Стоматологический факультет
Занятие № 2.3.3
Кровяные вирусные инфекции. Лабораторная диагностика ВИЧ-инфекции
ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ:
1. Изучить биологические свойства возбудителя ВИЧ-инфекции.
2. Изучить принципы вирусологической диагностики СПИДа.
СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ЗНАТЬ:
1. Характеристику биологических свойств возбудителя.
2. Основные симптомы ВИЧ-инфекции.
3. Эпидемиологию, патогенез, восприимчивость, иммунитет, механизм
передачи инфекции.
4. Принципы лабораторной диагностики ВИЧ.
5. Основы профилактики ВИЧ-инфекции. Препараты для диагностики и
лечения.
СТУДЕНТ ДОЛЖЕН УМЕТЬ:
• составлять алгоритм лабораторного обследования больного ВИЧ-инфекцией;
• проводить учет и интерпретировать результаты вирусологических исследований с целью диагностики ВИЧ;
• классифицировать препараты в соответствии с их назначением.
СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ИМЕТЬ ПРЕДСТАВЛЕНИЕ:
• о правилах забора материала для исследования;
• об антигенной структуре возбудителя;
• о современных вакцинах для профилактики и лечебных препаратах;
• о ПЦР и иммуноблоттинге.
Работа № 1. Строение вируса иммунодефицита человека.
Цель: Изучить морфологию ВИЧ. Зарисовать.
ВИЧ
Вывод:
_________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Работа № 2. Схема лабораторной диагностики ВИЧ-инфекции.
Цель: составить принципиальную схему лабораторной диагностики ВИЧ-инфекции
(см. теоретическую справку).
И
сследуемый
материал:
____________________
Работа № 3. Серологическая диагностика ВИЧ-инфекции
А) Цель: учесть готовый результат реакции ИФА, поставленной с целью выявления специфических антител к gр 120 и gр 41 в крови обследуемого, с подозрением на инфицирование ВИЧ. Сделать вывод.
Направление:___________________________________________________________________
Ингредиенты:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
Механизм:
Постановка:
Опыт Негативный контроль Позитивный контроль
gр 120
gр 41
Результат:______________________________________________________________________
Вывод:_____________________________________________________________________________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Б) Разобрать принципиальную схему выявления антител к ВИЧ с помощью иммуноблоттинга. Сделать заключение о степени диагностической значимости данного метода.
Иммуноблоттинг – высокочувствительный метод выявления белков, основанный на сочетании электрофареза и ИФА или РИА. Иммуноблоттинг используют как диагностический метод при ВИЧ-инфекции. Антиген возбудителя разделяют с помощью электрофореза в полиакриламидном геле, затем переносят их из геля на активированную бумагу или нитроцеллюлозную мембрану и проявляют с помощью ИФА. Фирмы выпускают такие полоски с «блотами» антигена. На эти полоски наносят сыворотку больного. Затем, после инкубации, отмывают от не связавшихся антител больного и наносят сыворотку против иммуноглобулинов человека, меченную ферментом. Образовавшийся на полоске комплекс (Аг+Ат больного + Ат против Ig человека) выявляют добавлением субстрата, изменяющего окраску под действием фермента.
промыли промыли
*
+ + + субстрат
Ат АГС
Инфицирован Носитель СПИД
Вывод:_______________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
Работа № 4. Иммунологическая лабораторная диагностика СПИДа
1. Цель: определить процент выживаемости больных СПИДом если количество Т-хелперов в 1 мл крови составляет 150.
Вывод:____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
2. Цель: определить тяжесть течения заболевания СПИДом у двух больных, если соотношение Th/Ts у одного больного равно 0,7, а у другого 0,3.
Вывод:____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
3. Цель: Определить стадию инфекционного заболевания и характер инфекционного процесса. При обследовании группы риска выявлен здоровый пациент, у которого в крови
определились антитела к ВИЧ, а вирус выявить не удалось. Соотношение Th/Ts равно 2,0,
содержание Т-хелперов в одном мл крови составляет 800.
Вывод:____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
4. Цель: Определить стадию инфекционного заболевания и характер инфекционного процесса. Больной обратился с жалобами на длительную субфебрильную температуру,
упорный кашель, потерю в весе тела, понос. При вирусологическом обследовании из
крови больного выделен ВИЧ и антитела к ВИЧ. Соотношение Th/Ts равно 0,8,
количество Th в 1мл крови составило 400.
