Лабораторная диагностика
Дельта-вирус может быть обнаружен в гепатоцитах и в крови больных острой и хронической дельта-инфекцией. Применение иммуноэлектронной микроскопии, при которой используются антитела к HBsAg, позволяет изучать морфологию дельта-вируса. Маркерами, свидетельствующими о наличии дельта-вируса в исследуемом материале, служат дельта-антиген и/или PHK BГD.
Для обнаружения дельта-антигена в биопсийном или аутопсийном материале применяют метод флюоресцирующих антител и иммунопероксидазные методы, когда комплекс дельта-антигена и антител к нему, меченных пероксидазой хрена, визуализируют при помощи гистохимической реакции на пероксидазу.
В сыворотке крови дельта-антиген определяют при помощи иммуноферментного или радиоиммунного анализа лишь только после того, как исследуемый материал обрабатывается неионными детергентами (твин, тритон и др.), разрушающими наружную оболочку вируса, тем самым делая доступными антигенные детерминанты HDAg.
Детекцию РНК BГD проводят при помощи кДНК-гибридизации с зондами, полученными генноинженерным путем, или же методом амплификации кДНК ВГD, позволяющим выявлять до 103 молекул РНК BГD.
Культивирование BГD в клеточных линиях, в том числе печеночного происхождения с интегрированным геномом ВГВ, до сих пор были неудачны. Вместе с тем, описаны эксперименты по продукции BГD в линии клеток гепатомы человека (HUH-7) и почек мартышек (COS7) после их трансфекции РНК ВГD.
От гепатита D защищает вакцинация против гепатита В, так как заражение гепатитом D, как правило, требует наличия в организме поверхностного антигена вируса гепатита В.
ВИРУС ГЕПАТИТА Е, ВГЕ
(Hepatitis E virus)
- возбудитель гепатита Е, ранее известного как гепатита ни-А, ни-В с фекально-оральным механизмом передачи. Описан впервые М. С. Балаяном и соавт. в 1983 г. по данным обследования экскретов добровольца, экспериментально зараженного материалом от больных ГЕ людей. По основным фенотипическим признакам ВГЕ мог бы быть причислен к семейству калицивирусов, однако состав и организация его генома полностью исключают эту таксономическую принадлежность. Можно лишь предполагать, что ВГЕ в единственном пока числе представляет отдельный род вирусов. Изоляты ВГЕ из различных географических регионов (Индия, Бирма, Пакистан, Средне-Азиатские республики СНГ, Мексика) в антигеном отношении сходны между собой, в пределах разрешающей способности использованных для этих целей метода иммуноэлектронной микроскопии, а также серологических реакций с рекомбинантными антигенами.
Частицы ВГЕ представляют собой округлые образования диаметром около 32 нм (вариации от 27 до 34 нм), построенные из идентичных структурных элементов и лишенные оболочки. Вирусным геномом является одноцепочечная РНК позитивной полярности.
Клонирование генома вируса позволило характеризовать РНК ВГЕ по химическому строению и генным функциям. Полноразмерная РНК насчитывают около 7500 нуклеотидных оснований и включает в себя три независимые открытые рамки считывания (ОРС), каждая из которых кодирует синтез определенного белка или группы белков. Геном организован таким образом, что на N - концевой аминокислотной последовательности располагаются неструктурные белки, а на С-концевой - структурные.
Такое расположение белков свойственно калици- и тогавирусам, но не пикорнавирусам. Отдельные структурные белки ВГЕ были экспрессированы в кишечной палочке и с помощью бакуловирусного вектора в клетках насекомых. Такие белки послужили антигенным аналогом ВГЕ при разработке твердофазного иммуноферментного теста для определения антител к вирусу (анти-ВГЕ), а также создания экспериментальных вакцин.
ВГЕ хорошо сохраняется при температуре -20° С и ниже, однако, хранение при температурах выше 0° С и особенно последовательное замораживание-оттаивание ведет к быстрому разрушению вируса. Он чувствителен также к воздействию хлор- или йодсодержащих дезинфектантов. ВГЕ не удавалось адаптировать к размножению в клеточных культурах при использовании обычных методов культивирования, однако, персистентная инфекция была достигнута, когда клетки печени и почек, извлеченные из экспериментально зараженных обезьян на высоте заболевания, ко-культивировали с “бессмертными” клеточными линиями.
Идентификация ВГЕ ранее производилась методом иммуноэлектронной микроскопии, в настоящее время для этой цели широко используются кДНК гибридизация и ПЦР. В специализированных научных учреждениях для выделения может проводиться заражение лабораторных приматов. Известно, что более 10 видов обезьян Старого и Нового Света восприимчивы к гепатитной Е инфекции.
В результате успешного клонирования генома ВГЕ стало возможным изготавливать рекомбинантные и синтетические антигены, пригодные для использования в серологических тестах, главным образом, иммуноферментном анализе.
Профилактика.
Соблюдение правил личной гигиены, употребление доброкачественной питьевой воды и пищевых продуктов. При наличии сомнений в качестве воды ее необходимо прокипятить, а продукты не употреблять в сыром виде.
ВИРУС ГЕПАТИТА G, ВГС
(Hepatitis G virus)
- возбудитель гепатита G . Вирус гепатита G относят к семейству Flaviviredae. Геном вируса представлен одноцепочечной РНК с позитивной полярностью. По своей организации геном ВГС подобен РНК ВГС т.е. структурные гены расположены у 5' области генома, а неструктурные у 3' конца.
На обоих концах генома расположены нетранслируемые зоны. Протяженность РНК ВГG, в различных изолятах вируса колеблется от 9103 до 9392 нуклеотидов. Одна открытая рамка считывания несет информацию о вирусспецифическом полипептиде, состоящем из 2873-2910 аминокислотных остатков.
Основным маркером, применяемым для выявления вируса гепатита G, диагностики и изучения эпидемиологии гепатита G, является PHK, выявляемая методом амплификации с предварительным этапом обратной транскрипции, при которой синтезируется кДНК. Для синтеза олигонуклеотидных праймеров использовали информацию о последовательностях участка РНК, кодирующего хеликазу . Этот выбор был сделан из-за высокой консервативности (83-99%) данного региона в различных изолятах вируса. Однако дальнейшие исследования выявили, что при тестировании некоторых образцов могут отмечаться ложнонегативные результаты, несмотря на наличие в них возбудителя. Учитывая это, для конструирования диагностикумов дополнительно стали использовать праймеры, информация о которых закодирована в 5' нетранслируемом регионе PHK