- •Введение
- •1. Литературный обзор
- •1.1. Молекуляно-генетический анализ количественных признаков.
- •1.2 Подходы для выявления аллельного полиморфизма
- •1.3. Характеристика генов основных белков молока.
- •1.3.1. Гены казеинов молока
- •1.3.2. Бета-лактоголобулин
- •1.4. Характеристика генов гормонов, влияющих на параметры молочной продуктивности
- •1.4.1. Соматотропин (gh)
- •1.4.2. Пролактин (prl)
- •1.5. Гипофизарный фактор транскрипции (pit-1)
- •2. Методы и объекты исследования
- •2.1. Выделение днк из крови
- •2.2. Определение белка в молоке.
- •2.3. Анализ полиморфизма гена каппа-казеина (csn3)
- •2.4. Анализ полиморфизма гена бета-лактоглобулина.
- •2.4.1. Анализ полиморфизма гена бета-лактоглобулина (βLg) по методике Medrano, et al., 1990 .
- •2.4.2. Анализ полиморфизма гена бета-лактоглобулина (βLg) по методике Гладырь е.А., 2001.
- •2.5. Анализ полиморфизма гена соматотропина по MspI-маркеру (gh/MspI)
- •2.6. Анализ полиморфизма гена соматотропина по AluI-маркеру (gh/AluI)
- •2.7. Анализ полиморфизма гена пролактина (prl)
- •2.8. Анализ полиморфизма гена гипофизарного фактора транскрипции (pit-1)
- •2.9. Статистическая обработка результатов
- •3. Результаты и обсуждение
- •3.1. Генетическая структура исследуемых групп крупного рогатого скота по гену каппа-казеина (csn3)
- •3.2. Генетическая структура исследуемых групп крупного рогатого скота по гену пролактина (prl).
- •3.3. Генетическая структура исследуемых групп крупного рогатого скота по гену гипофизарного фактора транскрипции (pit-I).
- •3.4. Генетическая структура исследуемых групп крупного рогатого скота по гену соматотропина (gh).
- •3.4.1. Исследование генетической структуры групп крупного рогатого скота по MspI-маркеру гена соматотропина.
- •3.4.2. Исследование генетической структуры групп крупного рогатого скота по AluI-маркеру гена соматотропина.
- •3.5. Сравнение распространения аллелей гена соматотропина по MspI- и AluI – маркерам у крс в Брянской области и других регионах.
- •3.6. Исследование генетической структуры групп крупного рогатого скота по гену бета-лактоглобулина (βLg).
- •3.7. Анализ сочетания мутаций при определении а и в аллелей гена β-лактоглобулина.
- •3.8. Определение гетерозиготности в изучаемых группах крупного рогатого скота
- •3.9. Анализ состава комплексных генотипов в исследуемых группах крс
- •4.0. Анализ влияния аллельных вариантов исследуемых генов на показатели молочной продуктивности крс.
- •4.1.1. Изучение связи генотипов бета-лактоглобулина с параметрами молочной продуктивности крс.
- •4.1.2. Определение влияния аллельных вариантов гена соматотропина по MspI-маркеру на параметры молочной продуктивности крс.
- •4.1.3. Анализ связи аллельных вариантов гена соматотропина по AluI-маркеру с параметрами молочной продуктивности крс.
- •4.1.4. Комплексное влияние вариантов гена соматотропина по AluI- и MspI - маркерам на молочную продуктивность
- •4.1.5. Анализ связи аллельных вариантов гена гипофизарного фактора транскрипции (pit-1) с параметрами молочной продуктивности крс.
- •Практические рекомендации
- •Список литературы
1.3.2. Бета-лактоголобулин
Бета-лактоглобулин (βLG) – серосодержащий белок, не осаждается сычужным ферментом. У парнокопытных βLG встречается как стабильный димер в интервале pH 3,0 – 7,0. βLG крупного рогатого скота состоит из 162 аминокислот и имеет молекулярный вес мономера около 18300 дальтон [Bell K. et al., 1970]. Содержание βLG в молоке крупного рогатого скота составляет около 0,4 г/л [Eigel W.N. et al., 1984; Godovac-Zimmermann J et al., 1996]. В молоке некоторых млекопитающих, например в человеческом, бета-лактоглобулин отсутствует.
