
- •Введение
- •1. Литературный обзор
- •1.1. Молекуляно-генетический анализ количественных признаков.
- •1.2 Подходы для выявления аллельного полиморфизма
- •1.3. Характеристика генов основных белков молока.
- •1.3.1. Гены казеинов молока
- •1.3.2. Бета-лактоголобулин
- •1.4. Характеристика генов гормонов, влияющих на параметры молочной продуктивности
- •1.4.1. Соматотропин (gh)
- •1.4.2. Пролактин (prl)
- •1.5. Гипофизарный фактор транскрипции (pit-1)
- •2. Методы и объекты исследования
- •2.1. Выделение днк из крови
- •2.2. Определение белка в молоке.
- •2.3. Анализ полиморфизма гена каппа-казеина (csn3)
- •2.4. Анализ полиморфизма гена бета-лактоглобулина.
- •2.4.1. Анализ полиморфизма гена бета-лактоглобулина (βLg) по методике Medrano, et al., 1990 .
- •2.4.2. Анализ полиморфизма гена бета-лактоглобулина (βLg) по методике Гладырь е.А., 2001.
- •2.5. Анализ полиморфизма гена соматотропина по MspI-маркеру (gh/MspI)
- •2.6. Анализ полиморфизма гена соматотропина по AluI-маркеру (gh/AluI)
- •2.7. Анализ полиморфизма гена пролактина (prl)
- •2.8. Анализ полиморфизма гена гипофизарного фактора транскрипции (pit-1)
- •2.9. Статистическая обработка результатов
- •3. Результаты и обсуждение
- •3.1. Генетическая структура исследуемых групп крупного рогатого скота по гену каппа-казеина (csn3)
- •3.2. Генетическая структура исследуемых групп крупного рогатого скота по гену пролактина (prl).
- •3.3. Генетическая структура исследуемых групп крупного рогатого скота по гену гипофизарного фактора транскрипции (pit-I).
- •3.4. Генетическая структура исследуемых групп крупного рогатого скота по гену соматотропина (gh).
- •3.4.1. Исследование генетической структуры групп крупного рогатого скота по MspI-маркеру гена соматотропина.
- •3.4.2. Исследование генетической структуры групп крупного рогатого скота по AluI-маркеру гена соматотропина.
- •3.5. Сравнение распространения аллелей гена соматотропина по MspI- и AluI – маркерам у крс в Брянской области и других регионах.
- •3.6. Исследование генетической структуры групп крупного рогатого скота по гену бета-лактоглобулина (βLg).
- •3.7. Анализ сочетания мутаций при определении а и в аллелей гена β-лактоглобулина.
- •3.8. Определение гетерозиготности в изучаемых группах крупного рогатого скота
- •3.9. Анализ состава комплексных генотипов в исследуемых группах крс
- •4.0. Анализ влияния аллельных вариантов исследуемых генов на показатели молочной продуктивности крс.
- •4.1.1. Изучение связи генотипов бета-лактоглобулина с параметрами молочной продуктивности крс.
- •4.1.2. Определение влияния аллельных вариантов гена соматотропина по MspI-маркеру на параметры молочной продуктивности крс.
- •4.1.3. Анализ связи аллельных вариантов гена соматотропина по AluI-маркеру с параметрами молочной продуктивности крс.
- •4.1.4. Комплексное влияние вариантов гена соматотропина по AluI- и MspI - маркерам на молочную продуктивность
- •4.1.5. Анализ связи аллельных вариантов гена гипофизарного фактора транскрипции (pit-1) с параметрами молочной продуктивности крс.
- •Практические рекомендации
- •Список литературы
3.2. Генетическая структура исследуемых групп крупного рогатого скота по гену пролактина (prl).
На всех проанализированных образцах ДНК был амплифицирован фрагмент длинной 156 н.п. После обработки рестриктазой RsaI выявляли генотипы животных: генотипу АА соответствовал фрагмент 156 н п., генотипу АВ – 156, 82 и 72 н.п., генотипу ВВ – 82 и 74 н.п.
На рисунке 3.2.1. представлена электрофореграмма с продуктами рестрикции при определении генотипов пролактина.
При тестирование животных изучаемых групп, были выявлены А- и В-аллели гена пролактина.
Рис. 3.2.1 Электрофоретический анализ продуктов рестрикции, при определении генотипа пролактина. 1 – маркер молекулярных масс М27 (СибЭнзим); Генотипы образцов указаны на фотографии
Из таблицы 3.2.1. видно, что общим для анализируемых групп животных является превышение частоты А-аллеля над частой В-аллеля. Максимальная частота А-аллеля зафиксирована в группе коров айрширской породы (0,94).
Таблица 3.2.1
Генетическая структура анализируемых групп коров по гену пролактина
Группы животных |
n |
Частота встречаемости генотипов |
χ2 |
Частота встречаемостиаллелей |
Hobs |
Hex |
|||
АА |
АВ |
ВВ |
А |
В |
|||||
Коровы черно-пестрой породы |
55 |
0,75 |
0,21 |
0,04 |
0,754 |
0,87 |
0,13 |
0,2115 |
0,2188 |
Телята черно-пестрой породы |
16 |
0,71 |
0,28 |
0 |
0,119 |
0,84 |
0,15 |
0,2857 |
0,2449 |
Коровы айрширской породы |
50 |
0,87 |
0,12 |
0 |
1,290 |
0,94 |
0,06 |
0,0816 |
0,115 |
Частный скот |
146 |
0,39 |
0,55 |
0,06 |
7,243 |
0,66 |
0,33 |
0,5455 |
0,4444 |
P=0,05
При анализе частот генотипов телят и коров черно-пестрой породы, содержащихся в одном хозяйстве отмечено, что в группе телят в отличие от группы коров отсутствует ВВ-генотип. Это, вероятно, указывает на высокую внутривидовую изменчивость частот аллей и быстрое изменение генетической структуры стада, даже внутри одного хозяйства. В этих группах выявлены приближенные значения наблюдаемой и ожидаемой гетерозиготности.
