
- •Тема 7. Хроматографія
- •7.1. Основні поняття хроматографії
- •1.Суть і особливості хроматографічних методів аналізу
- •2.Основні етапи розвитку хроматографії (на самостійне опрацювання)
- •Класифікація хроматографічних методів аналізу
- •IV. За методикою проведення аналізу:
- •Практичне використання найпоширеніших хроматографічних методів (на самостійне опрацювання).
- •5. Сорбція та розподіл молекул між фазами
- •5.1. Сили міжмолекулярної взаємодії.
- •7.2. Основні положення теорії хроматографічного аналізу
- •Хроматограма та її характеристики
- •Пояснення причин розмивання хроматографічних піків.
- •Селективність колонки
- •Ефективність хроматографічного розділення. Теорія еквівалентних тарілок.
- •Дифузійна (кінетична) теорія
- •Критерій розділення.
- •Вибір температури
- •7.3. Газова хроматографія
- •3Агальні положення. Рухома фаза у газовій хроматографії
- •2. Вплив різних факторів на хроматографічне розділення суміші речовин
- •2.1. Вплив швидкості потоку і тиску газу-носія на ефективність розділення.
- •2.2. Селективність і тривалість розділення у газовій хроматографії.
- •2.3. Хроматографія з програмуванням температури.
- •2.4. Особливості газоадсорбційної хроматографії. Адсорбенти
- •2.5. Особливості газорідинної хроматографії
- •Література
Практичне використання найпоширеніших хроматографічних методів (на самостійне опрацювання).
Хроматографічні методи на сучасному етапі використовуються спеціалістами в різноманітних сферах науки та промисловості, зокрема, в таких як медицина, біологія, фізика, геологія, біотехнологія, хімічна та фармацевтична промисловість тощо.
Застосування хроматографічних методів для розділення білків мало величезний вплив на розвиток сучасної біохімії, фармацевтики, криміналістики, терапевтичного моніторингу у зв'язку із зростанням нелегального вживання наркотиків, ідентифікації антибіотиків, допінг-контролю, аналізу найбільш важливих класів пестицидів.
Найширше застосування для аналізу органічних речовин дістала газова хроматографія (газоадсорбційна і газорідинно-розподільна, колонкова, проявного типу). За її допомогою виконується біля 50 % всіх хроматографічних аналізів.
Області використання газової (ГХ) та рідинної (РХ) хроматографії суттєво відрізняються. У цілому, ГХ використовують для розділення летких матеріалів, а РХ – для нелетких рідин та твердих матеріалів. Однак існують деякі компоненти, які можуть бути розділені за допомогою обох методик, і, що більш важливо, багато нелетких субстанцій, таких як амінокислоти, стероїди та високомолекулярні жирні кислоти, які можуть бути розділені за допомогою ГХ. Капілярні колонки для ГХ набагато ефективніші, ніж їх РХ аналоги, а тому вони можуть забезпечити розділення мультикомпонентних сумішей, таких як ефірні олії. З іншого боку, тільки РХ використовують для розділення пептидів, поліпептидів, протеїнів та інших великих біополімерів, які мають біо-технологічну значимість.
Газову хроматографію використовують в багатьох медичних галузях: у гігієні та екології для визначення вмісту шкідливих домішок у повітрі, воді та харчових продуктах; у токсикології та судовій медицині для виявлення отруєнь технічними рідинами та пестицидами різноманітної структури; у фармакології – для контролю якості препаратів, дослідження метаболізму лікарських речовин. За допомогою ГХ визначають склад ліпідів крові, який є передумовою профілактики та лікування атеросклерозу та ішемічної хвороби серця; визначають спектр карбонових кислот циклу Кребса, що дозволяє розкрити особливості внутріклітинного метаболізму при різних патологічних процесах. Методом ГХ визначають підвищений вміст ацетону, гептанолу-2 та інших кетонів при цукровому діабеті, розроблено методи визначення катехоламінів (адреналіну та норадренліну) і споріднених сполук, гормонів щитоподібної залози, надниркових залоз. У медичній мікробіології використовують методи диференціації бактерій за їх жирнокислотними профілями, визначеними у ГХ. ГРХ та ГАХ широко використовують для визначення деяких фізико-хімічних характеристик речовин (константа розподілу, константа комплексоутворення, теплота розчинення, коефіцієнти активності, ізотерми та енергія адсорбції, енергії водневих зв’язків, тощо), а також для вимірювання кінетики хімічних реакцій.
Рідинна хроматографія використовується для розділення високополярних речовин та речовин з великою молекулярною вагою, що нелеткі та не можуть бути розділені за допомогою ГХ. РХ є одним з найважливіших методів досліджень у хімії, біології, біохімії, медицині та біотехнології.
Лігандообмінна РХ є найбільш ефективною для розділення ізомерів. Загальноприйнятим підходом до розподілу пептидів вважають рідинну гель-хроматографію. Метод адсорбції у завислому шарі широко використовується в біотехнологічній промисловості для очистки продуктів синтезу (секреції) мікроорганізмів, ендоплазматичних продуктів, периплазматичних продуктів та продуктів із тілець включень. РХ використовують для аналізу, розділення, отримання та очистки амінокислот, пептидів білків, ферментів, нуклеотидів, вуглеводів, ліпідів, гормонів, тощо; вивчення процесів метаболізму лікарських речовин у живих організмах; аналізу продуктів хімічного та нафтохімічного синтезу; вивчення ізотерм сорбції з розчинів, кінетики та селективності хімічних процесів. У хімії високомолекулярних сполук та виробництві полімерів РХ використовують для контролю, аналізуючи якість мономерів, вивчаючи молекулярно-масове розподілу та розподілу за типами функціональності олігомерів та полімерів. Знайшла використання РХ також у парфумерній та харчовій промисловості, криміналістиці та екології.
Таким чином, хроматографія – один з найпотужніших аналітичних методів. Лише за один крок він допомагає розділити багатокомпонентні суміші на окремі компоненти та одночасно дає кількісну характеристику кожного компоненту.
Більше 10 робіт, виконаних із застосуванням хроматографічних методів, було удостоєно Нобелівських премій.