Последовательность βLG жвачных проявляет консерватизм на уровне 96%-99% [Глазко В. И., Глазко Г. В., 2003]. Биологическая функция βLG предположительно состоит в транспорте витамина А. Кроме того, βLG жвачных связывает in vitro длинноцепочечные жирные кислоты и триглицериды [Hill JP et al., 1997]. Perez с соавторит считает, что за счет связывания свободных жирных кислот βLG может способствовать перевариванию молочного жира.
Играет важную роль в обеспечении качества молока, влияет на коагуляцию молока, образования сыра и масла.
Ген βLG КРС локализован в 11 хромосоме, имеет размер 4662 п.о. и состоит из 7 экзонов и 6 интронов [K. Karimi et al., 2008].
В настоящее время известно 15 генетически обусловленных аллельных вариантов βLG – A, B, C, D, E, F, G, I, J, W и др. [Matejicek A, et al., 2007]. Наиболее часто встречаются четыре аллеля - A, B, C и D. Отличие А-аллеля от В заключается в аминокислотной позиции 64 (Asp в А, Gly в В) и позиции 118 (Val в А, Ala в В) [Aschaffenburg R., Drewry J. 1955; Aschaffenburg R., Drewry J. 1957]. Вариант D отличается от вариантов А, В, С в позиции 45 заменой аминокислоты Glu→Gln.
Результаты некоторых исследований по изучению влияния варианта гена бета-лактоглобулина на показатели молочной продуктивности свидетельствуют о наличии ассоциаций BВ-генотипа с высоким содержанием в молоке казеиновых белков, высокой жирностью и параметрами казеинового коагулята, что делает такое молоко наиболее пригодным для изготовления сыров [Ng-Kwai-Hang KF et al., 1986; Aleandri R et al., 1990; Wedholm A et al., 2006; Patel R.K., et al., 2007]. AА-генотип ассоциируют с высоким надоем и большим содержанием сывороточных белков [Ikonen T et al.,1999; Ng-Kwai-Hang et al., 1900; Strzalkowska, N., et al., 2002; Patel R.K., et al., 2007]. Другие исследователи отмечают наивысшие надои содержание белка и лактозы в молоке коров с гетерозиготным генотипом [Tsiaras AM et al., 2005; Kaygisiz A et al., 1999;]. Гладырь показала, что у красной горбатовкой породы генотипы АА и ВВ связаны с более высокой жирностью молока. У коров швицкой породы влияние вариантов генотипа на параметры молочной продуктивности не выявлены [Гладырь и др., 2000].
1.3.3. α-лактальбумин
Первичную последовательность полипептида α-лактальбумина (LALBA) впервые определи Brew и др. в 1970 году. Наиболее распространенный B-вариант состоит из 123 аминокислот. Его молекулярная масса составляет 14175. α-лактальбумин входит в состав гетеродимера регуляторной субъединицы синтетазы лактозы, а β-1,4-галактозилтрансфераза (beta4Gal-T1) является каталитической субъединицей.
Восемь мономеров цистеина в молекуле α-лактальбумина обеспечивает возникновение меж-и внутри-молекулярных связей. По архитектуре молекулы α-лактальбумина сходен с лизоцимом. Они имеют равный молекулярный вес, одинаковое количество S-S-связей, гомологичные N- и С-терминальные участки, что может указывать на их происхождение от общего предка [Barman T.E. 1970; Hopper K.E et al., 1973; Proctor S.D. et al., 1974].
Известно три полиморфных варианта α-лактальбумин - А, В, С.
В 1958 году Blumberg B.S.и Tombs M.P в группе животных South African White Fulani (B. indicus) обнаружили А и В варианты. Отличие А-варианта от В заключатся в замене аргинина на глутамин в позиции 10 полипептида.
Bell et al. в группе КРС Bali (banteng) (B. javanicus) обнаружил С-вариант. В настоящее время нет никаких доказательств существования этого аллеля у B. taurus, B. indicus. Этот вариант определяет замена аспарагиновой кислоты на аспарагин, но пока не выяснено в каком месте [Bell K. et al., 1981].
При исследовании связи генотипов коров по локусу α-лактальбумина с параметрами молочной продуктивности были получены не однозначные данные. Так, у коров сычевской породы более предпочтительным был генотип АА, то для животных швицкой породы таковым оказался ВВ-генотип [Костюкина и др., 2004].