки крови, незаменимых АК (глутамат, валин, изолейцин, лейцин, лизин, аргинин, фенилаланин, гистидин, триптофан, метионин, треонин, цистеин, тирозин);
изотоничность и буферность среды – неорганические соли, карбонатный и фосфатный буфер. рН=6,8-7,8. Культуры выращивают в закрытых резиновыми пробками флаконах (чтобы не улетучивался СО2 и не защелачивалась среда);
контроль за реакцией среды – индикаторами. Для точного определения рН используют потенциометры.
К солевым растворам и питательным средам во время приготовления культур клеток добавляют антибиотики (избегание бактериального и грибкового загрязнения): пенициллин, стрептомицин, тетрациклины, доксициклин и другие антибиотики широкого спектра действия. Противогрибковые антибиотики – нистатин, фунгизон. Они могут оказать неблагоприятное действие на культуры клеток.
Для приготовления питательной среды требуется вода высокой степени очистки (культура очень чувствительна к ионам тяжелых металлов) – бидистиллированная.
Работа с культурами в специальной посуде.
Приготовленную культуру клеток инкубируют в термостате при Т=36-38*С
Типы клеточных культур.
Используют ткани: нормальные (зрелые (почечная ткань животных, амниотическая оболочка человека) и эмбриональные) и злокачественно перерожденные.
Эмбриональная и опухолевая ткани – лучше выживают.
Ткани берут в асептических условиях. Или обрабатывают большими дозами антибиотиков. Взятую ткань промывают в соляном растворе Хенкса, подвергают измельчению.
Выделяют: культуры переживающих тканей (живут клетки, но не размножаются), культуры растущих тканей (клетки размножаются).
В вирусологии используют только культуры растущих тканей, которые подразделяются на:
Культуры фиксированных кусочков тканей (плазмированные культуры). Кусочки измельченной ткани – в куриную сыворотку, которая образует фиксирующие сгустки вокруг кусочков. Сверху плазмы аливают солевой раствор Хенкса с а/б, эмбриональный экстракт. Инкубируют 1-2 дня. На фибриновой сети начинают расти новые клетки. На принципе этого метода основан метод органного культивирования (эмбрионы, зачатки органов помещают в условия, обеспечивающие дифференцировку эмбриональной ткани, сохранение структуры, функции культивируемой культуры. Выращиваются на границе питательная жидкость-газ. Используют в научных работах для исследования, например, патогенеза вирусных инфекций).
Однослойные культуры. Это культуры, которые растут, прикрепляясь к твердой среде (стеклу) и образуют монослой (слой толщиной в 1 клетку). Получают обработкой исходной ткани ферментами (трипсин), разрушающими межклеточные связи. Получается взвесь изолированных клеток, которая при росте на стекле прикрепляется к нему и растет в виде сплошного монослоя. Удобно воздействовать на клетки (заражая вирусами) и наблюдать возникающие изменения в динамике. Однородность, хорошая жизнеспособность, можно получать очень большие количества клеток.
Первичные культуры клеток. Способные размножаться только в первой генерации, субкультуры удается получить не всегда. Каждый раз для их приготовления берут исходный материал (эмбриональные или зрелые животные ткани). Получение: яйца инкубируют 7-11 дней, овоскопируют, убеждаются в жизнеспособности эмбриона. Скорлупу срезают на уровне воздушного мешка, извлекают эмбрион в стерильную чашку, отрезают ему голову, обмывают тело раствором Хенкса, измельчают. Кусочки переносят в пробирку. Отмывают ткани от крови. К отмытой ткани добавляют трипсин, перемешивают содержимое пробирки. Мутную суспензию изолированных клеток центрифугируют. Надосадочную жидкость удаляют. К осадку добавляют гидролизат лактальбумина, перемешивают до образования взвеси. Фильтруют. Считают клетки в камере Горяева. Разливают по пробиркам с резиновой крышкой и инкубируют. В пробирке будет культура клеток сплошным монослоем.
Перевиваемые культуры клеток (линии клеток). Это стабильные культуры, способны размножаться вне организма бесконечно долго при должных условиях. Преимущества по сравнению с первичными: работа с ними менее трудоемка, обычно свободны от латентных вирусов, большой диапазон чувствительности ко многим вирусам. Не пригодны для производства вакцин, т.к. есть опасность озлокачествления культур. Без пересева на свежую среду быстро дегенерируют. При длительных пассажах исходные свойства могут изменяться. Для большей стабильности используют клональные культуры (из 1 клетки). Исходную культуру поддерживают, еженедельно пересевая на свежую питательную среду. Живут 2-3 недели. Для пересева клеточную культуру отделяют от стенки и получают ее взвесь (применяют версен – вещество, связывающее катионы кальция и магния, способствующие сохранению целостности пласта клеток и приреплению его к стеклу). Центрифугируют взвесь. К осадку добавляют новую питательную среду. Полученную взвесь разливают по пробиркам с резиновыми пробками, инкубируют. Среды – 199 и Игла.
Культуры диплоидных клеток = полуперививаемые. Диплоидные – т.к. сохраняют диплоидный кариотип. Обладают способностью к пересевам в течение длительного времени – 40-50 пассажей выдерживают (8-10 мес). Затем дегенерирует и гибнет. Получают из первичных культур и эмбриональных тканей человека. Быстро размножаются, живут до 4 нед при еженедельной смене питательной среды, чувствительны ко многим вирусам. Хорошо сохраняются в замороженном состоянии при Т ниже -70*С. Важное условие успешной работы с ними – наличие большого количества ампул с диплоидными клетками ранних делений. Используются для: выделения и культивирования вирусов; производстве культуральных вирусных вакцин. Онкогенно безопасны. Пригодны для культивирования в промышленных масштабах.
Культуры суспензированных клеток.
Это культуры в которых отдельные клетки находятся во взвешенном состоянии в жидкой среде.
Удается получить, если проводить культивирование при постоянном интенсивном перемешивании среды. Хорошо удается с перевиваемыми культурами клеток (обычно в среде Игла). Хемостаты – специальные аппараты с автоматическим обновлением питательной среды.
Суспензированные клетки обладают большой активностью роста, накапливаются в большом количестве, длительно жизнеспособны при регулярной замене среды.
Используются для получения однослойных культур клеток. Или заражения вирусами, которые активно в них накапливаются.
Можно культивировать вирусы в куриных эмбрионах или лабораторных животных.
Плюсом культивирования в куриных эмбрионах является простота, удобство и дешевизна метода, что сделало его широко распространенным. Из недостатков можно отметить невозможность наблюдать ЦПД в динамике, часто не обнаруживается видимых изменений без специальный исследований (РГА, например), пригоден не для всех вирусов, невозможно проследить за нарастанием титра антител. Заражают в аллантоисную полость, хорионаллантоисная оболочку, полость амниона или желточный мешок. Яйцо перед введением надо поставить тупым концом вверх, провести стерилизацию скорлупы и аккуратно сделать окно, не допуская попадания скорлупы внутрь, затем в нужное место внести вирус.
Лабораторных животных используют гораздо реже. Для каждого вируса нужно подобрать свою экспериментальную модель. Например, вирус Коксаки изучают на мышах-сосунках, вирус бешенства - на кроликах и мышах. Интраназально заражают вирусами, которые передаются воздушно-капельным путем, интрацеребрально - нейтротропные. На животных поводят титрование вирусов, реакции нейтрализации, используют для получения вакцин, диагностикумов и противовирусных сывороток.