Серологическая идентификация

РИФ. В основном АГ локализуется в цитоплазме клеток, однако в ранние сроки инфи­цирования одновременно наблюдается свечение ядрышек. Парагриппозный АГ выявляют в первые дни болезни и до 10-14 дня. При осложненных формах болезни АГ выявляют более длительное время. В некоторых случаях его удается выявить даже во время инкубационного периода, за 1-2 дня до появления клинических симптомов. Специфичность ИФ составляет 94% при сопоставлении с результатами серологического исследования. Существует одно­значное мнение о большей чувствительности ИФ по сравнению с РГАд при индикации парагриппозных вирусов, что делает ее перспективной для быстрой диагностики.

РТГАд. Является быстрым методом идентификации выделенного вируса. Для этого ис­пользуют иммунные сыворотки кроликов или морских свинок. РТГАд ставят общеприня­тым методом с эритроцитами морской свинки. Исследуемый вирус считают идентифициро­ванным, если иммунная сыворотка к ПГ-3 блокирует гемадсорбцию.

РНГАд. Используют 100 ГАд единиц вируса. По реакции гемадсорбции вирус ПГ-3 можно титровать в культуре ткани, используя для заражения культуры последовательные 10-кратные разведения. После 3 дн инкубации ставят РГАд с содержимым всех пробирок и регистрируют наличие гемадсорбции. За одну ГАд единицу принимают конечное разведение вируса, вызвавшего гемадсорбцию. Положительная РГАд в контрольных пробирках, отсут­ствие реакции в пробирках со смесью вируса и сыворотки свидетельствует об идентичности выделенного вируса данному типу сыворотки.

РТГА. Применяется для типирования выделенного вируса при наличии в жидкой фрак­ции зараженных культур клеток гемагглютинина в титре, достаточном для выбора 4 ГАЕ. Следует иметь в виду, что вирус парагриппа, выращенный в культуре клеток почки КРС, агглютинирует эритроциты гусей, индюков и морских свинок, в отличие от эритроцитов кур и уток. Агглютинация развивается в следующие сроки: эритроциты гусей за - 1-3 мин, индюка - за 2-5, морской свинки - за 60-90 мин. Наиболее высокие и стабильные титры вы­являются с эритроцитами индюка и при значениях рН: эритроциты гусей при 5,7; индюка 5,7-7,2; морской свинки 6,8-7,2. Иммунные сыворотки, используемые в РТГА, должны быть освобождены от термолабильных и термостабильньгх ингибиторов, для этого сыворот­ки прогревают при 56°С 30 мин и обрабатывают каолином или фильтратом холерного виб­риона. РТГА ставят общепринятым методом.

Иммуноферментная идентификация. Сотрудниками ВНИ ТИБП разработана мето­дика идентификации вируса ПГ-3 в ELISA (12а). Вариантная идентификация с помощью монАТ не разработана. Иммунодиффузия (ИД) может быть с успехом использована для диагностики ПГ-3 инфекции. В ИД выявлено 2 линии преципитации, что соответствует 2-м АГ ПГ-3.

Серодиагностика и ретроспективная диагностика. При серологической диагностике ПГ-3 КРС исследуют парные сыворотки телят или взрослых животных для выявления при­роста AT. Интервал между взятием проб 2-3 нед.

РГА, РН, РЗГАд и РСК дают в целом идентичные результаты при исследовании AT в период развития болезни и реконвалесценции. Однако РТГА самая чувствительная и самая простая. Кроме исследования парных сывороток крови, при серодиагностике ПГ-3 рекомен­дуется метод выявления секреторных AT в РТГА. Для этого берут парные пробы носовых секретов от 8-10 животных, проявивших клинические признаки болезни (повышение темпе­ратуры, истечения из носовой полости и др.), и повторяют исследования через 6-8 дн.

Перед постановкой РТГА пробы размораживают, центрифугируют 10 мин при 2000 мин^-1, затем обрабатывают следующим образом: к 0,2 мл надосадочной жидкости добавля­ют 0,2 мл 20%-ной суспензии эритроцитов морской свинки, встряхивают, выдерживают 30 мин при 4°С, 10 мин центрифугируют при 1500 мин^-1; надосадочную жидкость в объеме 0,3 мл смешивают с 25%-ной суспензией каолина на физиологическом р-ре, встряхивают 25 мин, центрифугируют 15 мин при 2000 мин^-1. После этого надосадочную жидкость исполь­зуют в РТГА.

Положительный результат исследования на ПГ-3 считают в случае выявления AT во 2-й пробе носовых секретов в титре 1:16 и выше (при отсутствии титров AT в 1-й пробе) или ус­тановления 4-кратного и более увеличения титра AT во 2-й пробе носовых секретов по сравнению с 1-й.

При положительной РНГАд в контролях вируса (пробирки с культурой клеток, куда был внесен вирус в рабочем разведении с равным объемом питательной среды), учитывают её отсутствие в пробирках, куда была залита смесь того или иного разведения сыворотки и ви­руса. Диагностическим является не менее чем 4-кратный прирост нейтрализующих гемадсорбцию AT в реконвалесцентной сыворотке по сравнению с сывороткой, взятой в начале болезни. РСК не нашла широкого применения в ветеринарной диагностической практике.

Максимальный срок обнаружения AT в сыворотках крови телят после инфицирования вирусом ПГ-3 точно не установлен. Ряд исследователей полагают, что AT сохраняются в те­чение 4-6 мес. Уровень образования БНА и анти-ГА достигал пика 1:320 и выше к 14-21 дню после заражения. ELISA широко используется за рубежом для индикации и титрования AT. Он в 4 - 64 раза чувствительнее, чем РТГА.

Дифференциальная диагностика. При постановке диагноза на ПГ-3 необходимо ис­ключить ИРТ, ВД-БС, адено- и PC-инфекции, имеющие очень сходные эпизоотологические, клинические и патологоанатомические данные. Поэтому материал, поступивший с подозре­нием на ПГ-3, в лаборатории исследуют параллельно на все вышеуказанные инфекции.