Иммунологическое и биологическое исследования

Иммунологические методы исследования используют для выявления специфической перестройки организма и серологической диагностики грибковых заболеваний. Для об­наружения специфических антител в сыворотке пробы проводят следующие серологические реакции: агглютинации, преципитации, связывания комплемента, иммунофлюоресценции с соответствующими антигенами.

Аллергическое состояние организма больного выявляют с помощью аллергических кожных проб. Аллергены наносят на скарифицированную кожу по Пирке или втиранием в ко­жу по Моро, внутрикожно по Манту, а также уколом в кожу. С помощью этих проб выявляют аллергические реакции как немедленного, так и замедленного типа, что позволяет оце­нить состояние гуморального и клеточного иммунитета.

Для выявления специфической сенсибилизации лимфо­цитов используют реакции дегрануляции базофилов, агломе­рации и альтерации, тест бластной трансформации, подавле­ния миграции макрофагов и т. п.

Сопоставление результатов серологических и аллерги­ческих реакций оказывается полезным как для диагностики, так и для прогноза течения микозов.

Биологический метод. Используется для лабораторной диагностики глубоких и особо опасных микозов. Основан на заражении животных патологическим материалом от боль­ного или культурой исследуемого гриба. Осуществляется в специальных лабораториях.

Грибковые заболевания (микозы) кожи, вызываемые дерматофитами (дерматомикозы, дерматофитии) этиология

Дерматофиты (Dermatophytes) представляют собой ос­новную группу патогенных для человека грибов. Они представлены 39 видами, объединенными в роды Trichophyton, Microsporum и Epidermophyton (несовершенные стадии разви­тия дерматофитов). 21 из этих видов имеет совершенную стадию развития и отнесен к аскомицетам [GoslenJ. В., КоbayashiG.S., 1993].

Внутри группы дерматофиты имеют как сходства, так и различия. Возможным признаком, объединяющим эти грибы, является то, что в процессе своей эволюции основные пато­генные представители дерматофитов покинули почву, по-видимому, являющуюся основным исходным резервуаром их существования, и приспособились к жизни в тканях челове­ка и животных, содержащих кератин (кератинофилия). Ке­ратин стал основным местом их существования, размноже­ния, роста и питания. Некоторые дерматофиты (антропофилы) используют для этих целей кератинсодержащие ткани человека (роговой слой эпидермиса, волосы, ногти); другие – животных и птиц (зоофилы). Третья небольшая группа па­тогенных дерматофитов осталась в почве (геофилы). Неко­торые виды зоофильных дерматофитов могут одновременно паразитировать в коже, волосах или ногтях человека (зооантропофилы).

Подавляющее большинство дерматофитов имеют повсе­местное распространение, другие приспособились к обита­нию в определенных географических регионах.

Дерматофиты отличаются друг от друга совершенной стадией развития: трихофитоны относятся к роду Artroderma, микроспорумы – к Nanizzia. Совершенная стадия не уста­новлена для гриба Epidermophytonfloccosum.

В культурах дерматофиты различаются по типу образу­емых ими макро- и микроконидий: Trichophyton и Microsporum образуют как макро-, так и микроконидии, у Epi­dermophyton микроконидии отсутствуют. У трихофитонов макроконидии неровные, у микроспорумов – гладкие. Дер­матофиты отличаются от большинства бактерий и сапрофит­ных грибов способностью продуцировать в культурах амми­ак, некоторые из них обладают уреазной активностью и мо­гут проникать в волос in vitro.

Отдельные виды трихофитонов и микроспорумы, парази­тируя в волосах человека и животных, образуют вещества, флюоресцирующие зеленым цветом при исследовании в ультрафиолетовых лучах, пропущенных через фильтр Вуда.

Дерматофиты имеют различную способность избиратель­но поражать те или иные кератинсодержащие структуры ко­жи человека. Трихофитоны в равной степени поражают роговой слой эпидермиса, волосы, ногти; микроспорумы пред­почитают кожу и волосы, изредка поражают ногти; эпидермофитон инфицирует только гладкую кожу.

