- •Приготовление и окраска микропрепаратов:
- •Способы фиксации мазков из микробов и смешанного материала
- •Существует два метода химической фиксации мазков:
- •Микроскопия препарата с иммерсионным объективом
- •Изучение тинкториальных свойств бактерий по методу грама
- •Окраска препарата из мочи по циль – нильсену в модификации хузе
- •Окрасить мазок из дрожжеи по пешкову (выявление оболочки)
- •А) окраска нуклеоида бактерий ядротропным методом фельгена
- •Б) окраска нуклеоида бактерий по романовскому – гимза
- •А) выявление зёрен волютина по нейссеру
- •Б) выявление зёрен волютина простым методом леффлера
- •Выявление капсул у бактерий методом бурри – гинса
- •Выявление спор у бактерии методом ожешко
- •1. Метод шукевича:
- •2. Метод посева в столбик полужидкой среды по пешкову:
- •Выявление жгутиков у культуры подвижных микроорганизмов методом серебрения по морозову:
- •Методы выявления спирохет и лептоспир
- •2. Микроскопия в темном поле
- •Люминесцентная прямая микроскопия
- •Техника окраски:
Б) выявление зёрен волютина простым методом леффлера
Техника окраски:
1. Исследуемый материал наносят на чистые обезжиренные предметные стекла, растирают его тонким равномерным слоем по поверхности стекла, высушивают на воздухе.
2. Препарат фиксируют 3 мин в 96% этиловом спирте и высушивают.
3. На высушенный препарат наносят каплю 1% щелочного раствора метиленового синего по Леффлеру и окрашивают в течение 3 - 10 минут.
3. Промывают погружением в стакан с водопроводной водой.
4. Высушивают на воздухе и микроскопируют с иммерсионной системой.
Оценка результата. При правильном окрашивании в микроскопируемом препарате видны голубые бактерии на бесцветном или слабо голубом фоне.
Выявление капсул у бактерий методом бурри – гинса
Техника окраски:
Черную тушь смешивают с культурой, делают мазок препарата, как мазок крови и высушивают препарат.
После этого проводят фиксацию препарата химическим способом: смесью Никифорова или другими смесями.
Промывают водой.
Окрашивают тела микробных клеток карболовым фуксином Циля, разведенным 1:3, в течение 3-5 минут.
Препарат промывают водой, высушивают и микроскопируют с иммерсионной системой.
Оценка результата. На темном фоне препарата хорошо видны бесцветные капсулы, внутри которых находятся тела бактерий красного/ярко-малинового цвета.
Выявление спор у бактерии методом ожешко
Техника окраски:
На высушенный нефиксированный препарат (мазок готовится толстым и на краю стекла) наливают несколько капель 0,5% раствора хлористоводородной кислоты (HCl) и подогревают 1 - 2 мин над пламенем горелки/спиртовки до закипания, после чего остатки кислоты сливают.
Препарат (остывший) промывают водой, подсушивают и фиксируют над пламенем горелки/спиртовки.
Мазок окрашивают карболовым фуксином Циля (основной краситель) при нагревании до появления паров.
Обесцвечивают 5% раствором серной кислоты (дифференцирующее вещество) в течение нескольких секунд.
Промывают водой.
Докрашивают 3 - 5 мин метиленовым синим Леффлера (дополнительный краситель), высушивают и микроскопируют с иммерсией.
Оценка результатов. Споры бактерий окрашиваются в красный цвет, цитоплазма приобретает синий цвет, вегетативные тела микробных клеток – голубого цвета.
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПОДВИЖНОСТИ БАКТЕРИЙ МЕТОДОМ ПОСЕВА:
1. Метод шукевича:
Испытуемую культуру бактерий засевают в конденсационную воду косого МПА, не прикасаясь к его поверхности.
Ставят в термостат при +37С° на 18-24 часа.
Учёт результатов ведут по феномену роения, в процессе которого растущая культура ползёт по «косячку» вверх. Неподвижная культура развивается только в конденсате, а «косячок» МПА остаётся стерильным.
2. Метод посева в столбик полужидкой среды по пешкову:
Испытуемую культуру осторожно бактериальной петлёй засевают в столбик 1-1,5 % МПА.
Ставят в термостат при +37С° на 18-24 часа.
Учёт результатов производят по характеру роста: а) неподвижные бактерии растут строго по ходу укола; б) подвижные бактерии дают рост, напоминающий ёршик с расходящимися в стороны шипами. Оценка роста проводится визуально.