Стафилококки

1. Стафилококковый анатоксин (очищенный и адсорбирован­ный). Очищают нативный анатоксин (полученный из α-токсина) путем его осаждения трихлоруксусной кислотой с дополнительной очисткой этило­вым спиртом и адсорбцией на гидрате оксида алюминия. Об­ладает высокими иммуногенными свойствами. Применяется для активной иммунизации с целью профилактики стафилококковых инфекций и для лечения стафилококковых заболеваний.

2. Антистафилококковая плазма Это жидкая часть крови людей, иммунизированных стафилококковым адсорбированным анатоксином. Препарат содержит стафилококковые антитоксины. Выпускают его в двух видах: замороженном (в стерильных пластиковых мешках объемом от 10 до 250 мл) и сухом (в герметически закрытых флаконах по 125 мл) состоянии. Показания к применению антистафилококковой плазмы те же, что и для иммуноглобулина. Противопоказаний для местного введения нет. Внутривенное введение не проводят лицам с повышенной чувствительностью к белку.

3. Иммуноглобулин человеческий противостафилококковый. Гамма-глобулиновая фракция сыворотки крови, содержащая ста­филококковый антитоксин. Готовят из человеческой крови, со­держащей высокие титры антител, или крови доноров, иммуни­зированных стафилококковым адсорбированным анатоксином. Применяется для специфического лечения при стафилококковых заболеваниях.

4. Стафилококковая вакцина. Взвесь коагулазоположительных золотистых стафилококков, инактивированных нагреванием. Применяется с целью лечения при длительно и вяло текущих стафилококковых заболеваниях. Чаще используют аутовакцину ( из штамма, выделенного от больного человека).

5. Стафилококковый бактериофаг (жидкий). Фильтрат фаголизата стафилококков. Применяется наружно, внутрикожно, внутримышечно для лечения при стафилококковых заболеваниях.

Диагностические препараты:

1. Диагностические стафилококковые фаги. Набор из 22 типоспецифических бактериофагов для фаготипирования стафилококков.

Пневмококки стрептококки.

Профилактика.

Для профилактики пневмококковых инфекций разработана пневмококковая поливалентная вакцина, включающая 23 различных полисахаридных АГ сероваров, вызывающих 90 % гематогенных инфекций. Иммунизация показана группам повышенного риска и осуществляется двукратно с 5—10-летним интервалом.

Диагностические препараты:

1. Иммунодиагностикумы, содержащие AT к стрептококкам групп А, В, С, F, G для реакции преципитации в жидкой среде

2. Т-антисыворотки для постановки реакции агглютинации на стекле (метод Гриффитса) для сероидентификации стрептококков

3. М-антисыворотки типоспецифические адсорбированные для постановки реакции преципитации в жидкой среде (метод Лэнсфилд) для сероидент,ификации стрептококков.

4. Набор: состоит из "omni''-сыворотки (антитела ко всем 84 сероварам), поливалентных пуловых сывороток, содержащих антитела к 4-7 сероварам и серогруппам, имеющим буквенное обозначение (А, В, С и др.), и типовых сывороток, входящих в пулы для постановки реакции набухания капсулы по Наифельду..

5. О-стрептолизин- токсин для постановки анти-О-стрептолизиновой реакции (серодиагностика ревматизма)

6. Тест-система для ИФА для идентификации пневмококка

7. Реагенты для реакции коагглютинации (на основе специфических антител, связанных за счет Fc-фрагментов со стафилококком, содержащим А-белок)

8.. Стандартизованный разведенный эритрогенин используют при постановке внутрикожной пробы (проба Дика) для выявления чувствительности к этому токсину (восприимчивость к скарлатине).

Менингококки

Антигенная структура: имеет видоспецифические и полисахаридные антигены, по которым менингококки разделены на семь серологических групп, обозначаемых буквами А, В, С, D, X, У, Z.

Иммунологический метод

Для иммунодиагностики менингококковой инфекции могут быть использованы

следующие реакции.

Реакция непрямой гемагглютинации. С 5-6-го дня болезни титры антител, выявляемых

в РНГА, достигают 1:200 и выше. В качестве антигена в этой реакции используют

взвесь эритроцитов, сенсибилизированных специфическим полисахаридом

менингококка. Реакция ставится по обычной методике.