В группе коров айрширской породы В-аллель обнаружен только в составе гетерозигот, которые в группе представлены с низкой частотой (12%). Такое распределение частот, вероятно, является следствием гомозиготизации преимущественно по одному аллелю и может привести к потери варианта гена.
В группе частного скота частота В-аллея максимальна из всех опытных групп (33%). Внутри группы чаще всего встречаются животные с гетерозиготным генотипом, их частота составляет 55%, за счет этого доля В-аллеля в этой группе максимальна (33%), несмотря на то, что частота ВВ-генотипа незначительно отличается от частоты этого генотипа в других группах.
В изучаемых группах КРС не вывалено достоверного отклонения частот аллей от теоретически ожидаемого,
И
з
рисунка 3.2.2 видно, что в стадах КРС
содержащихся в условиях специализированных
хозяйств, наблюдается высокая частота
гомозиготного генотипа АА. В группе
частного скота наблюдается преимущественное
присутствие гетерозигот, что отразилось
на значении наблюдаемой гетерозиготности.
Рис.3.2.2. Соотношение частот генотипов пролактина в анализированных группах КРС. 1 – группа коров черно-пестрой породы, ОАО «Снежка-Госома; 2 – частный скот (Жирятинский р-н, Брянской области); 3 – группа коров айрширской породы, СПХ Сельцо.
В таблице 3.2.2 представлены частоты В-аллеля пролактина выявленные группах крупного рогатого скота разных пород. Из таблицы видно, что в основном А-аллель является доминирующей во многих регионах мира. В анализируемых нами группах коров черно-пестрой породы и частного скота частота В-аллеля приближенно соответствует среднемировым значениям. В группе коров айрширской породы отмечена одна из самых низких зафиксированных частот этого аллеля (0,06). При анализе данных таблицы 3.2.2. можно установить, что частота аллелей пролактина не является породоспецифичной. Как и в случае с полиморфизмом гена каппа-казеина, наблюдается широкий разброс частот внутри породы КРС, даже в одном регионе. Это наблюдается как в стадах B. taurus, так и B. indicus.
Таблица 3.2.2
Частоты В-аллеля пролактина в группах КРС Брянской области и других регионов.
Порода |
Частота В-аллеля |
Ссылка |
Регион |
Jersey cattle |
0,691 |
A Dybus et al., 2005 |
Польша |
Red Sindhi (Zebu) |
0,54 |
A. Ratna Kumari et al., 2008 |
Индия |
Kankrej |
0,491 |
Sacravarty G. et al., 2008 |
Индия |
Najdi Cattle |
0,429 |
S. Sharifi et al., 2010 |
- |
Голштино-фризская |
0,417 |
K. Wojadak-Maksymiec et al., 2008 |
Польша |
Gir |
0,39 |
A. Ratna Kumari et al., 2008 |
Индия |
Черно-пестрая |
0,39 |
Хатами С.Р., |
Германия |
Ярославская |
0,35 |
Хатами С.Р., |
Россия, Ярославская обл. |
Частный скот |
0,33 |
Собственные данные |
Россия, Брянск |
Корейская |
0,322 |
Chung, E. R et al., 1998 |
Корея |
Slovak Pinzgauer |
0,32 |
P. Chrenek et al., 1988 |
Словакия |
Черно-пестрая |
0,29 |
Масуд. А. И др., 2007 |
Россия |
Черно-пестрая |
0,23 |
Собственные данные |
Россия, Брянск |
Красно-пестрая |
0,21 |
Масуд. А. И др., 2007 |
Россия |
Литовская черно-пестрая |
0,21 |
Rūta Skinkytė et al., 2005 |
Литва |
Черно-пестрая |
0,146 |
A Dybus et al., 2005 |
Польша |
Айрширская |
0,14 |
Юдина и др., 2001 |
Россия |
Черно-пестрая |
0,138 |
A Dybus et al., 2002 |
Польша |
Литовская красная |
0,13 |
Rūta Skinkytė et al., 2005 |
Литва |
Slovak Pied |
0,13 |
P. Chrenek et al., 1988 |
Словакия |
Sahiwal (Zebu) |
0,12 |
A. Ratna Kumari et al., 2008 |
Индия |
Montebeliard |
0,11 |
N Ghasemi et al., 2009 |
Иран |
Ongole |
0,1 |
A. Ratna Kumari et al., 2008 |
Индия |
Красная горбатовская |
0,08 |
Юдина и др., 2001 |
Россия |
Айрширская |
0,06 |
Собственные данные |
Россия, Брянск |
Голштинская |
0,05 |
P. Chrenek et al., 1988 |
Словакия |
Черно-пестрая |
0,046 |
Хатами С.Р., |
Россия, Московская обл. |