4.2.2.Частная вирусология (лекции).

1. Обзор вирусов, вызывающих болезни у нескольких видов животных.

2. Обзор вирусов, вызывающих болезни у крупного и мелкого рогатого скота.

3. Обзор вирусов, вызывающих болезни у свиней и лошадей.

4. Обзор вирусов, вызывающих болезни у плотоядных и кроликов.

5. Обзор вирусов, вызывающих болезни у птиц.

4.2.3. Тематика самостоятельной работы.

На самостоятельную работу выносится изучение следующих вирусов:

вирус б. Ауески,

вирусы гриппа,

вирус чумы крупного рогатого скота,

вирус контагиозного пустулезного дерматита овец и коз,

вирус африканской чумы свиней,

вирус б. Тешена,

вирус африканской чумы однокопытных,

парвовирус энтерита собак,

вирус инфекционного бронхита кур,

вирус инфекционного бурсита кур.

По каждому вирусу необходимо изучить следующие вопросы:

1. систематическое положение.

2. Спектр патогенности.

3. Антигенная вариабельность.

4. Устойчивость вирионов.

5. Культивирование.

6. Вызываемые заболевания, включая:

а) клинические, патологоанатомические и эпизоотологические особенности,

б) методы лабораторной диагностики (индикации, изоляции и идентификации вируса) и профилактики.

5.Лабораторный практикум

1. Общая вирусология.

1.Правила работы с вируссодержащими материалами.

Основные требования, предъявляемые к работе с вируссодержащими материалами. Методы и средства, обеспечивающие выполнение этих требований. Учет, хранение и поддержание штаммов вирусов в лабораториях.

2.Получение и транспортировка патологического материала.

Цели получения патологического материала. Правила взятия патматериала от больных животных и трупов. Методы консервирования вирусов в патматериале. Демонстрация заполнения термоса охлаждающими смесями и погружения в них патматериала. Этикетирование и составление сопроводительной записки. Индивидуальная тренировка по взятию патологического материала от больных животных и подготовка его к транспортированию в лабораторию.

3.Индикация вирусов в патологическом материале по обнаружению вирионов и вирусных телец-включений.

Принцип электронной микроскопии, его достоинства и недостатки. Приготовление препаратов. Электронная микроскопия вирусов. Ознакомление и схематическая зарисовка вирионов разных семейств вирусов по электронным микрофотографиям. Демонстрация вирионов вируса оспы в мазках, окрашенных по Морозову. Вирусные тельца-включения, их природа, особенности и диагностическая ценность. Изучение и зарисовка телец Б абеша-Негри в препаратах.

4.Использование в вирусологии лабораторных животных.

Цели использования лабораторных животных в вирусологии. Демонстрация поражений белых мышей, зараженных вирусом эктромелии. После демонстрации преподавателя студенты самостоятельно отрабатывают различные методы заражения белых мышей и кроликов, проводят вскрытие зараженных мышей, берут от них паренхиматозные органы и получают суспензии вируса. Ставят бактериологический контроль полученной суспензии на стерильность.

5.Использование в вирусологии куриных эмбрионов.

Цели использования куриных эмбрионов в вирусологии: преимущества куриных эмбрионов перед лабораторными животными. Строение куриных эмбрионов. Демонстрация овоскопирования и различных методов заражения куриных эмбрионов. Самостоятельная работа студентов по заражению куриных эмбрионов на ХАО (вакцинными штаммами вирусов оспы кур или инфекционного ларинготрахеита птиц) и в аллантоисную полость (вирусом ньюкаслской болезни штаммами В или Н).

На следующем занятии после объяснения о формах патогенного действия вирусов на куриные эмбрионы и демонстрации методов их вскрытия студенты самостоятельно вскрывают зараженные ими куриные эмбрионы, получают аллантоисную и амниотическую жидкости, извлекают пораженные ХАО и зародыш и производят в них индикацию вирусов по патологоанатомическим изменениям. Индикацию гемагглютинирующего вируса в аллантоисной жидкости производят с помощью капельной реакции гемагглютинации.

6.Использование в вирусологии культур клеток.

Однослойные первично-трипсинизированные культуры клеток и методика их получения. Растворы и питательные среды для культур клеток. Получение студентами первичных культур клеток куриного эмбриона. Экспериментальное заражение культур клеток (вирусом ньюкаслской болезни, ИЛТ и др.). Практическое обнаружение цитопатического действия, его формы и использование в вирусологической практике. Ознакомление с различными формами ЦПД по фиксированным (в том числе окрашенным) препаратам. Воспроизведение феномена гемадсорбции. Демонстрация бляшек по Дюльбекко.

7.Титрование вирусов.