Реакция иммунофлюоресценции.. Приготовленные из свежих культур менингококков

различных серогрупп препараты обрабатывают сывороткой, а затем

флюоресцирующей сывороткой против глобулинов человека. После этого препараты

изучают в люминесцентном микроскопе.

Реакция связывания комплемента. Ее можно использовать как для выявления

противоменингококковых антител в сыворотке больного, так и для обнаружения

менингококкового антигена в материале от больного. Реакцию можно ставить в

качественном и количественном вариантах, классическим методом и методом

связывания на холоду.

Специфическая профилактика: иммуноглобулин (пассивная),

а также менингококковая химическая полисахаридная вакцина из капсульных полисахаридов менингококков серогрупп А и С, менингококковая вакцина А (активная).

Бактероиды и др. НОА

Б) диагностические

Поли- и моновалентными специфические люминесцирующие сыворотки против основных возбудителей неклостридиальных инфекций. Сыворотки используются для постановки РИФ

Клостридии

Биологические препараты

А) для профилактики и лечения

1) секстанатоксин, в состав которого кроме столбнячного анатоксина и ботулинических анатоксинов типа А, В, Е вхо­дят анатоксины С. perfringens и С. оedematiens; прививки прово­дят по специальным показаниям (военнослужащие, землекопы и др.).

2) противогангренозная антитоксическая сыворотка. Антитоксические сыворотки — антиперфрингенс, антиэдематиенс (антинови), антисептикум. Выпускаются в жидком и су­хим виде после очистки и концентрации методом ферментатив­ного гидролиза (диаферм-3) антитоксических сывороток, полученных при иммунизации лошадей соответствующими анатокси­нами. Применяются для экстренной профилактики и специфи­ческой терапии раневой анаэробной инфекции (газовой ган­грены).

3) Анаэробный бактериофаг – бактериофаги (вирусы клостридий), вызывающие поражение анаэробных бактерий.

Б) диагностические

1) антитоксические сыворотки – для постановки реакции нейтрализации на мышах

Туберкулез

Биологические препараты

А) для профилактики и лечения

1. Живая вакцина BCG, BCG-М. представляет собой аттенуированный штамм M. bovis (так называемые бациллы Кальмета-Герена), полученный учеными путем длительного (13 лет) культивирования на картофельно-глицериновом агаре с добавлением бычей желчи. Иммунизацию проводят внутрикожным введением 0,1 мл вакцины всем новорожденным на 2-5 день в роддоме. Ревакцинацию проводят в возрасте 7, 12, 17, 22 и 27-30 лет (существуют и другие схемы) лицам с отрицательной реакцией Манту с 2 ТЕ. У новорожденных со сниженной резистентностью применяется менее реактогенная вакцина BCG-М, содержащая в 2 раза меньшее количество микробов 2. Живая вакцина, устойчивая к изониазиду Разработана вакцина из штамма M.bovis, устойчивого к изониазиду, что позволило применять ее одновременно с изониазидом у новорожденных от матерей, больных туберкулезом

3. Генно-инженерные и дендритные вакцины находятся в стадии разработки.

Б) диагностические

1. Туберкулин – аллерген для диагностики туберкулеза. Это общее название препаратов, полученных их микобактерий человеческого или бычьего типа, вакцинного штамма BCG, а также M.avium, к ним относится:

PPD-белковый очищенный препарат из микобактерий туберкулеза -туберкулин - для выявления ГЗТ внутрикожным введением туберкулина .

2. Видоспецифические туберкулезные моноклональные АТ, меченные флюорохромами – используются для экспресс-диагностики туберкулеза в исследуемом материале в РИФ (реакции иммунофлюоресценции). Возможно применение для окончательной сероидентификации уже выделенного возбудителя

3. Флюоресцирующие иммуноглобулины для непрямого метода Кунса – содержат флюоресцирующие АТ к гамма-глобулинам животных-продуцентов диагностических сывороток против возбудителей туберкулеза или к гамма-глобулинам сыворотки крови человека. Применяются в реакции непрямой иммунофлюоресценции, направленной на обнаружение как АГ, так и АТ к туберкулезу.

