81. Косвенный флуоресцентный анализ

Флуоресцентный метод может быть использован для прямого и кос­венного количественного анализа. В косвенном флуоресцентном анализе флуоресценция служит индикатором, указывающим окончание процесса определения данно­го иона или вещества. Такие флуоресцентные индикаторы могут ис­пользоваться во всех методах объемного анализа и особенно широко в методе нейтрализации и окислительно-восстановительного титрова­ния. Основное преимущество флуоресцентных индикаторов - воз­можность титровать непрозрачные или окрашенные растворы, а так­же более узкий, чем у обычных индикаторов, интервал перехода ок­раски. Достаточно широко применяется на практике кристаллофос-форная методика анализа, основанная на том, что при спекании со­единений типа А_пВу1 (CaO, ZnS, CdS, ZnSe,Cd, Se и др.), A_n,B_Y (Ga, As, JnP и др.), щелочногалоидных солей и других с соединениями, со­держащими Ag, Си, Mg, редкоземельные элементы образуются т. н. кристаллофосфоры - соединения, которые могут давать люминес­центное свечение при возбуждении светом, электрическим полем и другими методами. Интенсивность свечения кристаллофос-фора про­порциональна содержанию в основе (А_пВуь А_шВу и т.п.) активатора ( Ag, Cu, Mg, T1 и т.д.). Чувствительность таких определений для неко­торых ионов очень велика. Например, чувствительность определения сурьмы с окисью кальция в качестве основы (флюса) ,10"⁶ мкг, в то время как чувствительность флуоресцентного определения сурьмы с морином - 1 мкг. Для висмута нет чувствительной флуоресцентной реакции, а кристаллофосфорным методом с СаО можно обнаружить Bi при его содержании до 10"⁴ мкг. Правда, для определения с приме­нением кристаллофосфоров необходимо значительно больше време­ни, чем с использованием флуоресцентных реакций, т. к. получение кристаллофосфоров требует очень тонкого измельчения, тщательного перемешивания и сплавления.

Важную роль играет хемилюминесцентный анализ, основанный на измерении свечения, возникающего в результате окислительно-восстановительных реакций органических веществ, например люми-нола, люцигенина и др., с катионами переходных металлов, например Fe (III), Со (П), Си (П), Ni .(П), Мп (П). При этом можно определить количественное содержание по изменению интенсивности свечения. Предел обнаружения 5 х 10"⁷ %.

82. Аппаратура и практическое применение люминесцентного анализа.

Флуоресц. метод м. б. использован для прямого и косвенного количественного анализа. Прямые определения ведут непосредственно по флуоресценции исследуемого образца. Они применяются при анализе органич. в-в, т.к. среди неорганических очень мало в-в, способных флуоресцировать самостоятельно. Люминесц. м-д м. б. использован и для качественного и для колич. определения неорг. ионов. Люминес­центный метод может быть использован и для качественного и для количественного определения неорганических ионов. Эти определе­ния основаны на том, что при взаимодействии неорганического иона с органическим соединением может протекать одна из трех реакций, приводящих к:

- возникновению флуоресценции в присутствии определяемого катиона при использовании нефлуоресцирующего реагента. Например, оксихинолин сам не флуоресцирует, но в присутствии различных катионов он дает флуоресцентное свечение разного цвета, т.е. позво­ ляет проводить качественное определение катионов. По интенсивно­ сти свечения может быть определено и количественное содержание катиона. Чувствительность метода при использовании оксихинолина 0,025-1,0 мкг/мл;

—изменению флуоресценции реагента в присутствии анализи­ руемого катиона. Так действуют ализарин, морин, родамин и др.органические соединения, которые изменяют цвет своего флуорес­ центного свечения и его интенсивность в присутствии различных ка­ тионов. Таким методом алюминий может быть обнаружен в мини­ мальной концентрации 0,0005 мкг/мл;

- гашению флуоресценции органического реагента в присутст­вии анализируемого катиона. Так может быть определен ион фтора, который гасит флюоресценцию комплекса алюминия с флуоресцеи-ном.

В косвенном флуоресц. анализе флуор-ция служит индикатором, указывающим окончание процесса определения данного иона или вещества. Осн. преимущество флуоресц. индикаторов – возможность титровать непрозрачные или окрашенные растворы, у них более узкий переход окраски.

Идентификация органич. в-в прямым флуоресцентным методом достаточно затруднительна из-за того, что спектры флуоресценции растворов большинства орган. в-в малоспецифичны. Они чаще всего представляют собой широкие полосы, перекрывающиеся или даже совпадающие у разных в-в. Для снижения неспецифичности и выявления тонкой структуры спектров флуор-ции часто их снимают при низких температурах, при этом подбирают растворители, в которых наиболее отчетливо проявл. структура спектров.

При анализе многокомпонентных объектов приходится делать их предварительное разделение с пом. др. м-дов.

Люминесценцию используют в иммуно-хим. анализе для анализа гормонов, антител, лекарствен. препаратов.

Приборы: 1)фосфороскопы, 2)фотометры, 3)флюорометры, 4)люминоскопы.

1 и 4 – прост. приборы, включающие источник возбуждающего излучения и набор светофильтров. 2 и 3 – имеют след. узлы: источник света, монохроматизатор света, кювета с исследуемым в-вом, узел определения интенсивности излучения.