103. Определение группы крови по системе abo и Rh.

Групповая принадлежность крови определяется по наличию реакции агглютинации при помощи реактивов, содержащих АТ к эритроцитарным агглютиногенам А и В. Реакцию проводят при комнатной температуре (+15°С - +25°С).

1. Определение группы крови системы AB0 с помощью стандартных изогемагглютинизирующих сывороток.

Оснащение: стандартные наборы сывороток системы АВ0 2 серий. Планшет (тарелка) с луночками для определения группы крови с соответствующей маркировкой.

Стандартные сыворотки содержат только агглютинины соответствующих групп крови. Так, сыворотка 0(I) группы содержит агглютинины a и b, А(II) группы — b, B(III) группы — a, AB(IV) группы — агглютининов не содержит. Стандартные сыворотки имеют стандартную окраску: сыворотка 0(I) группы не окрашена (бесцветная), А(II) группы — синяя, B(III) группы — розовая.

Техника:

1) Стандартные сыворотки наносят в две серии в лунки планшета под соответствующими обозначениями таким образом, чтобы получилось 2 ряда по 3 капли (0,1 мл) в следующем порядке: 0(I), А(II), В(III). Если проводят на тарелке, то тарелку делят цветным карандашом на 4 квадрата и в направлении по часовой стрелке обозначают квадраты О(I), А(II), В(III), АВ(IV), а под обозначениями наносят по одной большой капле (около 1 см в диаметре) стандартных сывороток двух серий кроме АВ(IV).

2) Рядом с каждой каплей сыворотки наносят пипеткой по маленькой капле (0,01 мл) исследуемой крови, взятой у донора или из флакона (соотношение кровь: сыворотка равно 1:10). Сыворотку и кровь в каждой паре капель перемешивают уголком предметного стекла (или разными стеклянными палочками). При этом каждую пару капель перемешивают новым уголком стекла.

3) За ходом реакции наблюдают в течение 5 мин, слегка покачивая пластинку (тарелку). По мере наступления агглютинации, но не ранее чем через 3 мин, в капли, где видна агглютинация, добавляют по капле изотонического раствора хлорида натрия (для разрушения иногда наступающей ложной агглютинации) и продолжают наблюдение до истечения 5 мин.

4) Если агглютинация наступает, реакцию считают положительной, если не наступает — отрицательной. Различные сочетания положительных и отрицательных результатов позволяют судить о групповой принадлежности исследуемой крови.

Группа крови	Стандартные сыворотки
	0(I)	А(II)	В(III)
0(I)	–	–	–
А(II)	+	–	+
В(III)	+	+	–
AB(IV)	+	+	+

Примечание: (+) — наличие агглютинации, (–) — отсутствие агглютинации.

Оценка результатов:

а) Отсутствие агглютинации во всех 3 лунках указывает на то, что исследуемая кровь группы 0(I).

б) Реакция агглютинации отрицательная с сывороткой А(II) группы обеих серий и положительная с сывороткой О(I) и В(III) групп (агглютинация в 1-й и 3-й лунках и отсутствие агглютинации в 2-й лунке). Это указывает на то, что исследуемая кровь принадлежит группе А(II).

в) Реакция агглютинации отрицательная с сывороткой В(III) группы и положительная с сывороткой О(I) и А(II) групп (агглютинация в 1-й и 2-й луночках и отсутствие агглютинации во 3-й луночке). Это указывает на то, что исследуемая кровь принадлежит группе В(III).

г) Наличие агглютинации во всех 3 луночках указывает на то, что исследуемая кровь четвёртой группы. В этом случае для исключения наличия неспецифической агглютинации проводят контрольное исследование со стандартной сывороткой группа AB(IV), не содержащей групповые агглютинины (a и b), цвет — жёлтый. Лишь отсутствие агглютинации с этой сывороткой позволяет окончательно отнести исследуемую кровь к АВ(IV) группе.

д) При наличии агглютинации во всех каплях крови, в том числе и группы AB(IV), групповую принадлежность по системе АВ0 определить невозможно. В таких случаях кровь необходимо направить на станцию переливания крови для серологического исследования. Выявление других комбинаций может говорить о неправильном определении групповой принадлежности крови больного.