4. Тест-системы для ИФА – в зависимости от вида исследуемого материала ИФА (иммуноферментный анализ) позволяет определять как АГ туберкулеза, так и АТ к ним. В ИФА можно определять титры АТ в сыворотке больного.

5. Туберкулин-диагностикум эритроцитарный туберкулезный антигенный сухой – применяется в РНГА для определения АТ к туберкулезу. Диагностикум содержит эритроциты человеческой и бараньей крови, сенсибилизированный туберкулином.

6. Туберкулезный АГ для РСК – применяется в РСК для определения АТ к микобактериям туберкулеза.

7.Туберкулезные АГ и АТ, меченные радионуклидами (¹²⁵ I, ¹⁴C, ³H, ⁵¹Cr) - для выявления АТ и АГ к туберкулезу в твердофазном РИА(радиоиммунном анализе)

8. Препараты для ПЦР-диагностики туберкулеза – позволяют проводить экспресс-диагностику туберкулеза в ПЦР (полимеразноцепной реакции)

Дифтерия

Биологические препараты

А) для профилактики и лечения

1.АКДС- адсорбированная коклюшно-дифтерийно-столбнячная вакцина, содержит убитые бактерии коклюша, дифтерийный и столбнячный анатоксины

2.АД -анатоксин дифтерийный (обработанный формалином дифт токсин )вводят контактировавшим , имеющим ненапряженный иммунитет.

АДС (адсорбированного дифтерийно-столбнячного анатоксина).

3.АКДС-М, АДС-М, АД-М — анатоксины, содержащие малое количество антигена и используемые для иммунизации людей с предрасполо­женностью к аллергии, однако эти препараты являются менее иммуногенными.

4.Противодифтерийная сыворотка применяется, в основном, с терапевтической целью. Активность препарата 10 000- 20 000 ME. Для лечения сыворотку вводят внутримышечно или подкожно в дозе, которую определяют в зависимости от тяжести заболевания (от 5 000 до 6 000 ME). Форма выпуска по 10 000 ME антитоксина (1 доза)

и 20 000 ME (2 дозы).

Б) диагностические

1.Противодифтерийная сыворотка - содержит в 1 мл 500 АЕ, или специфический гамма-глобулин. - для определения токсигенности в реакции преципитации в геле.

2.ИФА с моноклональными ан­тителами – тест-система для определения токсигенности, в т.ч. и для экспресс-диагностики

3.Антительным эритроцитарным дифтерийным диагностикумом – для постановки РНГА с целью определения гистотоксина, в т.ч. и для экспресс-диагностики

4.Диагностические сыворотки, содержащие АТ к Н-, К- и О-антигенам – для серотипирования возбудителя

5.Набор диагностическиз дифтерийных бактериофагов – для определения фаготипа возбудителя

6.Антигенный эритроцитарным дифтерийным диагностикум – в качестве АГ на поверхности эритроцитов дифтерийный анатоксин, применяется в РПГА с целью выявления наличия ан­титоксических антител (проверяют напряженность антитоксического иммунитета)

7.Токсин Шика - кожная доза дифтерийного токсина (40 DLM). Используют в постановке реакции Шика ( р нейтрализации in vivo).

Коклюш

Серологическое исследование. Серодиагностику проводят при от­рицательных результатах других исследований. Для этого начиная со 2 — 3-й недели заболевания можно исследовать сыворотку крови в РСК или РА. В связи с массовым проведением прививок, приводящих к появлению в крови здоровых людей специфических антител, необходимо исследовать парные сыворотки. Нарастание тит­ра антител в динамике заболевания подтверждает диагноз. Анти­геном в серологических реакциях служит взвесь живых культур бордетелл. В качестве дополнительного контроля рекомендуется при проведении реакций использовать коклюшную и паракоклюшную иммунные сыворотки. Диагностическим титром у непривитых и ранее не болевших считается разведение сыворотки 1: 80.

Наиболее чувствительной и удобной для выявления коклюша является РНГА.

Для оценки иммунологической перестройки организма детей, вакцинированных АКДС-вакциной, проводят реакцию нейтрали­зации антигена с коклюшным эритроцитарным антительным диагностикумом. Эта реакция более чувствительна, чем РА.

