Реферат

Дипломная работа посвящена выявлению мутаций в гене транстиретина (TTR) у больных с кардиомиопатиями. Исследование проводилось в Отделе молекулярной генетики НИИЭМ СЗО РАМН совместно с лабораторией кардиомиопатий ИССЗ СПбГМУ им. акад. И.П. Павлова. В Отделе молекулярной генетики ранее проводилось комплексное исследование, направленное на изучение механизмов фибриллогенеза транстиретина. Одним из аспектов этого исследования являлся анализ гена ТТR у больных кардиомиопатиями.

В ходе дипломной работы были выделены образцы ДНК из лейкоцитов крови 60 пациентов. С каждым из этих образцов была поставлена полимеразная цепная реакция для получения продуктов амплификации каждого из четырех исследуемых экзонов гена TTR. Проведен анализ конформационного полиморфизма одноцепочечной ДНК (SSCP) для каждого экзона. Была обнаружена только одна мутация (с. 1679 G>A) во втором экзоне гена TTR в гетерозиготном состоянии, приводящая к замене V30M в аминокислотной последовательности TTR. Мутация идентифицирована с помощью анализа полиморфизма длин рестрикционных фрагментов (ПДРФ-анализ) и автоматического секвенирования.

Дипломная работа изложена на 91 странице, включает 3 таблицы, 16 рисунков и 2 приложения. В работе было использовано 70 литературных источников, в том числе 52 на иностранных языках.

Содержание

Введение 6

1 Аналитический обзор 8

1.1 Транстиретин 8

1.1.1Строение и функции ТТR 8

1.1.2 Роль мутаций гена ТТR в образовании амилоидов 11

1.2 Амилоидоз 16

1.2.1 Представления об амилоидозах 16

1.2.2 Структура амилоида и фибрилл 20

1.2.3 Механизм образования амилоидных фибрилл 23

1.3 Общие сведения о кардиомиопатии 25

1.4 Методы выявления мутаций 27

2 Патентный поиск 33

3 Цель и задачи работы 35 4 Экспериментальная часть 36

4.1 Материалы исследования 36

4.1.1 Реактивы 36

4.1.2 Лабораторное оборудование 37

4.2 Методы исследования 39

4.2.1 Стандартные растворы 39

4.2.2 Выделение ДНК из замороженной крови 39

4.2.3 Электрофоретическое разделение ДНК

в агарозном геле 41

4.2.4 Выделение и очистка амплификатов

из агарозного геля 42

4.2.5 Полимеразная цепная реакция 42

4.2.6 Электрофоретическое разделение продуктов

амплификации в 8% полиакриламидном геле (ПААГ) 43

4.2.7 Окрашивание гелей 44

4.2.7.1 Окрашивание бромистым этидием 44

4.2.7.2 Окрашивание ПААГ нитратом серебра 44

4.2.8 Анализ конформационного полиморфизма

одноцепочечной ДНК (SSCP) 45

4.2.9 Анализ полиморфизма длин

рестрикционных фрагментов 46

5 Результаты и обсуждение 47

5.1 Результаты 47

5.2 Обсуждение полученных результатов 57

6 Выводы 59

Список использованных источников 60

Приложение А. Охрана труда и окружающей среды 67

Приложение Б. Оценка технико-экономических

результатов исследования 79