80. Какие методы используют с целью выделение и культивирование вирусов? 15.1. Культивирование вирусов

Вирусологам необходимы методы культивирования их объектов исследований. В подавляющем большинстве случаев это означает, что вирусы необходимо обеспечить подходящими клетками, которые они могут заразить и в которых может проходить их репликация. Бактериофаги можно обеспечить клетками бактериальной культуры, вирусы растений можно культивировать в специально выращиваемых растениях или в растительных протопластах. Вероятно, сложнее всего культивировать вирусы животных.

15.1.1. Культивирование вирусов в лабораторных животных

Вплоть до середины 30-х годов экспериментальные заражения животных или растений и ультрафильтрация являлись главными методами идентификации вирусов. Эти методы позволили выделить многие вирусы домашних животных, некоторые вирусы насекомых и растений. Однако стандартные лабораторные животные — мыши, крысы, морские свинки, кролики, невосприимчивы к большинству вирусных инфекций человека.

К середине 30-х годов с помощью лабораторных животных были открыты возбудители гриппа и герпеса. К вирусу гриппа весьма чувствительными оказались хорьки. Использование обезьян в качестве лабораторных животных позволило открыть вирусы оспы, полиомиелита, желтой лихорадки, денге.

Выбор экспериментальных животных определяется целью работы и видовой чувствительностью к изучаемому вирусу. Лабораторных животных заражают различными способами в зависимости от тропизма вируса к определенным тканям. Так, например, для культивирования нейротропных вирусов заражение производят преимущественно в мозг (вирусы бешенства, клещевого энцефалита и др.), культивирование респираторных вирусов осуществляется при интраназальном инфицировании животных (вирусы гриппа), дерматотропных (вирус оспы) – путем накожного и внутрикожного заражения. Наиболее часто используются накожное, внутрикожное, внутримышечное, внутрибрюшинное и внутримозговое заражение.

При первичном заражении животные могут не заболеть, поэтому через 5-7 дней внешне здоровых животных убивают, а из их органов готовят суспензии, которыми заражают следующие партии животных. Эти последовательные заражения называются «пассажами».

Индикацию, т.е. обнаружение факта размножения вируса, устанавливают на основании развития типичных признаков заболевания, патоморфологических изменений органов и тканей животных или другими способами, например по положительной реакции гемагглютинации (РГА). РГА основана на способности некоторых вирусов вызывать агглютинацию (склеивание) эритроцитов различных видов животных, птиц и человека за счет поверхностного вирусного белка – гемагглютинина. В настоящее время использование животных для культивирования вирусов ограничено.

Помимо очевидных проблем, связанных в том числе с вопросами биоэтики, культивирование вирусов в животных имеет еще одни недостаток. При заражении экспериментальных животных, чувствительных к тому или иному вирусу, этот последний накапливается во внутренних органах или нервной ткани, откуда его трудно выделить в чистом виде, освободив от клеточных белков.