С целью серологической диагностики можно также использо­вать ИФА. Этот метод позволяет дифференцировать антитела, обра­зовавшиеся в острый период заболевания от поствакцинальных.

Профилактика: А) специфическая: 1. АКДС-адсорбированная коклюшно-дифтерийно-столбнячная, содержит убитые цельные коклюшные бактерии (в 1 фазе, S-форме) и дифтерийно-столбнячный анатоксин, сорбированный на гидроокиси алюминия. Иммунизация с 3-месяцного возраста (часто вызывает осложнения!), 3-кратно ч/з 4-6 недель.

2. В настоящее время создаются бесклеточные вакцины (ацеллюлярные, субкорпускулярные), содержат очищенные АГ.

Экстренная профилактика: у контактировавших неиммунных лиц: нормальный человеческий иммуноглобулин и/или эритромицин в первые 5 дней после контакта.

Б) неспецифическая. Выявление больных и носителей и их лечение и санация.

Лечение. При тяжелых формах коклюша назначают антибио­тики, нормальный гомологичный иммуноглобулин. Рекомендуют­ся антигистаминные препараты, холодный свежий воздух.

Биологические препараты

А) для профилактики и лечения Для специфической профилактики коклюша применяют адсорбированную коклюшно-дифтерийно-столбнячную вакцину (АКДС). Вводят ее детям начиная с 4 мес. Детям до 1 года и непривитым при контакте с больным вводят нор­мальный человеческий иммуноглобулин.

Б) диагностические

1. Специфи­ческие люминесцирующие сыворотки – содержат АТ против возбудителя коклюша и паракоклюша, меченные флюорохромом; используются для проведения прямой РИФ

2. Коклюшная и паракоклюшная сыворотки – содержат АТ к возбудителям коклюша и паракоклюша; применяются для проведения РА на стекле.

3. Фактор­ные (монорецепторные) диагностическими К-сыворотками (1-14) - содержат АТ к К-аг отдельных сероваров B.pertussis. Используются с целью типирования возбудителя в РА на стекле.

4. Эритроцитарный диагностикум – представляет собой взвесь эритроцитов, сенсибилизированных коклюшными Аг. Используется для определения АТ к коклюшу

5. Коклюшный эритроцитарный антительный диагностикум – содержит эритроциты, нагруженные АТ к возбудителю коклюша; используется для оценки иммунологической перестройки организма детей, вакцинированных АКДС-вакциной в реакции нейтрали­зации антигена

6. Тест –система для ИФА. Позволяет дифференцировать антитела, обра­зовавшиеся в острый период заболевания от поствакцинальных.

Миколазмы.

Лабораторная диагностика инфекций, вызванных М.pneumoniae

Методы	Цель	Применяемые тесты
Культуральные	Выделение возбудителя	Выращивание на различных питательных средах
Иммунологические	Выявление антигена в крови	Реакция агрегат гемагглютинации, ИФА (1:200)
	Выявление антител в крови	ИФА, РСК, РНГА (увеличение титра не менее, чем в 4 раза). Тест-системы –опр IgM-ранняя диагностика
	Выявление антигенов в отделяемом зева, бронхов	РИФ
Молекулярно-биологические	Выявление специфичных нуклеотидных последовательностей	ДНК (РНК)-зонды, ПЦР с праймерами гена белка Р-1 или 16S рибосомальной РНК

Материалом для исследования являются мазки из зева, носогло­точные смывы, мокрота.

Наиболее распространенным методом микробиологической диаг­ностики микоплазмениых инфекций является прямой вариант РИФ с контрастированием фона. Приготовленные из исследуемого материа­ла мазки фиксируют в ацетоне 10 мин и окрашивают 15-20 мин при 37°Слюминесцируюшим иммуноглобулином M.pneumoniae или M.hominis во влажной камере. Затем стекла промывают дваж­ды по 10 мин в фосфатно-буферном растворе (рН 7,2-7,4) и ополаскива­ют дистиллированной водой. Препараты высушивают и изучают в люминесцентном микроскопе. Микоплазмы выявляются в виде ярко-зеленого гранулярного свечения на мембранах эпителиальных клеток и в межклеточном пространстве. При ограниченном количестве эпители­альных клеток в исследуемом материале положительная оценка пред­полагает выявление в препарате не менее 10 ярко-зеленых гранул, четко выделяющихся на красноватом фоне препарата.

