117. Понятие вектора

Векторы- молекула ДНК, способная самостоятельно реплицироваться, включать чужДНК, переносить ее в реципиентные клетки и стабильно там поддерживать.(фрагменты переносчики молекул НК). Такое встраивание осуществляется in vitro, а затем полученные рекДНК вводят в клетки. Векторная молекула должна содержать точку начала репликации- ori. Для репликации необходимы специфические ферменты и вспомог-е белковые факторы. Их источником служит клетка-хозяин или они кодируются самим вектором. Вектором м. быть любой внехромосомный элемент- плазмида, ДНК фага ил ДНК вируса.

По области использования различают: 1) векторы общего назначения ( клонирование геномных генов, любых фрагментов ДНК). 2) векторы для экспрессии клонированных генов (синтез мРНК и белков). 3) специализированные векторы (секвенирование и мутирование генов, изучение особенностей регуляции клонированных генов, идентификация в клонируемой ДНК промоторов и др. регуляторных генов).По происхождению ДНК векторы делят на: 1) плазмидные ( сущ-т в клетке и вне ее только в виде молекул ДНК.2) фаговые ( в виде молекул ДНК и вирионов. 3) гибридные (сочетают отдельные св-ва плазмид и фагов). По стр-ре ДНК: линейные и кольцевые. По способу поддержаня в клетке: 1) автономные (реплицируются самостоятельно). 2) интегративные (реплицируются в составе клеточной хромосомы). По числу молекул в клетке векторы: 1)малокопийные (несколько копий). 2) мультикопийные ( десятки копий). По числу пепликаторов, имеющихся в векторном геноме: 1)моно- 2) бирепликонные (называют челночными, есл они могут реплицироваться в клетках различных видов).

Вектором называется та часть рекмбинантной ДНК, которая обеспечивает ее проникновение и репликацию в клетке-хозяине. Векторная молекула должна обеспечивать стабильное наследование гибридных молекул. Для обеспечения интеграции чужеродной ДНК в векторной молекуле необходимо присутствие сайтов расщепления рестриктазами, которые должны локализоваться в области, не существенной для репликации векторной молекулы. Наконец, векторная молекула должна нести хотя бы один генетический маркер, позволяющий фенотипически определить ее присутствие в клетке-хозяине. Любая молекула ДНК, обладающая данными свойствами, может использоваться как вектор.

118. Общие свойства векторов.

Вектором называется та часть рекмбинантной ДНК, которая обеспечивает ее проникновение и репликацию в клетке-хозяине. Векторная молекула должна обеспечивать стабильное наследование гибридных молекул. Для обеспечения интеграции чужеродной ДНК в векторной молекуле необходимо присутствие сайтов расщепления рестриктазами, которые должны локализоваться в области, не существенной для репликации векторной молекулы. Наконец, векторная молекула должна нести хотя бы один генетический маркер, позволяющий фенотипически определить ее присутствие в клетке-хозяине. Любая молекула ДНК, обладающая данными свойствами, может использоваться как вектор.

Вектор — молекула ДНК, способная переносить включенные в нее гены в клетку и автономно реплицироваться в ней.

Свойства векторов: 1. вектор должен самостоятельно реплицироваться (стабильно передаваться и наследоваться; обладать маркером для его фенотипического выявления; иметь минимальное число сайтов узнавания для рестриктаз, но количество рестриктаз должно быть значительно) 2. должен обеспечивать репликацию введенного фрагмента 3. дожжен быть небольших размеров 4. имеет стабильность

Основные свойства: а) должен длительное время присутствовать в популяции клеток-хозяев, т.е. реплицироваться автономно или или вместе с хромосомами клеток.Б) в любом векторе должны быть биохимические или генетические маркеры, которые бы позволяли обнаруживать его присутствие в клеткею в) структура векторной молекулы должна допускать встраивание в нее чужеродной последовательности нуклеотидов без нарушения ее функциональной целостности.

Для выполнения своей функции вектор должен отвечать требованиям: 1) быть репликоном, чтобы стабильно наследоваться в клетке.2) иметь селективный маркер, позволяющий отбирать трансформированные вектором клетки (для фенотипического внедрения) 3) иметь минимальное число сайтов рестрикции для внедрения чуж.ДНК.