2. Определение группы крови по стандартным изогемагглютинирующим сывороткам и стандартным эритроцитам (перекрестный способ):

а) кровь берут в сухую пробирку (из вены), центрифугируют или оставляют в покое на 20-30 мин. для разделения на сыворотку и эритроциты;

б) на маркированную тарелку пипеткой в 6 ячеек наносят по одной большой капле сыворотки исследуемой крови из пробирки (0,1 мл), а рядом с ними - по одной малой капле (0,01 мл) стандартных эритроцитов 0(I), A(II), B(III) групп по две серии;

в) дальнейшие мероприятия проводятся аналогично методу с использованием стандартных изогемагглютинирующих сывороток. Реакция со стандартными сыворотками проводится параллельно.

Оценка результатов (оценивают обе реакции):

- отсутствие агглютинации с эритроцитами 0(I) группы и наличие ее с эритроцитами A(II) и B(III) групп - кровь 0(I) группы;

- отсутствие агглютинации с эритроцитами 0(I) и A(II) групп и наличие ее с эритроцитами B(III) группы - кровь A(II) группы;

- отсутствие агглютинации с эритроцитами 0(I) и B(III) групп и наличие ее с эритроцитами A(II) группы - кровь B(III) группы;

отсутствие агглютинации с эритроцитами всех трех групп - кровь AB(IV) группы.

3. Определение группы крови по системе АВ0 с помощью моноклональных АТ (цоликлонов).

Для определения групповой принадлежности крови применяют также стандартные реагенты — моноклональные АТ (цоликлоны анти-А и анти-В). Цоликлоны анти-А и анти-В выпускают в лиофилизированной форме в ампулах по 50 доз. Кроме АТ, реагент содержит краситель (розовый — для цоликлонов анти-А, синий — для цоликлонов анти-В). После растворения цоликлоны переносят в прилагаемые к набору флаконы.

Определение групп крови цоликлонами анти-А и анти-В имеет ряд преимуществ по сравнению с определением изогемагглютинирующими сыворотками: обеспечиваются более высокие качество агглютинации, достоверность и надёжность результатов, исключается возможность панагглютинации, заметно упрощается процедура определения и сокращаются сроки реакции (наступает уже в первые 1–2 с).

Техника:

а) Нанести цоликлоны анти-A и анти-B на белый планшет по одной большой капле (0,1 мл) под соответствующими надписями.

б) Рядом с этими каплями наносят по 1 маленькой капле (0,01 мл) исследуемой крови.

в) Стандартные реагенты и капли крови смешивают и наблюдают за реакцией в течение 2-3 мин.

Группа крови	Моноклональные АТ
	Цоликлон анти-А	Цоликлон анти-B
0(I)	–	–
А(II)	+	–
В(III)	–	+
AB(IV)	+	+

Примечание: (+) — наличие агглютинации, (–) — отсутствие агглютинации.

Оценка результатов:

- Отсутствии агглютинации и с цоликлоном анти-А и с цоликлоном анти-В указывает на то, что исследуемая кровь принадлежит группе 0(I).

- Наличие агглютинации с цоликлоном анти-А, и отсутствие с цоликлоном анти-В указывает на то, что исследуемая кровь принадлежит группе А(II).

- Наличие агглютинации с цоликлоном анти-В, и отсутствие с цоликлоном анти-А указывает на то, что исследуемая кровь принадлежит группе В(III).

- Наличие агглютинации в обеих луночках (как с цоликлоном анти-А, так и с цоликлоном анти-В) указывает на то, что исследуемая кровь принадлежит группе АВ(IV). При подозрении на спонтанную агглютинацию у больных с группой крови AB(IV) проводят контрольное исследование, где вместо цоликлонов анти-А и анти-В используют изотонический раствор хлорида натрия. Кровь можно отне­сти к AB(IV) только при отсутствии агглютинации эритроцитов в физиоло­гическом растворе.

4. Определение резус-фактора экспресс-методом со стандартным универсальным реагентом в пробирке без подогрева.

Оснащение: стандартный универсальный реагент, представляющий собой антирезусную сыворотку группы AB(IV), содержащую 33% раствор полиглюкина; пробирка; изотонический раствор хлорида натрия; скарифика­торы.

Последовательность действий:

1) На дно центрифужной пробирки нанести 1 каплю стандартного универсального реагента и 1 каплю исследуемой крови.

2) Круговым вращением пробирки содержимое размазать по ее внутренней поверхности таким образом, чтобы содержимое растеклось по стен­кам.

3) Наблюдать 3 минуты.

4) Добавить 2-3 мл физиологического раствора хлорида натрия.

5) Содержимое перемешать путем одно-двукратного перевертывания пробирки (не взбалтывая!).

Трактовка результатов:

Наличие агглютинации указывает на резус-положительную принадлежность исследуемой крови. Отсутствие агглютинации свидетельствует о резус-отрицательной принадлежности исследуемой крови.