Эпизоотологические особенности

Источники и пути передачи инфекции. Источник инфекции - больное животное, выделяющее вирус через дыхательные пути и особенно с абортированным плодом. В естественных условиях вирус передается воздушно-капельным путем. Факторами передачи инфекции служат загрязненные вирусом корма, вода, подстилка и т.п. Жеребцы могут стать переносчиками вируса при коитусе. Вероятно, собаки, лисицы и птицы могут разносить вирус вместе с кусками абортированных плодов из одного хозяйства в другое. Основные вспышки эпизоотических абортов у лошадей связаны с ГВЛ-4. ГПЛ-4 удается выделить после гибели животного из тканей, взятых в участке пораженных нервов.

Диагностика

Диагноз на РПЛ ставят на основании результатов лабораторных исследований с учетом эпизоотических, клинических данных и патологоанатомических изменений. Если аборты происходят сразу у нескольких кобыл на 7-11-м мес. жеребости, следует подозревать РПЛ. Контагиозность болезни, аборты и отсутствие выраженных признаков приближающегося аборта, быстрое возвращение к нормальному состоянию полового тракта - все это характерно для РПЛ. Диагноз уточняют на основании патологоанатомических изменений и peзультатов гистологического исследования (плевропневмония, перипневмония, очаги некроза в печени абортированных плодов, ацидофильные включения в 50-80% печеночных клеток), выделения вируса путем заражения культуры клеток новорожденных хомячков и беременных морских свинок, его идентификация в РИФ, РТГАд, РН, РСК и выявления AT в сыворотке крови больных и переболевших животных в РН, РСК.

Выделение вируса. Первичное выделение вируса из органов абортированного плода можно проводить на 1-дневных хомячках и культурах клеток.

Взятие и подготовка материала. Наиболее подходящим материалом для выделения вируса являются легкие, печень, селезенка и тимус абортированных плодов или погибших новорожденных жеребят. При рините от больных животных ватным тампоном берут пробы выделений из носовой полости. При наличии у взрослых лошадей параличей для исследования берут кусочки головного и спинного мозга. Вирус легко изолируется из лейкоцитов экспериментально зараженных лошадей в течение 20 дн. Вскрытие абортированных плодов и павших животных производят в возможно ранние сроки. Кусочки органов и тканей массой 30-50 г вырезают с соблюдением правил асептики и сохраняют до исследования при 4˚С или консервируют 50%-ным забуференным р-ром глицерина с рН 7,4. Ватные тампоны с пробками носовых выделений сразу помещают в пробирки с 2 мл р-ра Хенкса или Эрла с 20%-ной нормальной лошадиной сывороткой и антибиотиками. Кусочки органов и тканей от павших животных или абортированных плодов для гистологических исследований помещают в 10%-ный р-р формалина. Патологический материал направляют в лабораторию в термосе со льдом.

Для выделения вируса из патологических материалов используют культуры клеток, 8-12 дн. КЭ, хомячков и мышат-сосунов 3-4-дн возраста. Чаще применяют культуры клеток, используя для их заражения суспензию из образцов легких и печени или материал смывов.

Заражение культуры клеток. При первичном выделении вирус РПЛ хорошо репродуцируется в культурах клеток почечной ткани животных различных видов и особенно в первичной монослойной культуре клеток почки лошади. Если этих клеток нет, для выделения можно использовать культуры клеток почки эмбриона коровы (ПЭК), почки эмбриона свиньи (ПЭС), почки кролика (ПК). Вирус обнаруживается в наиболее высокой концентрации в легких, и именно их взвесью лучше заражать культуры клеток.

Заражение куриных эмбрионов. Используют 8-12-дн КЭ. Испытуемый материал (лучше смесь легочного и печеночного материалов от абортированных плодов) вводят по 0,2 мл в желточный мешок, аллантоисную полость или амнион. Зараженные эмбрионы инкубируют при 37°С 4 дн, ежедневно проводя овоскопию. Гибель эмбрионов в 1-е сут после заражения считается неспецифической. На 4-й дн культивирования эмбрионы вскрывают. Для последующих пассажей используют печень, сердце и мозг эмбриона.

Некоторые штаммы вируса РПЛ требуют для адаптации к эмбрионам нескольких перемежающихся пассажей: хомячки или мышата-сосуны - КЭ. После 3-4 альтернативных пассажей вирус обычно легко пассируется при серийных пересевах на ХАО. Размножение вируса в КЭ сопровождается развитием внутриядерных телец-включений в клетках эктодермы и мезодермы. Эти включения могут быть обнаружены при гистологическом исследовании препаратов, приготовленных из пораженных тканей, после фиксации их абсолютным метиловым спиртом или жидкостью Буэна и окраски гематоксилин-эозином. На ХАО часто видны макроскопически воспалительные «оспинки».

Адаптированный к КЭ вирус может нейтрализоваться иммунной сывороткой, что позволяет использовать их для постановки РН.

Заражение лабораторных животных. Беременных морских свинок заражают интраперитонеально, вводя 0,5-1 мл исследуемого материала. В период между 2-20 дн. после заражения свинки абортируют или погибают. При вскрытии обычно обнаруживают некрозы в печени, петехии в легких, гастроэнтерит. Вирус легко удается выделить из абортированного плода и печени. Хомячков 3-4-дн возраста заражают интрацеребрально (доза заражения 0,03 мл), подкожно или внутрибрюшинно (доза заражения 0,1-0,2 мл). Через 12-24 ч после интрацеребрального заражения хомячки погибают. При гистологическом исследовании у них обнаруживают энцефаломиелит и характерные тельца-включения. После подкожного и внутрибрюшинного заражения хомячки заболевают через 5-8 дн, причем гибнут не все животные. При вскрытии находят гепатит. При гистологическом исследовании в клетках ткани видны характерные тельца-включения. Вирус удается выделить из печени и легких. Многие штаммы вируса требуют предварительной адаптации, для чего следует проводить 2-3 «слепых» пассажа. Это особенно необходимо делать при адаптации вируса к хомячкам 4-6-нед возраста. Мышата-сосуны заболевают при различных методах инфицирования, церебрально, интраназально, внутрибрюшинно). Картина заболевания у них аналогична наблюдаемой у хомячков 3-4-дн возраста, однако не все штаммы вируса удается адаптировать к мышатам, несмотря на длительные «слепые» пассажи. Метод выделения вируса на лабораторных животных требует больших затрат времени и средств и не всегда дает положительные результаты.

Заражение естественно восприимчивых животных. Проводят очень редко. Используют кобыл на 7-10 мес жеребости и молодых жеребят. Материалы вводят внутривенно, интраназально. У кобыл через 20-22 дня после заражения наблюдают признаки поражения верхних дыхательных путей и затем аборт. У жеребят через 2-3 дн развивается катаральная ринопневмония.