С.Ж.АСФЕНДИЯРОВ АТЫНДАҒЫ

ҚАЗАҚ ҰЛТТЫҚ МЕДИЦИНА УНИВЕРСИТЕТІ

КАЗАХСКИЙ НАЦИОНАЛЬНЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ ИМЕНИ С.Д.АСФЕНДИЯРОВА

День

Дата

№

Виды работы

Содержание выполненных заданий

Подпись базового руководителя

IV

24.05.2012

1

2

3

4

5

6

7

8

Приготовить

бактериальную взвесь

по стандарту мутности.

Техника выделения

чистой культуры (аэробов и анаэробов) и пересевов на различные питательные среды.

Понятие об индикаций и идентификации микроорганизмов.

Изучить культуральные свойства микроорганизмов на различных питательных средах.

Изучить биохимическую активность бактерий.

Приготовить серийные разведения антибиотиков.

Определение чувствительности к антибиотикам.

Фаготипирование стафилококков.

№

Шаги проведения

1.

1.1.При некоторых микробиологических исследований возникает необходимость посева определенного количества микробных тел в жидкую или плотную питательную среду. В таких случаях из микробной культуры, предназначенной для посева, пользуются бактериальным стандартом мутности. Для этого готовят взвесь, содержащую в единице объема (1мл) заданного количество микробов.

Стандарт мутности ОСО 42-28-85-02 П¹ для визуального определения концентрации микробной взвеси выпускается Государственным контрольным институтам медицинских биологических препаратов им.Л.А.Тарасевича.

Комплект ОСО 42-28-85-02 состоит из двух пробирок- эталонов, соответствующих 10 и 5 единицам мутности.

Концентрация клеток в 1 мл эталона ОСО на 10 единиц соответствует для кишечной палочки 0,93х10⁹ микробных клеток.

1.2.Перед началом каждого измерения пробирку эталона ОСО держат в руке горизонтальной плоскости, не резко встряхивают в течении 10-15 сек. С амплитудой 50-100 мл. с частотой встряхивания 1-2 раза в секунду.

2.

Исследуемую бактериальную взвесь наливают в объеме 6-7мл в пробирку, входящую в комплемент ОСО, что соответствует объему наполнения жидкостей ОСО

3.

Пробирку ОСО (взвесь должна быть гомогенной, с равномерным распределением частиц взвеси в пробирке)

4

Пробирку ОСО совмещают с исследуемой бактериальной взвесью в вертикальном положении на уровне глаз, приложив плотно к задней поверхности шрифтовою таблицу.

5

Пробирки освещаются люминисцентной лампой мощностью 20-40 в.т. или лампой накаливание 40-60 в.т., можно смотреть при рассеянной дневном свете.

6

Если мутность исследуемой бактериальной взвеси не совпадает с пробиркой эталона ОСО, прибегают к уравниванию мутности, для чего добавляют в исследуемую пробирку физ. раствор или бактериальную взвесь

№

Шаги проведения

1.

Доставленный материал подвергают бактериологическому исследованию в тот же день.

Для проведения посевов необходимо:

1.1.Подлежащий исследованию материал

1.2.Питательные среды

1.3.Бактериологическая петля

1.4.Шпатели

1.5.Пастеровские и градуированные пипетки

1.6.Металлические кюветы или подносы для переноса засеянных чашек

1.7.Ведро или бачок с крышками для сбора отработанного индицированного материала

1.8.Спиртовая или газовая горелка

Почевы делают на жидкие и плотные питательные среды.

Чистой культуры при него называть совокупность однородных микроорганизм, относящихся и одному виду, полученных из массы одной колонии, клетки которой идентичны по морфологическим , танкториальным, культуральным, метаболическим и генетическим признакам.

2.

Для выделение чистых культур анаэробов предложено много различных методов:

1.наибольшие распространение получил метод механического разьединения микроорганизмом.

2.получение чистой культуры методам рассевы в глубине среды (по Коху)

3.выделение истой культуры по методу Дригалького

Для выделения анаэробов применяется среда Китта-Тароцци .

3.

Для создания без кислородных условий используют физические, химические и биологические факторы:

3.1.Физические способы культивирование анаэробов: способ Виньля-Вейона, выращивание анаэробов в условиех вакуума.

3.2.Химические (метод Аристовского)

3.3.Биологический (метод Фортнера)

3.4.Анаэростат

№

Шаги проведения

1.

