2.1.2. Характеристика возбудителя

Первый представитель этой группы вирусов был выделен L.Kilham от крыс в 1959 г. Парвовирус собак (ПВСоб) впервые выделил и описал Siegl в 1976 г. Он показал широкое распространение болезни в США. ПВ-эпизоотии в 1978 - 1981 гг. были зарегистрированы во многих странах: в Австралии, Канаде, Англии, Нидерландах, Италии, Франции и др. За последние годы наблюдается эволюция возбудителя ПВИСоб. Считают, что ПВСоб (CPV-2) реже циркулирует в странах Европы, США и Японии и, после 1980 г. в основном, замещен АГ вариантом (CPV-2a). Оба вируса различаются минимум по 6-и нуклеотидам генома и соответствующим аминокислотам капсидного белка. Однако иммунизация собак против ПВИСоб-2 защищала их от заболевания при последующем инфицировании ПВИСоб-2а. Несмотря на это последний продолжает распространяться в популяции вакцинированных собак.

Устойчивость. Вирус обладает высокой устойчивостью к нагреванию (стабилен при прогревании при 60°С в течение 1 ч), рН среды 3, дезинфектантам, воздействию факторов внешней среды. Он устойчив к действию эфира, хлороформа, спирта и чувствителен к хлориду натрия, соде.

Антигенная структура. Различные штаммы ПВСоб сходны по АГ структуре и имеют 3 белка (А, В, С). Канадскими учеными в составе вирионов ПВИСоб, энтерита норок и панлейкопении кошек выявлен 4-й белок Д, который, вероятно, является продуктом фермента­тивного расщепления более крупного белка. Составлена специфическая эпитопная карта с вариантом последовательностей гена каждого белка у ПВСоб, кошек, норок и енотов.

Антигенная вариабельность и родство. Возбудитель ПВИСоб близок по своим свой­ствам вирусу панлейкопении кошек. Предполагается, что он может быть мутантной формой этого вируса. Вирусу энтерита норок вирус панлейкопении кошек близок, но не идентичен, как и ПВСоб-вирусу энтерита норок, отличаясь от них по АГ структуре, ГА свойствам, спектру патогенности для животных и строению генома. ПВСоб и вирус панлейкопеиии кошек различаются менее чем на 1% по нуклеотидной последовательности ДНК, но поражают разных хозяев. ПВСоб имеет родство с парвовирусами крыс, свиней и мышей. При ЭМ ПВСоб и панлейкопении кошек (шт.Olihero) не различимы, однако первый из них размножался в культурах клеток FLF-3 и МДСК, а второй лишь в культуре FLF-3, ноне в культурах МДВК, МА-104 и HeLа. Обнаружена АГ общность всех парвовирусов, одна­ко ПВСоб четко дифференцируется от парвовирусов кошек (панлейкопении) и норок (энтерита). Два последних вируса полностью идентичны. При сравнении ПВСоб и группы ВПК/ВЭН (панлейкопения кошек/энтерит норок) выявлено до 80% гомологии рестрикционных участков, однако по 8 сайтам рестрикции они различались.

АГ родство ПВСоб с вирусом панлейкопении кошек было подтверждено в РН, РТГА и МФА. Ряд исследователей, изучая антигенное родство ПВСоб и панлейкопении кошек в РДП, РГА, РТГА с использованием метода истощения сывороток, установили, что эти виру­сы имеют общие специфические АГ. Некоторые из них являются ГА. Обнаружение в сыво­ротках крови собак AT, активных против ПВСоб и неактивных против вируса панлейкопении кошек, подтверждает наличие специфического AT. Выявлено слабовыраженное АГ род­ство между парвовирусами свиней и собак. Заболевание собак рота-, корона- и ПВ-ннфекциями для людей небезопасно, так как. эти вирусы в серологическом отношении име­ют родство с аналогичными вирусами человека. Между ПВСоб и возбудителем панлей­копении кошек нет физико-химических различий, однако, они отличаются по чувствительно­сти к ним клеточных систем и по ГА активности. Установлено также и различие физической карты геномов этих вирусов. Заражение первичных и перевиваемых культур клеток кошек и собак показало, что FPV размножается в кошачьих, но не в собачьих клеточных культурах, a CPV - в культуре клеток собак и кошек. При заражении кошек и собак выявле­на репродукция FPV в тимусе, но не в других органах собак, в которых размножается CPV. FPV вызывает у собак виремию, связанную со стимулированием мутагенов крови. Исполь­зуя генетическую рекомбинацию вирусов для определения круга хозяев, выявлены специфи­ческие для кошек детерминанты.