Понятие о титре вируса. Единицы количества вируса: ООЕ, БОЕ, ЛД , ИД , ЭЛД , ЭИД , ЦПД , ГАЕ. Выражение в них титра вирусов. Методика титрования и расчета титра вируса в ООЕ и БОЕ, в единицах 50%-го инфекционного действия. Решение предварительно составленных задач на расчет тира вируса. Методика определения и выражение титра вируса в единицах гемагглютинирующего действия. Практическое определение титра вируса ньюкаслской болезни в РГА.

8.Использование в вирусологии реакции торможения гемегглютинации.

Принцип РТГА. Схемы РТГА с разведением сыворотки и с разведением вируса. Задачи, которые позволяет решать РТГА. Практическая работа по определению титра антител к вирусу ньюкаслской болезни (или другому гемагглютинирующему вирусу). Учет результатов и их интерпретация. Достоинства и недостатки РТГА.

9.Использование в вирусологии реакции нейтрализации.

Принцип реакции нейтрализации и ее модификации. Схемы РН в различных модификациях и задачи, которые они позволяют решать. Учет заранее подготовленной РН (по ЦПД на фиксированных культурах клеток) и расчет титра антител. Определение индекса нейтрализации. Достоинства и недостатки реакции нейтрализации.

10.Использование в вирусологии реакции диффузионной преципитации в агаровом геле.

Принцип РДП. Задачи, которые РДП позволяет решать. Техника постановки РДП на предметных стеклах. Практическая постановка РДП с целью идентификации вирусов. Учет результатов РДП и их интерпретация. Достоинства и недостатки РДП.

11.Использование в вирусологии реакции непрямой гемагглютинации.

Принцип РНГА и ее модификации. Задачи, которые позволяет решать РНГА. Достоинства и недостатки РНГА. Методика получения сенсибилизированных эритроцитов. Титрование антител к вирусам в РНГА. Использование РНГА при диагностике вирусных болезней животных.

12.Использование в вирусологии реакции иммунофлуоресценции.

Люминесцентный микроскоп. Методика постановки РИФ. Практическое обнаружение вирусных антигенов в препаратах методом РИФ (можно использовать биофабричные диагностические наборы). Микроскопия и оценка результатов. Достоинства и недостатки РИФ.

13.Использование в вирусологии метода иммуноферментного анализа.

Принцип ИФА. Твердофазный ИФА. Схемы и методика его постановки для решения различных задач. Диагностическая ценность метода. Его преимущества перед РИФ. Демонстрация твердофазного ИФА. Достоинства и недостатки метода ИФА.

14.Использование в вирусологии полимеразной цепной реакции.

Принцип ПЦР и ее использование в диагностике. Основные компоненты ПЦР и аппаратура. Правила работы в лаборатории, где используют ПЦР для диагностики вирусных болезней животных. Возможности ПЦР, ее достоинства и недостатки. Демонстрация учета результатов ПЦР методом электрофореза в агарозовом геле.

2. Частная вирусология.

1.Лабораторная диагностика бешенства.

Общая схема диагностики бешенства. Демонстрация с зарисовкой телец Бабеша-Негри и особенности схемы РДП на бешенство. Индивидуальное изучение положительных и контрольных препаратов на бешенство в РИФ. Разбор метода биопробы на бешенство.

2.Лабораторная диагностика оспы.

Методы диагностики оспы. Биопроба на оспу кур на петухе (заражение в перьевые фолликулы и на скарифицированный гребень). Через 5-7 дней получение мазков из пораженных фолликулов, их окраска по Морозову и вирусоскопия.

3. Лабораторная диагностика ящура.

Общий принцип диагностика ящура. РСК: принцип, возможности, достоинства и недостатки. Комплемент и его свойства. Особенности РСК с вирусными антигенами. Схема РСК для идентификации типа вируса ящура. Демонстрация главного опыта РСК для определения типа вируса ящура.

4.Дифференциация вирусов гриппа птиц и ньюкаслской болезни в РТГА.

Схема РТГА с разведением вируса. Самостоятельная работа студентов по постановке РТГА с разведениями неизвестного вируса и сыворотками к вирусам ГП и БН. Интерпретация полученных результатов.

5.Решение диагностических задач.

Заранее готовится описание 15-20 вирусных болезней разных видов животных (клиника, патанатомия, эпизоотология). На занятии всей группе дается описание одной болезни (например, парагриппа телят) и задание ответить на вопросы:

а) Какие (какое) вирусные заболевания можно предполагать?

б) Какой патологический материал и как надо взять в этом случае?

в) Какими методами, в какой последовательности и с какими целями необходимо исследовать этот патологический материал?

После самостоятельной работы студентов целесообразно провести разбор решения задачи всей группой с широким обменом мнениями и участием преподавателя. Остальные задачи раздаются студентам индивидуально и их решения проверяются.