Тема 7. Хроматографія
7.1. Основні поняття хроматографії
1.Суть і особливості хроматографічних методів аналізу
Одне з важливих завдань сучасної аналітичної хімії – надійний і точний аналіз органічних та неорганічних речовин, часто близьких за будовою та властивостями.
Хроматографія – це велика область фізико-хімічних методів аналізу, яка поєднує в собі як способи концентрування і розділення, так і способи ідентифікації та кількісного визначення різноманітних речовин.
Хроматографічні методи посідають особливе місце серед ефективних методів аналітичного аналізу, оскільки дуже широко використовуються завдяки своїй універсальності – дозволяють провести аналіз складних неорганічних та органічних речовин, що перебувають у газуватому, рідкому і навіть твердому агрегатному стані. Новітніми хроматографічними методами можна проаналізувати газоподібні, тверді і рідкі речовини з молекулярною масою від 1 до 106. Це один із найважливіших аналітичних методів.
Хроматографія – гібридний аналітичний метод, в якому поєднуються метод розділення і метод визначення.
На відмінність від інших методів, заснованих на розподілі компонентів між фазами, хроматографія – це динамічний метод, що забезпечує багатократність актів сорбції-десорбції компонентів, які розділяються, оскільки розділення відбувається в потоці рухомої фази. Цим обумовлена велика ефективність хроматографічного методу в порівнянні з методами сорбції і екстракції.
Найзагальніше визначення хроматографії – це фізико-хімічний метод розділення речовин, який ґрунтується на розподілі компонентів між двома фазами – нерухомою і рухомою.
Нерухома фаза – це твердий адсорбент із розвиненою поверхнею або плівка рідини, адсорбційно закріплена на твердому носії; функція нерухомої фази – сорбувати, утримувати речовини. Рухома фаза – потік газу або рідини, який проходить (фільтрується) крізь шар сорбенту, функція рухомої фази – розчиняти в собі речовини і переміщувати їх. Рухому фазу, що вводиться в шар нерухомої фази, називають елюентом, а рухому фазу, що виходить з колонки і містить розділені компоненти, – елюатом.
Компоненти аналізованої суміші (сорбат) разом з рухомою фазою пересуваються уздовж стаціонарної фази (сорбенту). Її зазвичай поміщають в скляну або металеву трубку, що називають колонкою.
Найпростіше уявлення про хроматографічне колонку таке: скляна чи металічна трубку, наповнена подрібненим сорбентом – речовиною, яка поглинає компоненти суміші, а просування рухомої фази (рідини чи газу) через шар нерухомої фази здійснюється за рахунок різниці тиску на кінцях цієї трубки.
У всіх випадках компоненти аналізованої суміші розподіляються між нерухомою і рухомою фазою. B залежності від сили взаємодії з поверхнею сорбенту (за яким-небудь механізмом) компоненти переміщаються уздовж колонки з різною швидкістю. Одні компоненти залишаються у верхньому шарі сорбенту, інші, з меншим ступенем взаємодії з сорбентом, знаходяться в нижній частині колонки, деякі покидають колонку разом з рухомою фазою. Таким чином компоненти розділяються.
Отже, розділення компонентів суміші на хроматографічній колонці зумовлене їх різним утримуванням у нерухомій фазі. Молекули утримуються в результаті дії міжмолекулярних сил притягання або так званих сил Ван-дер-Ваальса, які мають електростатичну природу та виникають між сорбентом і сорбатом.
Неоднаковий розподіл компонентів суміші між фазами створює умови, необхідні для їх розділення та подальшого визначення. Це призводить до утворення на виході з колонки окремих зон, кожна з яких містить компонент розділюваної суміші (рис. 1).
Рис.1. Розділення суміші з трьох компонентів (А, Б, В) на хроматографічній колонці (К) із детектором (Д)
а – розташування хроматографічних зон компонентів, що розділяються, у колонці через певні інтервали часу; б – хроматограма (С – сигнал детектора, t – час).
Завдання аналітика – виявлення цих зон і визначення їх якісного і кількісного складу.
Кожен вид хроматографії заснований на окремому, особливому фізичному процесі. Виникає питання, на якій підставі ці різні явища і методи розділення, засновані на різних принципах, об'єднуються в одну науку – хроматографію. Що є типовим для всіх хроматографічних методів, які вже відкриті або які ще будуть відкриті?
Всі сучасні хроматографічні методи володіють рядом загальних, причому дуже суттєвих рис. Характерними особливостями будь-яких хроматографічних методів є наступні:
Висока роздільна здатність процесу розділення, зумовлена високою ефективністю процесу, що дає можливість розділення навіть близьких за природою, структурою і властивостями речовин. Цим пояснюється широке розповсюдження хроматографії в різних галузях наукових досліджень, в лабораторній практиці, промисловості. Ті розділення, які до застосування хроматографічних методів не могли бути здійснені, стали легко здійснюваними після їх появи. Сюди відносяться, наприклад, розділення сумішей амінокислот на індивідуальні компоненти, розділення сумішей вуглеводнів на індивідуальні речовини, розділення сумішей рідкоземельних елементів на окремі елементи, виділення ферментів в чистому вигляді і багато інших розділень.
М'які умови розділення. Можна порівняти процес хроматографічного розділення сумішей з процесом розділення складних сумішей методом перегонки, але якщо звичайна перегонка здійснюється, як правило, в досить жорстких умовах (висока температура, глибоке вакуумування), то хроматографічні розділення здійснюються в м'яких умовах (при атмосферному тиску, при звичайних температурах).
Хроматографія – це процес динамічний, будь-яке хроматографічне розділення завжди полягає у переміщенні компонентів аналізованої проби рухомою фазою через шар нерухомої речовини.
Відповідно, в будь-якому із варіантів хроматографічного методу обов’язкова наявність двофазової системи.
На основі вищевикладених особливостей хроматографії можна дати наступне повне визначення хроматографічним методам:
Хроматографічним методом називається фізико-хімічний метод розділення сумішей, при якому компоненти розділюваної суміші розподілені між двома фазами, одна з яких є нерухомим шаром з великою поверхнею контакту, а інша фаза є потоком, який фільтрується через нерухомий шар. Слово ”фільтрується” – є відмінною рисою хроматографічного методу від інших фізичних методів розділення, які ґрунтуються на використанні двофазних систем (дистиляція, екстракція, де використовується протиточний рух обох фаз).
Перелічимо основні завдання, які можуть бути вирішені за допомогою хроматографічних методів:
якісний і кількісний аналіз складних сумішей речовин;
розділення багатокомпонентних за складом сумішей на індивідуальні компоненти;
концентрування речовин з їх дуже розбавлених розчинів. Цілі тут можуть бути різні: хроматографічні методи дозволяють сконцентрувати уран, що міститься в природних рудах в десятих, а то і сотих частках відсотка; сконцентрувати радій, що міститься в природних водах у концентраціях 10-5-10-6 г-атом/л. Може стояти завдання добування цінних металів (срібла, золота, платини) з розбавлених технологічних розчинів (гідрометалургія) або виробничих стічних вод (питання екології);
очищення технічних продуктів від домішок, доведення цих продуктів до заданого ступеня хімічної чистоти, отримання чистих хімічних реактивів;
контроль різних виробництв методами хроматографії;
визначення молекулярної структури деяких сполук шляхом встановлення зв’язку між здатністю до сорбції і будовою даної речовини.