Этапы приготовления питательных сред, техника разлива, техника подготовки питательных сред к стерилизации и хранения питательных сред.

№

Шаги проведения

Этапы приготовления сред:

1. Варка;

• Варят среды на открытом огне, водяной бане, в автоклаве или варочных котлах, подогреваемых паром.

2. Установление оптимальной величины рН;

• Установление рН сред ориентировочно производят с помощью индикаторных бумажек.

3. Осветление;

• Осветление сред производят, если при варке они мутнеют или темнеют. Для осветления в среду, подогретую до 50⁰С, вливают белок куриного яйца, взбитый с двойным количеством воды, перемешивают и кипятят.

4. Фильтрация;

• Фильтрацию жидких и расплавленных желатиновых сред производят через влажный бумажный или через матерчатые фильтры. Фильтрация агаровых сред производят через ватно-марлевый фильтр.

5. Разлив;

• Разливают среды в пробирки (3-5 мл или по10 мл), флаконы, колбы не более чем на ²/₃ емкости, так как при стерилизации могут намокнуть пробки и среды утратят стерильность.

6. Стерилизация;

7. Контроль.

• Контроль готовых сред:

• для контроля стерильности среды ставят в термостат на 2 суток, после чего просматривают. Если на средах не появятся признаки роста, их считают стерильными и передают для химического контроля по нескольку образцов каждой серии.

• химический контроль сред производят в химической лаборатории.

• Для биологического контроля несколько образцов среды засевают специально подобранными культурами микроорганизмов, и по их росту судят о питательных (ростовых) свойствах среды.

2.

Разливка сред:

1. среду охлаждают до 45-50⁰С

2. разливают в стерильные чашки в асептических условиях;

3. чашки ставят крышкой вверх;

4. сосуд берут в правую руку, левой рукой над пламенем спиртовки открывают пробку мизинцем правой руки, края обжигают.

5. открытую посуду со средой держат в наклонном положении, чтобы избежать попадания в среду микробов из воздуха

6. левой рукой приподнимают с одной стороны крышку чашки Петри и вливают в нее среду из флакона в количестве 15-20 мл.

7. покачивают чашку чтобы среда распределилась равномерно.

8. затем чашку закрывают и дают среде застыть

9. при застывании агара – чашки поворачивают вверх дном, чтобы конденсат не был на поверхности агара.

3.

Стерилизацию питательных сред производят разными способами:

1. простые среды стерилизуют в автоклаве при 120⁰С (1 атм.) 20мин.

2. сложные (с углеводами, молоком, желатином) в автоклаве с незакрытой крышкой или в аппарате Коха при 100⁰С (текучим паром), 30-60мин 3 дня подряд (дробная стерилизация).

3. Посуду со средой обычно закрывают ватно-марлевыми пробками, поверх которых надевают бумажные колпачки. Важно, чтобы при разливе среда не смачивала края посуды, иначе к ним могут прилипнуть пробки. К каждому флакону обязательно прикрепляют этикетку с названием среды и датой их приготовления.

4.

Хранят питательные среды при комнатной температуре в шкафах, желательно специально для них предназначенных. Некоторые среды, например среды с кровью и витаминами, хранят в холодильнике.