Уреазные тесты.
Уреазные тесты основаны на выявлении высокой эндогенной активности фермента уреазы, вырабатываемой H.pylori. Под воздействием уреазы Нр мочевина желудочного содержимого катализируется на ионы аммония и угольной кислоты. Гидролиз мочевины завершается образованием щелочных продуктов, что приводит к алконизации и локальному повышению рН. Этот механизм является важным звеном защиты микроорганизма от агрессивных факторов макроорганизма, что приводит к образованию перифокального «аммиачного облака» нейтрализующего HCl желудочного содержимого. Интенсивность экспрессии фермента превышает в 2-10 раз аналогичные свойства других микроорганизмов и является ведущим энзимологическим маркером Нр-инфекции.
1. Дыхательный уреазный тест.
В исследованиях по определению H.pylori применяется дыхательный «Хелик-тест». Суть метода заключалась в том, что через индикаторную трубку при помощи электрического насоса пропускают выдыхаемый воздух пациента. Затем дают выпить больному 10 мл 5% водного раствора карбамида (0,5 г). Через 5 минут повторяется процедура измерения с другой стороны той же индикаторной трубки. Оценивается прирост концентрации аммиака (разница между первым и вторым темно-синим столбиком, образующимся в индикаторной трубке по результатами «прохождения», аспирируемого воздуха). Если прирост концентрации аммиака будет превышать 0,5 мг/мл, то тест на H.pylori считается положительным.
2. Быстрый уреазный тест
Биопсийный материал СОЖ помещается в жидкую среду теста. Стандартной средой для быстрой диагностики Нр является 2% бульон мочевины по Кристенсену. В состав жидкой среды входит мочевина и индикатор. Мочевина ферментируется уреазой H.pylori на аммиак и углекислый газ, вызывая изменение рН среды, в результате чего индикатор окрашивается от желтого до малинового цвета. Экспозиция биоптата в среде занимает от 5 до 25 минут.
CLO-тест
Разновидность уреазного теста промышленного изготовления. Представляет собой гелеобразную таблетку, содержащую мочевину, феноловый красный (индикатор рН) и бактериостатический агент. Биоптат помещают на поверхность таблетки. При наличии в исследуемом материале уреазы, мочевина гидролизируется, защелачивая среду. Это приводит к изменению окраски - от желтой до малиновой. Оценка результата проводится через 20 минут.
Для повышения специфичности метода предложен тест, который позволяет определять при комнатной температуре уреазную активность лишь накопленную в тканях, а не вырабатываемую микроорганизмами в процессе культивирования. Данная методика получила название «холодных» тестов. Представителем этой разновидности является тест на основе твердого волокнистого носителя – Хелпил-тест. Гигроскопический материал теста адсорбирует жидкость из биоптата, помещенного на него, биохимическая реакция происходит только под материалом и, как считают разработчики теста, является равнозначным с количеством уреазы и реакционной средой, что повышает чувствительность метода. Специфичность и чувствительность Хелпил-теста у детей составляет до 95%.