Вирулентность дерматофитов неодинакова. Первое место по распространенности и степени контагиозности для человека занимает Trichophyton rubrum, второе в различной сте­пени выраженности в определенных условиях – Microsporum canis, Epidermophyton floccosum, Т. mentagrophytes и Т. tonsurans.

Клиническая картина вызываемых дерматофитами мико­зов также весьма разнообразна. Она определяется местом инокуляции гриба, особенностями его расположения в воло­се, характером воспалительной реакции со стороны кожи в ответ на внедрение гриба, экологическими особенностями возбудителя (антропофилы, зоофилы, геофилы вызывают различную по степени выраженности воспалительную реак­цию), родом и видомгриба и т. п. Решающее значение в диагностике микозов, вызванных дерматофитами, имеют микро­скопическое и культуральное исследования возбудителей из очагов поражения.

В пораженных чешуйках кожи и ногтей мицелий дерма­тофитов дает различной густоты сплетения, распадающиеся на отдельные сегменты.

В волосе мицелий располагается правильными рядами по длине и, в зависимости от видовых особенностей и интенсив­ности роста гриба, то сплошь, то частично заполняет волос. Грибы, поражающие волос, делятся на два основных типа: endotrix и ectotrix. Первый тип характеризуется тем, что эле­менты гриба растут преимущественно внутри волоса, не вызывая резкой воспалительной реакции со стороны кожи. При микроскопическом исследовании таких волос граница их представляется четкой. Споры гриба располагаются строго внутри волоса правильными цепочками, частично или сплошь заполняя его. Споры имеют одинаковые размеры; круглую, овальную или квадратную форму. Волосы в этих случаях скручиваются и обламываются. К дерматофитам, по­ражающим волос по типу endotrix, относятся Т. tonsurans, Т. violaceum, Т. soudanense, Т. yaoundei.

Особым образом поражаются волосы при фавусе. В этом случае внутри волоса обнаруживаются немногочисленные нити мицелия и споры, которые никогда не заполняют цели­ком внутреннюю его часть; элементы гриба располагаются по всей длине волоса. Поврежденные грибом ткани волоса об­разуют пустоты, которые заполняются воздухом. Эти пу­зырьки воздуха выглядят под микроскопом длинными чер­ными тяжами, сливающимися и анастомозирующими по хо­ду мицелия. Возможно, что за счет этих пузырьков воздуха пораженный волос внешне становится седым. Оболочка во­лоса при фавусе сохраняется, поэтому волос не обламывает­ся, но становится сухим и безжизненным.

Грибы, поражающие волос по типу ectotrix, растут пре­имущественно вокруг волоса и в эпителии внутреннего волосяного влагалища. При микроскопическом исследовании во­лос представляется окутанным цепочками из круглых спор; граница его нечеткая. К грибам этого типа относятся неко­торые виды трихофитонов и микроспорумы. Споры грибов, поражающих волос по типу ectotrix, могут быть мелкими (3 - 5мкм в диаметре) - Т. Ectotrix microides; крупными (5 – 10 мкм в диаметре) – T. Ectotrix megasporon и проме­жуточными. К мелкоспоровым трихофитонам относится Т. mentagrophytes, к крупноспоровым – T. verrucosum; про­межуточное положение занимают Т. rubrum, Т. megninii.

Практически важно то, что источником заражения Trichophyton endotrix является больной человек, а грибами типа Т. ectotrix – больные животные (рогатый скот, лошади, кош­ки, собаки, мыши и т. п.). Антропофильные трихофитоны вызывают поверхностное воспаление кожи, зоофильные – об­разуют глубокий перифолликулярный инфильтрат, приводящий к гнойному расплавлению волосяных фолликулов и окружающих тканей. Следует, однако, иметь в виду, что, в зависимости от биологической изменчивости, грибы группы Trichophyton endotrix могут вызывать инфильтративно-нагноительные формы микоза, aTrichophyton ectrotrix – поверх­ностные.

Грибы рода Microsporum представлены несколькими близкими, возможно родственными видами. Полагают, что родоначальником является М. canis, aM. audouinii, M. ferrugineum и M. distortium являются его дегенеративными вариантами. Все микроспорумы поражают волос по типу мел­коспорового, реже крупноспорового (M. gypseum) эктотрикса. При микроскопическом исследовании пораженных волос они представляются окутанными чехлом из очень мелких спор, располагающихся мозаично, а не цепочками. При на­давливании на покровное стекло чехол распадается на от­дельные пучки спор. Внутри волоса обнаруживаются лишь небольшие скопления спор и септированные ветвящиеся ни­ти мицелия, расположенные по длине волоса.

