- •Запитання для допуску до лабораторної роботи:
- •Лабораторна робота 9
- •2.1. В результаті проведення лабораторного заняття студенти повинні:
- •2.2. Самостійна робота на занятті:
- •3. Реактиви і обладнання:
- •4. Теоретичні відомості
- •4.1. Загальна характеристика методу
- •4.2. Техніка проведення аналізу
- •4.3. Кількісні характеристики у тонкошаровій хроматографії
- •5. Зміст роботи.
- •5.1. Приготування елюента і підготовка камери для тшх.
- •5.2. Приготування стандартних розчинів амінокислот
- •5.3. Підготовка пластинки для тшх
- •5.4. Нанесення проб на пластину
- •5.5. Проведення хроматографування
- •5.6. Проявлення хроматограми
- •5.7. Якісний аналіз хроматограм
- •5.8. Результати експерименту
- •Контрольні запитання
- •Література
5. Зміст роботи.
Розділення амінокислот проводиться методом одновимірної висхідної хроматографії.
5.1. Приготування елюента і підготовка камери для тшх.
Висхідне хроматографування проводять в спеціальних камерах для ТШХ або будь-якому скляному посуді, що герметично закривається і має плоске дно. На дно камери наливають рухливу фазу – елюент. Елюентом в даній роботі є суміш н-бутанол – вода – оцтова кислота у співвідношенні 4:5:1. Рухливу фазу готують в камері змішанням 20 мл н-бутанолу, 25 мл води і 5 мл оцтової кислоти. Висота шару елюента в камері повинна бути ~ 0,5 см. Камера з елюентом, щільно закрита кришкою, повинна деякий час постояти, щоб простір наситився парами елюента – це прискорює процес хроматографування.
5.2. Приготування стандартних розчинів амінокислот
Готують стандартні розчини амінокислот (аланіну, лейцину і валіну) з концентрацією 1 мг/мл.
Для цього наважку амінокислоти масою 0,0250 г зважують на аналітичних вагах і кількісно переносять в мірну колбу ємністю 25,00 мл. Об'єм розчину доводять дистильованою водою до мітки і ретельно перемішують.