3.Основные ферменты, которые используются в клинической диагностике

Альфа-амилаза

Альфа-амилаза (1,4-a-D-глюкан глюканогидролаза; КФ 3.2.1.1) относится к 3 классу гидролаз, катализирует гидролиз полисахаридов (крахмала, гликогена, декстринов) до мальтозы. Является эндогликозидазой, т.е. расщепляет внутренние 1,4-гликозидные связи. Вырабатывается поджелудочной и слюнными железами. Поэтому плазма крови человека содержит α-амилазу двух изоЕ типов: панкреатическую (Р-тип) - 40 %, и слюнную (S-тип) - 60 %. В состав молекулы амилазы входят ионы кальция. Активаторы α-амилазы: – хлорид-ионы (Сl^-), бромида, нитрата, холата, фосфата, ингибиторы – антикоагулянты цитрат и оксалат натрия, ЭДТА(Этилендиаминтетраацетат), фториды, сульфат меди и др. соли тяжелых металлов.

Оба изофермента амилазы фильтруются в почках и экскретируются с мочой (65% Р-амилаза).

Нормальные величины активности

в сыворотке крови:

3,3 – 8,9 мг/сек л

в моче:

до 44 мг/сек л

в дуоденальном содержимом:

1,7 – 4,4 мг/сек л

КДЗ:

Определение активности альфа-амилазы имеет большое значение для диагностики заболеваний поджелудочной железы. При остром панкреатите активностьамилазы крови и мочи увеличивается в 10–30 раз. Гиперамилаземия наступает в начале заболевания (уже через 4–6 ч), достигает максимума через 12–24 ч, затем быстро снижается и приходит к норме на 2–6-й день. Уровень повышения сывороточной амилазы не зависит от тяжести панкреатита. Активность α-амилазы (диастазы) в моче возрастает через 6-10 ч после подъема активности в сыворотке и возвращается к норме чаще всего через три дня после подъема.

Активность альфа-амилазы повышается в крови в 3–5 раз при остром аппендиците, перитоните, перфоративной язве желудка и двенадцатиперстной кишки, остром паротите (свинка), вирусном гепатите, раке поджелудочной железы, кишечной непроходимости, холецистите,приеме больших доз этанола, употребления препаратов опия,сульфаниламидов, морфина, тиазовых диуретиков, пероральных контрацептивов.

Снижение активности альфа-амилазыв крови может быть при недостаточной функции поджелудочной железы, циррозе печени, тиреотоксикозе, инфаркте миокарда, некрозе поджелудочной железы.

Лекция 10. Энзимодиагностика План лекции

1. Определение активности α-амилазы (Лек. 9)

2. Определение активности холинэстеразы

3. Определение активности фосфатаз

4. Определение активности аминотрансфераз (АТ)

5. Определение активности γ-глутамилтрансферазы (ГГТФ)

6. Определение активности креатинкиназы (КК)

7. Определение активности лактатдегидрогеназы (ЛДГ)

Холинэстераза -  группа ферментов 3 класса гидролаз, субстратами которых являются сложные эфиры холина с уксусной, пропионовой или масляной кислотами.

В тканях человека обнаружены два различных фермента этого типа:

ацетилхолинэстераза («истинная» холинэстераза; КФ 3.1.1.7), которая

преимущественно находится в нервной ткани, скелетных мышцах, в эритроцитах;

и сывороточная или псевдохолинэстераза, которая широко распространена, присутствует в печени, поджелудочной железе, секретируется печенью в кровь.

Биологическая роль АХЭ: катализирует гидролиз нейромедиатора ацетилхолина: ацетилхолин + Н₂О → холин + уксусная кислота,

в нервных синапсах и обеспечении проведения нервного импульса в синапсе. Кроме того, ацетилхолин–АХЭ участвует в регуляции возбудимости и сократимости гладких мышц и сердечной мышцы, скелетной мышцы.

При ингибировании АХЭ передача нервных импульсов блокирована.

Сывороточная холинэстераза (КФ 3.1.1.8.) выполняет в организме защитные функции. В частности, она предохраняет от инактивации ацетилхолинэстеразу, поскольку с большой скоростью гидролизует ингибитор данного фермента — бутирилхолин. (Холинэстераза является главным ферментом, который метаболизирует новокаин, кокаин и его производные с образованием нетоксичных продуктов распада, поэтому ее используют при передозировке этого психоактивного вещества).

Ингибиторами холинэстеразы являются: фосфорорганические соединения (ФОС), карбаматы.

Принцип метода: Холинэстераза катализирует гидролиз бутирилтиохолина с образованием бутирата и тиохолина. Тиохолин восстанавливает железо (III) в гексацианоферрате до (II).Снижение оптической плотности раствора прямо пропорционально активности холинэстеразы в пробе.

Норма:

Мужчины	5100 - 11700 Е/л
Женщины	4000 - 12600 Е/л

45 -95 мкмоль/с·л; 160 – 340 мкмоль/ч·л

КДЗ:

Активность холинэстеразы снижается при:

нарушении белок-синтезирующей функции печени, наиболее резко ХЭ снижается при тяжелых хронических заболеваниях печени (гепатит), особенно при циррозе, раке печени, а также прихолецистите, желчнокаменной болезни, механической (обтурационной) желтухе, инфаркте миокарда, сердечной недостаточности (застойные явления в печени),злокачественных новообразованиях, ревматизме, мышечной дистрофии, хронических заболеваниях почек, отравлении ФОС (инсектициды и пестициды), применяемыми в сельском хозяйстве; грибами, мышьяком, миорелаксантами;

Активность холинэстеразы увеличивается при:

гипертонии, бронхиальной астме, тяжелых заболеваниях почек (нефрит), ожирении, СД, алкоголизме, язвенной болезни желудка,миоме матки.