Для выявления антител к микоплазмам используют РСК, РНГА, а также реакцию ингибиции метаболизма, ИФА. Наиболее широко применяется РСК.

Диагностическое значение имеет увеличение титра ан­тител в 4 раза и более при исследовании парных сывороток. Титры антител во всех реакциях выявляются в диапазоне 1:20-1:320. Специ­фические антитела, выявляемые в РСК, появляются в конце первой или начале второй недели заболевания, достигают максимума на 3-5-й неделе и держатся до 3-6 мес, затем резко снижаются и к году исчеза­ют. Антитела, выявляемые с помощью РНГА и ИФА, появляются в конце инкубационного, периода, достигают максимума в конце пер­вого месяца заболевания, затем титр их постепенно снижается, через 10-12 мес. антитела исчезают. Ингибирующие метаболизм микоплазм антитела достигают наивысшего уровня через 6 мес. после заболева­ния и сохраняются на высоком уровне до 1-2 лет.

Реакцию связывания комплемента, реакцию непрямой гемагглюти-нации и иммуноферментный анализ ставят по стандартным методикам.

Реакция ингибиции метаболизма микоплазм основана на свой­стве M.pneumoniae ферментировать глюкозу со сдвигом рН среды, что определяется по изменению цвета индикатора (фенолового крас­ного). Добавлением в среду специфического иммуноглобулина или исследуемой сыворотки больного подавляют ферментативную актив­ность микоплазм. Если метаболизм микоплазм подавляется иммун­ной сывороткой, среда остается бесцветной или бледно-желтой.

Для выделения M.pneumoniae из клинического материала (мокрота, плевральная жидкость, легочная ткань, смывы с задней стенки глотки) требуются исключительно богатые среды, содержащие все предшественники, необходимые для синтеза макромолекул, способные обеспечить микоплазмы источниками энергии, удовлетворяющие их потребность в стеролах и фосфолипидах. Осмотическое давление среды для лишенных ригидной клеточной стенки микоплазм, достигаемое за счет ионов калия и натрия, также является необходимым условием их роста. Несмотря на столь богатый состав среды, M.pneumoniae растет крайне медленно, требует 7-14 сут, а часто и гораздо более длительных сроков инкубации. Богатый состав среды и длительные сроки инкубации могут привести к контаминации посева другими, менее требовательными к условиям культивирования, ахолеплазмами и микоплазмами. Наконец, с учетом способности M.pneumoniae к персистенции ее выделение не является 100% подтверждением острой микоплазменной инфекции.

Поэтому в практических лабораториях для диагностики M.pneumoniae-инфекции наибольшее распространение получили иммунологические методы, основанные на выявлении в клиническом материале микоплазменных антигенов или определения специфических антител к ним.

Наиболее распространенной и апробированной является реакция иммунофлюоресценции, позволяющая выявлять микоплазменные антигены в мазках из носоглотки, мокроты и другом клиническом материале. Данный метод обладает высокой специфичностью и значительно более высокой чувствительностью, чем культуральные методы. Антиген M.pneumoniae может быть обнаружен также в сыворотке крови больных. Для этого используют реакцию агрегат-гемагглютинации и иммуноферментный анализ.

Реакция агрегат-гемагглютинации позволяет выявить наличие антигена микоплазм в сыворотке крови больного в концентрации 0,001-0,0001 мг/л. Особенность реакции заключается в том, что для сенсибилизации эритроцитов используют агрегированные глутаратальдегидом белки иммунной сыворотки. При этом антитела вводятся в состав трехмерных белковых комплексов, вследствие чего часть активных центров антител отделяется от поверхности эритроцита и становится более доступной для детерминант антигена. Минимальный диагностический титр составляет 1:8. Иммуноферментный метод позволяет выявлять антиген в сыворотке крови в минимальном диагностическом титре 1:200.