Микроспорумы являются весьма контагиозными возбуди­телями микозов кожи и волосистой части головы, особенно у детей; они могут быть зооантропофилами (М. canis), антропофилами (М. audouinii, M. ferrugineum) и геофилами (М. gypseum).

Характеристика основных видов патогенных дерматофитов по Р. А. Аравийскому и Г. И. Горшковой (1995).

Trichophytonton surans (Malmstem) - антропофильный гриб, волосы поражает по типу крупноспорового эндотрикса. Один из наиболее частых возбудителей микоза волосистой части головы (трихофитии) у детей и взрослых женщин, ре­же вызывает микозы гладкой кожи, иногда стоп и ногтей.

Молодая культура гриба ровная, бархатистая, белого цве­та. С возрастом культуры становятся мучнистыми, мозговидно исчерченными с кратером в центре. Цвет колоний имеет различные оттенки — от беловато-серого до желтого и коричневого.

Мицелий септированный, встречаются интеркалярные и концевые хламидоспоры. Микроконидии обильные, грушевидные, постепенно увеличиваются в размерах и превра­щаются в шаровидные формы. Макроконидии встречаются редко.

Trichophyton verrucosum (Bodin) - зоофильный гриб, поражающий волосы по типу крупноспорового эктотрикса. Возбудитель микозов гладкой кожи, волосистой части головы, паразитарного сикоза. Источник заражения - крупный рогатый скот.

Культура растет медленно, поверхность колоний различ­ная; имеет возвышения и морщинистость в центре или в ви­де концентрических зон, центральная из которых приподня­та. Окраска колоний варьирует от белой до охряно-желтой. При микроскопическом исследовании культуры обнаружива­ют мицелий, цепочки артроспор и хламидоспоры. Гриб распространен повсеместно.

Trichophyton rubrum (Castellani) - антропофильный гриб, являющийся наиболее частым возбудителем микозов у человека, в особенности микозов стоп, кистей, гладкой кожи, ногтей, реже – крупных складок тела. Может поражать пушковые волосы, в которых элементы гриба располагаются как по типу эндотрикса, так и по типу эктотрикса (нео-эндотрикс). В чешуйках кожи и ногтей определяются ветвле­ния септированного мицелия и цепочки из спор.

Культуры Т. rubrum полиморфны. Они могут быть пу­шистыми и бархатистыми, мучнистыми или кожистыми. Об­ратная сторона культур имеет красный или малиновый цвет. Мицелий ровный, септированный, имеются обильные каплевидные, удлиненные или грушевидные микроконидии, распо­лагающиеся побокам мицелия. Макроконидии встречаются не у всех штаммов. Хламидоспоры интеркалярные и конце­вые.

Т. rubrum среди возбудителей микозов кожи занимает первое место в странах Европы, в том числе в России.

Trichophyton mentagrophytes (Robin) (сии. Т. granulosum, Т. gypseum) - возбудитель микозов у человека и жи­вотных. Существуют два варианта – interdigitale и gypseum.

Т. mentagrophytes var. Gypseum – мучнистый вариант, наиболее патогенный для животных и человека. Колонии гипсовидно-мучнистые, богаты микроконидиями. Мицелий ровный, ветвистый, септированный. Микроконидии округлые или грушевидные, располагаются гроздьями по бокам мице­лия. В зрелых культурах нередко образуются спирали из 10 - 12 завитков. Макроконидии веретенообразные, состоят из 3 – 5 клеток, свободный конец закруглен.

Var. interdigitale – бархатистый антропофильный вари­ант. Зрелые колонии белые, иногда желтоватые, розовые и даже коричневые; поверхность ровная, реже радиально по­перечная с углублением в центре. Мицелий длинный, вет­вистый, септированный с тонкими завитками и спиралями. Встречаются узловатые органы и интеркалярные хламидоспоры. Макроконидии встречаются редко.

