Выявление жгутиков у культуры подвижных микроорганизмов методом серебрения по морозову:

Техника окраски:

1. Прокаленной и охлажденной петлей слегка прикасаются к поверхности колоний или газонного роста микробной культуры, чтобы не вызвать механического повреждения жгутиков.

2. Полученный материал переносят в преципитационную пробирку, на дно которой налито 0,1 - 0,2 мл 1% раствора формалина. Петлю оставляют в неподвижном состоянии на несколько минут. За это время часть микробов переходит с петли в раствор. Эту процедуру повторяют 2-3 раза, пока жидкость не станет слабо опалесцировать.

3. Приготовленную взвесь ставят на 1 - 2 ч в термостат при 37⁰С для равномерного распределения микроорганизмов в жидкой среде.

4. Затем в пробирку с 1,5 - 2 мл дистиллированной воды вносят 1-2 капли формалиновой бактериальной взвеси. Через 10-15 мин, после того как бактерии относительно равномерно распределятся по всему объему жидкости, наносят 5-6 капель полученной взвеси на предметное стекло, не касаясь его петлей.

5. Капли высушивают на воздухе, не размазывая.

6. Для лучшего протравливания обрабатывают их реактивом № 1 (Реактив № 1: 1 мл ледяной уксусной кислоты. 2 мл формалина, 100 мл дистиллированной воды) в течение 1 мин.

7. Остатки протравы сливают, мазок промывают водой.

8. После подсыхания мазка на препарат наливают реактив № 2 (Реактив № 2: 5 г танина, 1 мл жидкой карболовой кислоты, 100 мл дистиллированной воды), подогревают на лёгком пламени до появления паров (1 мин).

9. Тщательно промывают водой (1-2 мин).

10) На подсушенный после промывания препарат наносят реактив № 3 (Реактив № 3: 5 г кристаллического нитрата серебра растворяют в 100 мл дистиллированной воды, отливают 20 мл в другой сосуд, к оставшимся 80 мл раствора серебра по каплям добавляют раствор аммиака, пока не растворится образующийся осадок и не останется лёгкая опалесценция. Если аммиака будет слишком много, то из отлитых в другой сосуд 20 мл раствора серебра надо по каплям добавлять до получения нужной слабой опалесценции) и выдерживают его до появления тёмно- коричневой окраски мазка.

11) Тщательно промывают водой.

12) Высушивают и микроскопируют с иммерсионной системой.

Оценка результатов. Тела микробных клеток окрашиваются в коричневато-чёрный (угольно-черный) цвет, жгутики приобретают различные оттенки коричневого цвета и отчетливо видны на окрашенном в слабо-желтый цвет фоне.

Методы выявления спирохет и лептоспир

1. МЕТОД ИЗУЧЕНИЯ В НАТИВНОМ ПРЕПАРАТЕ

Для исследования живых спирохет и лептоспир используется метод тёмного поля и прямая люминесцентная микроскопия.

Препараты для них готовят одинаково с небольшими различиями:

- берут 1 каплю биосубстрата (кровь, вода, соскоб из язвы и пр.), наносят на стекло;

- осторожно закрепляют покровным стеклом и устанавливают на столик темнопольного, либо люминесцентного микроскопа;

- микроскопируют с иммерсионной системой.

2. Микроскопия в темном поле

1. Конденсор Аббе в обычном световом микроскопе заменяют на специальный тёмнопольный. При его отсутствии модернизируют обычный. Для этого:

- из чёрной фотографической бумаги вырезают круг размером с 50 копеечную монету;

- наклеивают на середину верхней линзы конденсора строго посередине с круговым зазором для света;

- фиксируют конденсор в микроскопе.

2. Перед микроскопией на конденсор наносят каплю дистиллированной воды для предотвращения рассеивания света, но можно не наносить.

3. На покровное стекло препарата наносят каплю иммерсионного масла и микроскопируют.

4. При работе с большим объектом в биоматериале можно вместо ОИ-90 использовать один из сухих объективов (*7, * 10, *20, *40), а масло заменить дистиллированной водой.

Учёт результатов. При микроскопии на тёмном фоне видны серебристые движущиеся спирохеты.