Локализация вируса, вирусоносительство и вирусовыделение. Появление измене­ний в слизистой оболочке тесно связано с локализацией вируса в эпителии крипт. Реплика­ция вируса в тонком кишечнике ограничивается пролиферацией зоны крипт. Первичное ме­сто репликации вируса – тимус. Наличие АГ ПВСоб иммунологическими методами (ИФ, ИФА) впервые выявили в тимусе в 1-й дн, в остальных лимфоидных тканях - на 2-й да, в эпителии тонкого кишечника - на 4-й дн после заражения. Экскреция вируса с фека­лиями впервые наблюдалась на 3-й дн, далее с 4-го по 7-й день после заражения, после чего резко снижалась. Выделить вирус из крови удавалось на 3-4-й дн. По данным Wissenbok и др., выявление ПВ АГ в органах зараженных собак и соответствующего АГ в органах при энтерите кошек (панлейкопении) аналогично. ПВ-АГ обнаружен в дор­сальной поверхности языка (96,3%), глотки (81%), пищевода (50%), в слизистой оболочке кишечника (85,2%), в костном мозге (81,6%), селезенке (79,7%), тимусе (66,7%), мезентериальных лимфоузлах (60,4%), миндалинах (58,5%) и не выявлен в эпителии кожи и слизи­стых мужских и женских гениталий. Переболевшие собаки выделяют вирус в течение 3-х нед и более. Вирусоносительство наблюдали до 6 мес.

Антигенная активность. На 5-7-й день после заражения вирус индуцирует образование КСА, ВНА и анти-ГА. Последние представляют наибольший интерес в аспекте серодиагно­стики и оценки поствакцинального иммунитета. После достижения максимума титр их не снижается в течение 2-х лет.

Культивирование. ПВСоб культивируется в культурах клеток почки котенка, собаки, легких норки, не вызывая ЦПД. Для выявления АГ в клетках была использована флюоресцирующая сыворотка против вируса панлейкопеиии кошек. Установлена чувствительность к ПВСоб различных культур клеток: почки эмбриона собаки, перевиваемые линии Vero, меланомы собаки, почки кошки, первично-трипсинизированные клетки плода собаки, сердца, легкого, печени. Из всех культур внутриядерные включения были выявлены на 8-15-е сут после заражения только в клетках легкого эмбриона собаки и почки кошки.

Aubert и др. провели исследования по обнаружению ПВСоб в различных перевиваемых линиях культур клеток (почки собаки, кошки, эмбриона кошки, МДСК и А22). Для выяв­ления АГ были использованы прямой метод ИФ, окрашивание препаратов по Майн - Грюнвальду и РГА. С помощью ИФ вирус обнаруживался во всех культурах, за исключением МДСК. В культуре клеток почки кошки титр ГА активности ПВСоб с эритроцитами свиньи через 5 сут после заражения был 1:1024. ПВСоб размножается в тканях, в которых происхо­дит быстрая пролиферация клеток - костном мозге, эпителиальных клетках, выстилающих крипты тонкого кишечника, и миокарде очень молодых щенков. Репликация ПВСоб в пере­виваемых клетках CRFK (почки кошки Crandel) зависит от физиологического состояния клеток, т.е. репликация вируса происходит в поздней S-фазе перевиваемых клеток. Шт.Kuchiro пассируется в перевиваемой культуре клеток легкого кошки (FLF-3). К ПВСоб вы­сокочувствительна также перевиваемая культура клеток А-72.

ГА свойства. ПВСоб ГА эритроциты свиньи и кошки при 4°С и рН 5,8-8,2, но не дает гемагглютинации с эритроцитами лошади, КРС и морских свинок. РГА используется для диагностики новых случаев панлейкопении кошек. Суспензия из фекалий больных собак по­стоянно обладала ГА активностью с эритроцитами африканской зеленой мартышки при 4 и 22°С и никогда при 37°С. Титр ГА-активности был не выше 1:256. Негемагглютинирующий мутант ПВСоб отличался от исходного «дикого» штамма структурой генов, кодирующих поверхностные белки VP1 и VP2. Вирус, выделенный в культуре клеток, также облада­ет ГА активностью. ПВСоб после культивирования в первично-трипсинизированной культу­ре клеток почки и легкого эмбриона собаки, котенка и перевиваемой линии клеток почки котенка вызывал агглютинацию эритроцитов. ГАд свойства не установлены.

Экспериментальная инфекция. Удается у щенков и котят. При экспериментальном заражении собак, не имеющих AT к ПВСоб, первым и основным признаком болезни явля­ется диарея, развивающаяся в течение 24 ч после инокуляции вируса. С этого момента несколько дней в кале собак обнаруживается большое количество вируса. Через несколько недель в сыворотке крови появляются специфические AT. Для перорального эксперименталь­ного заражения щенков собаки необходимы определенные условия, в частности, предвари­тельное голодание. В качестве инфекционного материала используют соскобы слизистой оболочки кишечника больных ПВИСоб. Вируссодержащий материал вводят перорально в объеме 10 мл. При заражении щенков 8-10-нед возраста per os на 5-й день развивались клинические признаки болезни: угнетение, анорексия, рвота, диарея, гибель. Кошки менее чувствительны к ПВИСоб по сравнению с вирусом панлейкопении.