Т. mentagrophytes занимает второе место среди возбудите­лей микозов у человека. Заражение происходит от больного человека или животных (грызунов). Является причиной ми­козов стоп, гладкой кожи, складок, онихомикозов, изредка микоза волосистой части головы. Распространен повсеместно.

Trichophyton violaceum (Sabouraud) - син. Т. gourvilii. Антропофил, вызывает спорадические семейные, школьные заболевания детей и взрослых. Основной возбудитель поверхностного микоза (трихофитии) волосистой части го­ловы, в том числе хронической “черноточечной” трихофитии взрослых женщин; микоза гладкой кожи, редко – микоза стоп и онихомикоза. Волосы поражаются по типу крупноспо­рового эндотрикса. Границы гриба под микроскопом четкие, ясные. Споры крупные, одинакового размера, круглые, оваль­ные, иногда квадратные, неправильной формы. Располагают­ся внутри волоса продольными цепочками, частично или сплошь заполняют волос, напоминая “мешок с орехами”.

В кожных и ногтевых чешуйках представлены в виде по­лигональных спор и септированного мицелия.

Колонии обычно фиолетовые, кожистые, радиально складчатые, бугристые. Наряду с пигментированными коло­ниями встречаются бесцветные или беловато-желтые (var. glabrum). При микроскопическом исследовании обнаружи­ваются тонкие, ровные, септированные нити мицелия. В зре­лых культурах мицелий становится шире, клетки округляют­ся, постепенно превращаясь в цепочки из интеркалярных хламидоспор. Микро- и макроконидии не встречаются.

Trichophyton schonleinii (син. Achorionschonleinii) - антропофил, возбудитель фавуса в странах Европы, Азии, Северной Америки; в России в настоящее время регистрируют единичные случаи. В пораженных волосах элементы гриба расположены внутри волоса, но не заполняют всей его тол­щи. Они представлены нитями мицелия различной длины и толщины и пучками или цепочками спор круглой или много­угольной формы. Характерным является обнаружение внут­ри волоса, кроме элементов гриба, различной величины пу­зырьков воздуха. Морфологические элементы кожной сыпи (скутулы) представляют собой чистую культуру гриба: они состоят из массы спор различной величины и формы и ко­ротких извитых нитей мицелия. В чешуйках кожи и ногтей обнаруживают извитые, ветвящиеся нити мицелия и кучки спор различной формы. Зрелые культуры Т. schonleinii крупные, бугристые, сморчковидные, голые, беловато-желтого цвета, иногда с темно-фиолетовыми и бесцветными сектора­ми. Отмечается выраженный полиморфизм культур – могут быть гипсовые, цереброформные, бархатисто-мучнистые ко­лонии. Под микроскопом выявляется широкий септированный мицелий с причудливыми разветвлениями на концах в виде канделябров, гребешков, “рогов северного оленя”. Ха­рактерны цепочки интеркалярных хламидоспор. Макрокони­дии не встречаются. Т. schonleinii является возбудителем микозов волосистой части головы, гладкой кожи, ногтей. Описаны поражения внутренних органов: мозга, легких и пр.

Иммунитет и средства специфической профилактики. Животные, переболевшие трихофитией в первый год жизни, повторно не бо­леют. Зарегистрированы отдельные случаи естественной невосп­риимчивости животных как к трихофитии, так и к микроспории.

Биопрепараты. Для специфической профилактики трихофитии в неблагополучных хозяйствах используют вакцины ТФ-130 или ЛТФ-130. Телятам их вводят в область крупа двукратно с интерва­лом 10...14 сут в дозах 5, 8, 10 мл, в зависимости от возраста. Через месяц у них формируется длительный иммунитет не менее четы­рех лет.

Больных животных изолируют и лечат с помощью юглона, пре­парата РОСК, однохлористого йода, фенотиазина, трихотецина; условно здоровых вакцинируют.

Microsporum canis (Bodin) (сии. М. lanosum, M. equineum) - зооантропофильный гриб, поражающий волосы по типу ectotrix мелкими круглыми спорами. В чешуйках кожи обнаруживаются извитые нити мицелия, иногда сегментиро­ванные. Колонии пушистые, серые, иногда желтовато-розо­вые с концентрическими кругами. Зрелые культуры бывают мучнистыми, бугристыми в центре. Обратная сторона имеет темно-коричневый или оранжевый цвет.