Исключительно важным для диагностики M.pneumoniae-инфекции является исследование на наличие специфических антител к гликолипидному или поверхностному белковому антигену микоплазм. Диагностическое значение имеет нарастание титров антител в динамике болезни в 4 и более раз в парных сыворотках крови. Для выявления антител используют реакцию связывания комплемента (РСК), реакцию непрямой гемаглютинации (РНГА) и иммуноферментный анализ (ИФА). Диагностическое нарастание титров антител обычно удается выявить не ранее чем через 2-3 нед болезни. Ряд современных тест-систем позволяет выявлять специфические IgM антитела в ранние сроки болезни.

Для иммунологической диагностики M.pneumoniae-инфекции существенно и то обстоятельство, что при затяжной вялотекущей микоплазменной пневмонии значительное количество антигенов микоплазм может находиться в составе циркулирующих иммунных комплексов. Диссоциация таких комплексов в сыворотке крови с помощью буфера (рН 2,4) позволяет выявлять антигены микоплазм в высоких титрах.

Следует учитывать, что антигенное родство M.pneumoniae с тканями человека и животных, оказывая прямое воздействие на иммунный ответ хозяина, может не только вызывать аутоиммунную реакцию, но и приводить к ложноположительным результатам при серологических исследованиях.

В последние годы активно разрабатываются молекулярно-биологические методы, основанные на выявлении специфичных нуклеотидных последовательностей ДНК микоплазм. РНК-зонды или ПЦР-диагностические тест-системы выявляют обычно нуклеотидные последовательности 16S рРНК или гена, кодирующего синтез белка адгезии р1. Методы отличаются высокой чувствительностью и теоретически позволяют выявлять единичные клетки микоплазм. Практическое применение этих методов требует особо тщательной постановки реакции с учетом возможной контаминации клинического материала, носительства или персистенции возбудителя. Вследствие этого методы не всегда отличаются высокой специфичностью.

Легионеллы

Методы	Цель	Применение
Культуральные	Выделение возбудителя	Высев на питательные среды – BCYEα агар, угольно-дрожжевой агар, легионеллобактагар
Иммунологические	Выявление антигена в крови	Непрямая иммунофлюоресценция
	Выявление антигена в клиническом материале	Прямая иммунофлюоресценция
	Выявление растворимого антигена в моче	Иммуноферментный метод
Молекулярно-биологические	Выявление специфичных нуклеотидных последовательностей	ДНК (РНК)-зонды, ПЦР с праймерами mip гена, гена 5S или 16S pPHK

Хотя выделение культуры является наиболее чувствительным и специфичным методом диагностики легионеллеза, чаще используются иммунологические методы.

Экспресс-диагностика. Проводят микроскопию импрегнированных серебром мазков, люминесцентную микроскопию. Метод прямой иммунофлюоресценции позволяет обнаружить возбудитель в клиническом материале (материал бронхоскопии, биопсии, плевральный экссудат) в острый период заболевания. К сожалению, применение высокоспецифичного и чувствительного метода связано с применением инвазивных процедур для получения клинического материала, так как в мокроте возбудитель легионеллеза выявляют редко. В связи с этим в последние годы для экспресс-диагностики легионеллеза активно используют ИФА, позволяющий выявить растворимый антиген легионелл в моче в острой фазе заболевания. Метод специфичен только для выявления антигенов L.pneumophila серогруппы 1. Штаммы L.pneumophila серогруппы 1 вызывают не менее 75% случаев легионеллезной пневмонии, хотя известны еще 14 серогрупп L.pneumophila.

ДНК-зонды и амплификационные тест-системы (ПЦР) также используют для диагностики легионеллеза. В качестве клинических образцов исследуют материал из нижней части респираторного тракта. При этом специфичность метода не выше уровня, полученного при прямой иммунофлюоресценции.

Обнаружение АТ в сыворотке больных методами РПГА, РСК или ИФА представляет интерес для эпидемиологических целей, поскольку значимые титры АТ появляются лишь на 2-3 неделе заболевания.Основным серологическим методом диагностики легионеллеза служит непрямая иммунофлюоресценция, позволяющая выявлять диагностическое нарастание титров антител в сыворотке крови больных. Положительный диагноз ставится по не менее чем 4-кратному нарастанию титров антител у реконвалесцентов. Отсутствие носительства или персистенции легионелл повышает его достоверность для подтверждения острой легионеллезной инфекции. Однако при этом диагностика носит в основном ретроспективный характер из-за нарастания титров антител не ранее 14-21-го дня, что заставляет активно использовать методы экспресс-диагностики.

