Окраска по методу Циля-Нильсена

Метод назван именами немецких медиков — микробиолога Франца Циля (1857—1926) и патологоанатома Фридриха Нельсена (1854—1898), которые разработали его в 1882—1883 гг.

Метод окраски микроорганизмов для выявления кислотоустойчивых микобактерий (возбудителей туберкулёза, микобактериозов, лепры), актиномицетов и других кислотоустойчивых микроорганизмов. Кислотоустойчивость микроорганизмов обусловлена наличием в их клетках липидов, воска и оксикислот.

1. Фиксированный на пламени горелки мазок окрашивают в течение 3 – 5 мин. раствором карболового фуксина Циля или окрашенной фуксином бумажкой с подогреванием до появления паров, но не доводя краситель до кипения.

2. Дают препарату остыть, бумажку снимают, сливают избыток красителя, препарат промывают водой.

3. Окрашенный препарат обесцвечивают 5%-ным раствором серной кислоты в течение 3 – 5 с или 96° этиловым спиртом, содержащим 3% по объему хлористоводородной кислоты, несколько раз погружая стекло с мазком в стаканчик с солянокислым спиртом.

4. После обесцвечивания остаток кислоты сливают и тщательно промывают препарат водой.

5. Докрашивают дополнительно метиленовым синим Леффлера 3 – 5 мин.

6. Окрашенный препарат промывают водой, подсушивают и микроскопируют.

При окраске препаратов кислоустойчивые бактерии окрашиваются фуксином в рубиново-красный цвет и не обесцвечиваются кислотой.

Некислотоустойчивые бактерии, а также элементы ткани и лейкоциты под действием кислоты обесцвечиваются и приобретают цвет дополнительного красителя.

Окраска по методу Грама

Метод окраски микроорганизмов для исследования, позволяющий дифференцировать бактерии по биохимическим свойствам их клеточной стенки.

Предложен в 1884 году датским врачом Г. К. Грамом.

По Граму бактерии окрашивают анилиновыми красителями — генциановым или метиловым фиолетовым и др., затем краситель фиксируют раствором йода. При последующем промывании окрашенного препарата спиртом те виды бактерий, которые оказываются прочно окрашенными, называют грамположительными бактериями (обозначаются Грам (+)), — в отличие от грамотрицательных (Грам (−)), которые при промывке обесцвечиваются и воспринимают дополнительную окраску – фуксина Пфейффера.

1. Фиксированный на огне мазок окрашивают генциан-, метил- или кристаллвиолетом 2 мин. (положив на мазок фильтровальную бумагу, пропитанную краской).

2. Наливают раствор Люголя на 2 мин. Мазок приобретает серо-бурую окраску.

3. Сливают раствор Люголя.

4. Для обесцвечивания вносят несколько капель 70° спирта на 2 мин.; следят, чтобы он равномерно распределился по поверхности всего мазка.

5. Препарат промывают водой.

6. Докрашивают фуксином Пфейффера 2 мин.

7. Бумажку снимают, препарат промывают водой.

8. Промывают водой, высушивают, микроскопируют.

Результат окраски: грамположительные бактерии Грам (+), окрашиваются основной краской в темно-фиолетовый цвет, грамотрицательные бактерии Грам (−), воспринимая дополнительную окраску, приобретают ярко-малиновый цвет.

_________________________________________________________________________________

Раствор Люголя— раствор йода в водном растворе йодистого калия_