Микроорганизмы (за исключением облигатных внутриклеточных паразитов- риккетсий, хламидей вирусов и простейших ) культивируют, как правило, на искусственных питательных средах. Среды должны содержать соответствующие исходные вещества, необходимые для роста микробов.

Выделение микроорганизмов из различных материалов и получение их культур широко используется в лабораторной практике для диагностики и инфекционных заболеваний , в научно –исследовательн. работе и т.д.

Выделение культур микроорганизмов – это индикация.

Для идентификации т.е. определения родовой и видовой принадлежности выделенной культуры должны изучаться фенотипические признаки:

1.1. морфология бактериальных клеток в окрашенных или нативных препаратах

1.2.биологические признаки культуры по её способности ферментировать углеводы. Для идентификации могут применяться и другие методы: иммунологические, серологические и т.др .

№

Шаги проведения

1.

Культуральные признаки микробов определяются характером роста их на плотных, жидких и полужидких питательных средах. Культуральные свойства характерны для каждого вида микроба и потому являются важным диагностическим признаком.

Критерии используемые для характеристики колоний бактерий:

2.

Размер колонии: точечные(диаметр менее 1 мм) ,мелкие (диаметр 1-2 мм.),средние (диаметр 1.2 мм.), и крупные (диаметр 4-6 мм и более)

3.

Форма колонии: круглая (правильная) ,амебовидная (неправильная) ,ризоидная ( корневидная)

4.

Характер контура края определяется при рассмотрении колонии под лупой или под малым увеличением микроскопа, различают ровные края и неровные.

Неровные делятся на фестончатые, волнистые края, эрозированные или зазубренные края, бахромчатые, имеющие внешные ворсинки,расплывчатые .

5.

Рельеф колонии: приподнятость над поверхностью питательной среды.

5.

Колонии плосковыпуклые с плоским верхом или крутообрывающимная краями

6.

Колонии конусообразные

7.

Колонии с вдавленным центром

8.

Колонии плоские, стелющиеся по поверхности среды.

Поверхность колонии может быть гладкое (S-колонии) и шероховатые (R-колонии)

9.

Цвет колонии определяется пигментом, который продуцирует культура микроба. Большинство микробов пигмент не образует, колонии их бесцветные или молочно-мутного цвета. Пигментообразующие виды микробов дают колонии различных цветов: кремовые, желтые, золотисто-оранжевые, синие, красные, черные и др.

10.

По характеру консистенции колонии бывают: вязкие, слизистые, пастообразные, легко снимающиеся и размывающиеся по поверхности питательной среды, сухие, хрупкие, рассыпающиеся , волокнистые, плотные.

№

Шаги проведения

1.

Исследование биохимических свойств микробов является обязательным для определения их видовой принадлежности. Для определения биохимической активности используется среды Гисса.

Для диагностики микробов наибольшие значение имеет определение сахарлитических и протеолитических ферментов.

Среды Гисса называют «пестрый ряд» обусловлено тем, то под действием ферментов растущего микроба одни углеводы остаются неизменными и следовательно, цвет питательной цвет среды не изменяется, в то время как другие сахара расщепляются, образуя кислые продукты распада, которые изменяют цвет индикаторы и соответственно цвет питательной цвет среды.

Среда Гисса бывают жидкими и полужидкими .В пробирки с жидкими средами для обнаружения газа опускают «поплавок» запаянным концом кверху.

Некоторые микробы продуцируют и выделяют во внешнюю среду протеолитические ферменты, расщепляющего болон: индол ,сероводород.

2.

Шаги посева на среды Гисса

3.

3.1.Пробки с набором сред Гисса ставят в штатив в один ряд.

3.2.На каждой пробирке пишут название углевода: глюкоза, лактоза, сахароза и т.д.

3.3.Для определения сероводорода в пробирки с бульоном засевают культуру и под пробку вставляют фильтровальную бумажку ,пропитанную щавелевой кислотой для выявления индоло образования ,а для выявления сероводорода бумажку, пропитанную уксусно кислым свину ом.

3.4.Учет результатов: положительная реакция углеводов- образование килоты, среда желтит отрицательная реакция, среда остается без изменения.

Реакция на индол положительная – бумажка розовеет, отрицательная без изменения.

Реакция на Н₂S – положительная- чернеет, отрицательная- остается без изменения.