При микроскопии определяется септированный, бамбуковидный мицелий. Встречаются гребешки, короткие спирали. Характерны веретенообразные с шиповатой двухконтурной стенкой макроконидии. По ходу мицелия отмечают интеркалярные хламидоспоры. Микроконидии грушевидные, встре­чаются непостоянно.

М. canis является причиной микоза волосистой части го­ловы и гладкой кожи, чаще у детей. Гриб распространен повсеместно. Человек заражается от больных кошек, собак, а также больного человека. Пораженные волосы флюоресцируют в лучах Byда.

Microsporum gypseum (Bodin) - геофильный гриб, по­ражает волосы по типу крупноспорового эктотрикса. Выде­ляется из почвы. Поражает лошадей, собак, кошек, человека. Колонии плоские, ровные, вначале бархатистые, позднее муч­нистые. Край колоний белый, к центру появляется неболь­шой розовато-желтый оттенок. Обратная сторона желтая, иногда с бурыми пятнами. Мицелий септированный, ракетовидный с хламидоспорами, располагающимися в цепочки. Встречаются гребешковые формы, спирали. Многочислен­ные грушевидные микроконидии. Макроконидии веретено­образные или цилиндрические, состоят из 4 — 6 клеток, распо­лагаются на простых и разветвленных конидиеносцах. М. gypseum поражает кожу и волосистую часть головы. Флюоресценция пораженных волос в лучах Вуда наблюда­ется не всегда или бывает тусклой.

Microsporum audouinii (Gruby) - антропофильный гриб, возбудитель микоза волосистой части головы и гладкой кожи у детей. Споры в волосе располагаются по типу экто­трикса.

Колонии медленнорастущие, беловато-серого, иногда ры­жего оттенка. Колонии бархатистые, плоские, иногда радиально складчатые с небольшим возвышением в центре. Обратная сторона розовато-коричневая. Мицелий септированный, изогнутый, часто ракетовидный. Имеются интеркалярные хламидоспоры, макроконидии с гладкой или боро­давчатой поверхностью, концевой фрагмент их заострен. Микроконидии удлиненные или грушевидные.

Пораженные волосы в лучах Вуда не флюоресцируют. Распространение гриба повсеместное, одиночные заболева­ния наблюдаются в России.

Microsporum ferrugineum (Ota) - антропофильный гриб, волосы поражаются по типу мелкоспорового эктотрик­са. Вызывает микоз (микроспорию) волосистой части голо­вы у детей.

Колонии полиморфные, кожистые, слегка куполообраз­ные с радиальными складками. Обратная сторона колонии коричнево-оранжевая (“ржавая”). Мицелий ветвистый, ред­ко септированный, иногда с гребешковыми органами. В зре­лых культурах мицелий широкий с крупными интеркалярными и концевыми хламидоспорами. Макро- и микрокони­дии отсутствуют.

Лечение. Для специфической профилактики применяют вакци­ну «Ментовак». С лечебной целью используют мазь юглон или 2%-ю мазь перихотецина на рыбьем жире, препарат РОСК. На протяжении 2...3нед с кормом задают гризеофульвин из расчета 25...30 мг на 1 кг живой массы.

Epidermophyton floccosum (Harz) - единственный представитель рода Epidermophyton. Антропофильный дерматофит. Является возбудителем микозов крупных складок, гладкой кожи, стоп. Распространен повсеместно. Колонии Epidermophyton floccosum коричневые, лимонно-оливковые, при старении белые, складчато-бугристые в центре и пологие к периферии. Встречаются с плоской кожистой поверхнос­тью, некоторые штаммы сплошь или очагами покрыты корот­ким пушком. Мицелий септированный с интеркалярными хламидоспорами, располагающимися нередко цепочками. Микроконидии отсутствуют (отличительный признак от ро­дов Trichophyton и Microsporum). Макроконидии 4 – 5 -клеточные, дубинкообразные, с гладкими стенками, с закруглен­ными свободными концами. Располагаются пучками по 3 - 5 штук, “как плоды банана”.