Специфическая профилактика Вакцинопрофилактика отсутствует.

Терапия Бета-лактамные антибиотики не применяются, поскольку большинство штаммов Legionella pneumophila продуцируют β-лактамазы . Лечат макролидами, тетрациклинами, рифампицинами, фторхинолоном. L.micdadei не образует β-лактамаз и чувствителдьна к пенициллинам и цефалоспоринам.

Хламидии

Лабораторная диагностика хламидийных пневмоний

Методы	Цель	Применяемые тесты
Морфоло гические	Выявление морфологических структур возбудителя	Окраска препаратов по Романовскому–Гимзе и др.
Культура льные	Выделение возбудителя	Заражение монослоя культуры клеток McCoy, Hela, La 229
Иммуно логические	Выявление антител в крови к C.trachomatis, C.pneumoniae, C.psittaci	РИФ, РСК, РНГА
	Выявление классов IgG, IgM, IgA к C.trachomatis, C.pneumoniae, C.psittaci	РИФ, ИФА
	Выявление антигена возбудителя в клиническом материале	РИФ
Молекулярно-биологические	Выявление специфичных нуклеотидных последовательностей	ДНК (РНК)-зонды, ПЦР с праймерами гена главного белка внешней мембраны хламидий, гена 16S рРНК

Морфологические методы, основанные на выявлении включений хламидий в мазках отпечатках, окрашенных по Романовскому-Гимзе и раствором Люголя, имеют лишь историческое значение.

Культуральные методы, основанные на заражении монослоя клеток материалом, полученным от больных, получили широкое распространение для выделения C.trachomatis. Через 48-60 ч, соответственно циклу развития хламидий, клетки фиксируют и окрашивают или применяют метод иммунофлюоресценции с использованием моноклональных антихламидийных антител. Для C.pneumoniae применение данного метода не является столь рутинной процедурой и возможно только в специализированных лабораториях, где используется в научных целях. В диагностике орнитоза применяется выделение возбудителя на культуре клеток.

Иммунологические методы получили наибольшее распространение для диагностики хламидийных пневмоний. Традиционно - это методы РСК, РНГА, иммунофлюоресценция, а в последнее время - и ИФА. Методы с использованием диагностикумов на основе родо- и видоспецифических антигенов не отличаются своеобразием. Широкое распространение носительства и персистенции хламидий, наличие трех видов возбудителей, имеющих общий родоспецифический антиген, значительно затрудняют интерпретацию результатов серологической диагностики. Лишь выявление антител в высоких титрах 1:64, 1:256 к одному из видов хламидий при постановке реакции с антигенами трех видов может с высокой степенью достоверности указывать на инфекцию одним из видов хламидий.

Отрицательные результаты серологических тестов также не исключают наличия острого процесса или перенесенной инфекции. Поэтому для хламидийной инфекции особо важным представляется определение классов иммуноглобулинов IgG, IgM, IgA к антигенным эпитопам главного белка внешней мембраны. Определение ранних IgM антител наиболее достоверно для подтверждения острой фазы хламидийной инфекции и может быть использовано для каждого вида хламидий. Двух или трехкратное снижение титров классов иммуноглобулинов может служить косвенным подтверждением успешной терапии хламидийной инфекции.

Выявление возбудителя хламидий с помощью прямой иммунофлюоресценции в отделяемом респираторного тракта отличается достаточно высокой чувствительностью и специфичностью для C.trachomatis. Аналогичный метод для выявления C.pneumoniae c помощью моноклональных антител к видоспецифическому антигену менее эффективен из-за меньшей концентрации возбудителя и низкой (50%) чувствительности метода. Метод ПЦР с помощью праймеров на основе нуклеотидных последовательностей гена белков внешней мембраны позволяет быстро выявлять все 3 вида возбудителя в клиническом материале. Причем чувствительность метода на 25-30% превышает чувствительность культурального метода. Однако специфичность метода оценить гораздо сложнее из-за возможности бессимптомного носительства или выявления фрагментов ДНК длительное время после острой фазы хламидийной инфекции.

