Результаты и обсуждения.

Рис.1. Спектры поглощения оксигемоглобина в сухих пленках.

1

2

3

Рис.1. Спектры поглощения сухих пленок полученных из образца содержащего 0,02 мл цельной крови (кривая 1), 0,04 мл крови (кривая 2), 0,06 мл крови (кривая 3).

Спектры зарегистрированы с применением светорассеивающей пластинки, исключающей влияние светорассеивания на измеряемую оптическую плотность.

3. Расчет относительных масс гемоглобина в сухих пленках.

Измерив диаметры нанесенных пятен (1,5 см; 1,4 см; 1,6 см), найдем их площади (S=π*R²): S₁= 1,766 см²; S₂=1,539 см²; S₃=2,01 см². Далее, рассчитаем параметр Q – отношение оптических плотностей при двух длинах волн, таких чтобы 0,1≤ Q ≤ 0,6 (причем для всех трех образцов участки спектра не должны сильно различаться). Этому условию соответствуют следующие длины волн:

1) λ₁= 440 нм; λ₂= 520 нм

2) λ₁= 584 нм; λ₂= 600 нм

3) λ₁= 600 нм; λ₂ = 610 нм

4) λ₁= 660 нм; λ₂ = 700 нм

Найденные значения параметра Q для первого образца: 1) 0,29; 2) 0,53; 3) 0,49; 4) 0,22; для второго образца:1) 0,33; 2) 0,52; 3) 0,46; 4) 0,20; для третьего образца: 1) 0,49; 2) 0,54; 3) 0,47; 4) 0,35. Отсюда по таблице находим значения q: для первого образца: 1) 0,388; 2) 0,935; 3) 0,825; 4) 0,273; для второго образца: 1) 0,46; 2) 0,91; 3) 0,745; 4) 0,244; для третьего образца: 1) 0,825; 2) 0,97; 3) 0,77; 4) 0,5.

Затем подставим найденные S, q, и известную D(λ₁) в формулу расчета m_отн – некоего показателя, пропорционального массе. Полученные значения относительных масс по каждому образцу усредняем, принимаем наименьшее значение за условную единицу и выражаем остальные величины. См. «Приложение».

3. Определение отношения масс гемоглобина в смывах сухих пятен.

Оптические плотности смывов, измеренные на спектрофотометре СФ-46 при длинах волн λ₁=578 нм и λ₂=620 нм равны: D₁=0,091,D₂=0,037 для первого образца;D₁=0,148, D₂=0,046 для второго образца; D₁=0,216, D₂=0,045 для третьего образца. Как показатель относительной массы используется величина ∆D=D₅₇₈ - D₆₂₀. Получаем: m_отн1=0,054, m_отн2=0,102, m_отн3=0,171. Соотношение 1,00 : 1,89 : 3,17. Данное соотношение наиболее точно отражает истинное соотношение содержаний в образцах гемоглобина.

Таблица. Относительные массы гемоглобина в исследованных образцах.

Результаты, полученные по сухим пленкам.	mотн гемоглобина в I 0,02мл), усл.ед.	mотн гемоглобина в II образце(0,04мл), усл.ед.	mотн гемоглобина в III образце(0,06мл), усл.ед.
Измерение 1	0,354	0,551	1,249
Измерение 2	0,399	0,597	1,099
Измерение 3	0,188	0,253	0,475
Измерение 4	0,0125	0,0114	0,0328
Среднее значение mотн по пленкам	0,238	0,353	0,714
Итоговое соотношение по сухим пленкам 1 : 1,5 : 3
Результаты, полученные по смывам пленок.	mотн гемоглобина в смыве I пятна	mотн гемоглобина в смыве II пятна	mотн гемоглобина в смыве III пятна
	0,054	0,102	0,171
Итоговое соотношение по смывам 1 : 1,9 : 3,2
По приготовлению соотношение масс должно быть 1:2:3

Выводы: Полученные значения относительных масс, определенных разными способами незначительно отличаются друг от друга и от исходного соотношения 1: 2 : 3 и примерно равны.

Спектр поглощения оксигемоглобина полученный по сухим пленкам имеет характерный вид, т.е. спектр оксигемоглобина имеет не только полосу Соре в фиолетовой области спектра (400-430 нм), но также две характерные полосы поглощения в зеленой и желтой областях спектра с максимумами при 545 нм и 578 нм. Однако, мы измеряем неоднородный объект, и поэтому спектр несколько «сглажен» - оптическая плотность в интенсивных максимумах занижена.

1) В смыве количество хромофора распределено с гораздо меньшей плотностью, чем на сухом мазке. Поэтому сухая пленка больше поглощает, следовательно, ее оптическая плотность будет больше, чем оптическая плотность смыва этой пленки. Из-за этого отличаются значения масс полученных разными способами.

2) Различие в площади пятен, а также освещаемой поверхности образцов обуславливает различия среди образцов полученных одним способом.

3) Приборная ошибка обусловлена неточностью измерительных систем приборов – в частности рН-метра, показания которого могут «скакать» во время измерений.

4) Также при расчете в формуле используется параметр Q, являющийся мерой неоднородности объекта, варьирующий в зависимости от степени его неоднородности. Он вносит разницу в соотношение величин.

5) Объект плохо вписывается в световой зонд.