Вывод:____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
5. Цель: Определить стадию инфекционного заболевания и характер инфекционного процесса. Больной с заболеванием саркомой Капоши обследовали на наличие СПИДа. В крови выявлен и вирус и антитела к ВИЧ. Количество Т-хелперов составило 80 на 1 мл крови, а соотношение Th/Ts равно 0.15.
Вывод:____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Самостоятельная работа студента во внеурочное время:
Классифицировать предложенные антимикробные препараты в соответствии с их назначением (профилактические, диагностические, лечебные).
1. Диагностикум gр 120
2.____________________________________________________________________________
3.____________________________________________________________________________
4.____________________________________________________________________________
5.____________________________________________________________________________
6.____________________________________________________________________________
1. Антиглобулиновая сыворотка, меченная пероксидазой
2.____________________________________________________________________________
3.____________________________________________________________________________
4.____________________________________________________________________________
5.____________________________________________________________________________
6.____________________________________________________________________________
1. Интерферон лейкоцитарный человеческий 2.____________________________________________________________________________
3.____________________________________________________________________________
4.____________________________________________________________________________
5.____________________________________________________________________________
6.____________________________________________________________________________
Заполнить контрольные карты по нозоформе:
ВИЧ
Таксономия возбудителя:
Семейство____________________________________________________________________
Подсемейство_________________________________________________________________
Тип__________________________________________________________________________
Морфологические свойства____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________Антигенная структура___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Назовите биологические жидкости больного ВИЧ-инфекцией, содержащие высокие концентрации вируса: ______________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Перечислите возможные пути передачи возбудителя. _________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Какими методами лабораторной диагностики устанавливают наличие ВИЧ-инфекции: ______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Какие патологии в полости рта возникают у ВИЧ-инфицированных?
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
Неспецифическая профилактика (мероприятия)__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Специфическая профилактика (препараты)__________________________________________________________________Лечение (препараты)__________________________________________________________________
Подпись преподавателя__________________________________________________________
ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ СПАРАВКА
Строение ВИЧ. Вирусный геном состоит из 9749 нуклеотидов и включает в себя 11 генов, которые осуществляют контроль за экспрессией регулирующих структур. Генетический материал ретровирусов представлен РНК (две одинаковых цепи). Согласно литературным данным, геном ВИЧ содержит 6 регуляторных генов. Они не только кодируют соответствующие белки, но каждый из них еще влияет на другие структурные и регуляторные гены (то есть на самих себя).
По отдельности или совместно регуляторные механизмы экспрессии генов ВИЧ определяют следующие варианты сосуществования клетки и вируса:
вспышка репликации вируса;
устойчивый умеренный уровень размножения вируса;
состояние покоя.
Gag-ген отвечает за синтез трех протеинов сердцевины (P 17, P 25, P 15).
Pol-ген кодирует синтез ферментов обратной транскриптазы (ревертазы).
Env-ген кодирует синтез двух гликопротеидов оболочки Gp-120 и Gp-41. Первый из них ответственен за связывание с CD4-рецепторами, второй – за образование мостиков между липидными оболочками вируса и зараженной клетки, вследствие чего сердцевина ВИЧ оказывается внутри клетки-мишени.
Tat-ген - положительный регулятор, активизирующий все гены, а также отвечает за синтез белка-трансактиватора. Способен повысить скорость репликации вирусов в 1000 раз путем активации других вирусных генов.
Rev-ген - избирательный регулятор, репрессирующий регуляторные гены, но активирующий структурные гены, отвечает за умеренную репликацию вирусных частиц. Осуществляет возможность перехода от скрытой инфекции к активной форме размножения вируса. В ходе репликации взаимодействие между генами Tat и Rev способно сдерживать размножение вируса, в результате чего устанавливается устойчивое равновесие между ними с умеренным воспроизводством ВИЧ. Ограниченная репликация ВИЧ позволяет ему длительно воспроизводиться, не убивая зараженные клетки. Следовательно, подобная форма генетической регуляции может быть адаптивным признаком ретровирусов, хозяевами которых являются виды с длительным сроком жизни (человек, приматы).
Vif-ген кодирует белок P 23, который отвечает за эффективное заражение вирусом других клеток, не несущих CD4-структуры (В-клетки, ЦНС) при его отпочковывании от клетки-хозяина.
Vpr-ген и Vpu-ген изучены недостаточно.
Nef-ген – негативный регулятор, угнетающий все гены, способен замедлять либо прекращать размножение вирусных частиц вплоть до полного покоя.