15.1.2. Культивирование вирусов в куриных эмбрионах

В середине 30-х годов австралийский вирусолог Ф. Вернет начал использовать новый для вирусологии экспериментальный объект — куриные эмбрионы (слайд). Куриные эмбрионы — практически идеальные модели для культивирования вирусов. Замкнутая полость эмбриона препятствует проникновению микроорганизмов извне, а также развитию спонтанных вирусных инфекций. Эмбрионы применяют для первичного выделения вирусов из патологического материала; для пассирования и сохранения их, а также для получения необходимых количеств вируса.

Для заражения вирусами обычно используют 10—12-дневные куриные зародыши, у которых в это время хорошо развиты оболочки — хорион-аллантоисная и амниотическая. При заражении их вирусами может развиться вирусная инфекция. При этом размножение вируса происходит в течение 3—4 дней, когда иммунитет еще не успевает развиться.

Размножение вируса в куриных эмбрионах происходит в разных частях зародыша, что связано с особенностями тропизма вируса. Размножаясь в зародышевых оболочках, вирус выделяется в аллантоисную и амниотическую жидкость, где накапливается в громадных количествах (до нескольких миллиардов вирионов в 1 мл). В дальнейшем вирус может быть осажден в центрифуге и дополнительно очищен разными методами.

Методику выращивания вируса в курином эмбрионе широко используют при промышленном культивировании. Кроме куриных эмбрионов, в некоторых случаях используются эмбрионы других птиц — уток, перепелок.

15.1.3. Культивирование вирусов в культуре тканей и клеток

Методы культивирования тканей и клеток животных были разработаны к середине прошлого века. В настоящее время большинство клеток для непрерывных культур имеют происхождение от людей или других видов животных. Непрерывная культура клеток состоит из клеток, которые стали бессмертными либо в теле, либо в лаборатории (слайд); такие клетки можно культивировать неограниченно. Широко распространенной является клеточная линия HeLa. Она была получена 8 февраля 1951 года из раковой опухоли шейки матки пациентки по имени Генриетта Лакс (англ. Henrietta Lacks), умершей от этого заболевания 4 октября того же года. Иногда трудно найти линию клеток, в которой вирус может реплицироваться. Так, долго не удавалось подобрать подходящую клеточную культуру для вируса гепатита С, однако в конечном итоге была найдена линия клеток гепатомы человека, которая поддерживала репликацию вируса.

Клетки культивируют в средах, в которые добавляют питательные элементы. Большинство сред содержит сыворотку крови животных, в которой имеются вещества, которые поддерживают рост многих линий клеток. Большое значение имеют также осмотическое давление и рН среды. Бльшинство клеток выращивают в пластиковых или стеклянных сосудах в виде единого слоя клеток, называемого монослоем. Альтернативно клетки можно культивировать в виде суспензии во встряхиваемой жидкой среде. Многие типы клеток требуют относительно высокой концентрации двуокиси углерода, которую обеспечивают в специальных инкубаторах.