Легионеллы

Лабораторная диагностика. При диагностике лихорадки Ку сочетание культуральных и морфологических методов также возможно лишь в специализированных риккетсиологических лабораториях. Микробиологическая диагностика имеет решающее значение, т.к. вариабельность клинической картины затрудняет распознавание болезни. Для выделения и идентификации коксиелл производят заражение куриных эмбрионов или морских свинок (заражают кровью больных внутрибрюшинно). Идентификацию проводят по морфологическим и биологическим признакам. Коксиеллы размножаются преимущественно в вакуолях и фаголизосомах клеток. Дифференциальный признак – отрицательная реакция Вейля-Феликса (реакция основана на сходстве АГ риккетсий с АГ неподвижных (ОХ-) штаммов Proteus vulgaris и способность сыворотки больных риккетсиозами перекрестно агглютинировать штаммы ОХ₁₉, ОХ_2, ОХ_к Proteus vulgaris).

В практических учреждениях наиболее доступна серологическая диагностика с помощью РСК, РПГА, РА, ИФА со специфическими диагностикумами в парных сыворотках (РПГА выявляет короткоживущие, а РСК – долгоживущие АТ) или РИФ. В острой фазе заболевания выявляют антитела к антигену II фазы C.burnetii. Антитела к антигену I фазы выявляют редко, но при обострении хронических форм они могут достигать высоких титров. Для экспресс-диагностики применяют иммунофлюоресценцию, иммуноферментный анализ или ПЦР с праймерами 16S-23S рРНК или плазмиды Q pH1, позволяющие выявить возбудитель в крови, мокроте и других клинических образцах.

Кожные аллергические пробы проводят внутрикожным введением 0,1 мл взвеси убитых и очищенных бактерий. Реакция проявляется через 24-40 часов и бывает положительной уже с 3-7 суток болезни.

Лабораторная диагностика лихорадки Ку

Методы	Цель	Применяемые тесты
Морфологические	Выявление морфологических структур возбудителя	Окраска препаратов по Романовскому–Гимзе и др.
Культуральные	Выделение возбудителя	Заражение куриных эмбрионов или морских свинок
Иммунологические	Выявление антител в крови: к антигену II фазы C.burnetii к антигену I фазы C.burnetii	РИФ, РСК
	Выявление антигена в крови, моче, мокроте	ИФА
Молекулярно -биологические	Выявление специфичных нуклеотидных последовательностей	ПЦР с праймерами гена 16-23S рРНК, плазмиды Q pH1 C.burnetii

Специфическая профилактика. Вакцинируют лиц групп риска от 14 до 60 лет. В группу риска входят: 1) лица, выполняющие работы по заготовке, хранению, обработке сырья и продуктов животноводства, полученных из хозяйств, где регистрируются заболевания скота лихорадкой Ку. 2) лица, выполняющие работы по заготовке и переработке сельскохозяйственной продукции на энзоотичных территориях по лихорадке Ку. 3) лица, работающие с живыми культурами возбудителей лихорадки Ку. Ревакцинация через 1 год.

Для вакцинации используется вакцина Ку-лихорадки М-44 живая сухая накожная, Россия. Однократное введение вакцины сопровождается развитием специфического иммунитета через 3-4 недели после прививки продолжительностью не менее 1 года. Ее вводят однократно, накожно методом скарификации через 2 капли (0,05мл_ разведенной вакцины на расстоянии 30-40 мм на наружной поверхности средней трети плеча. Производят три крестообразне насечки длиной 8-10 мм на расстоянии 3-4 мм друг от друга с втиранием в насечки. Ревакцинацию проводяттой же дозой не ранее, чем через 1 год после первичной вакцинации лицам, в сыворотке которых отсутствуют специфические комплементсвязывающие антитела.

Биопрепарат:

1. Вакцина Ку-лихорадки М-44 живая сухая накожная, Россия – лиофилизированная взвесь живой культуры аттенуированного штамма М-44 Coxiella burnetii, выращенных в желточных мешках куриных эмбрионов. Форма выпуска: комплект – ампула по 0,5 мл (10 доз)+ 1 ампула 0,5% р-ра натрия хлорида. Упаковка 5 комплектов. Хранят при 2-10 ^оС. срок годности – 2 года.