Окраска препарата из мочи по циль – нильсену в модификации хузе

Техника окраски:

1. Мазок окрашивают карболовым фуксином Циля (основной краситель) при нагревании 3-5 минут или окрашенной фуксином бумагой до появления паров, но, не доводя краситель до кипения.

2. Препарат остудить, снять бумагу, слить краситель и промыть водой.

3. Обесцвечивают 5% раствором серной кислоты (дифференцирующее вещество) в течение 1-2 мин.

3. Остаток кислоты слить, препарат промыть водой и обработать этанолом 20 сек.

4. Докрашивают 3-5 мин водным раствором метиленового синего Леффлера (дополнительный краситель).

5. Препарат промыть водой, подсушить и микроскопировать.

Оценка результатов. М. tuberculosis к этанолу устойчивы и не обесцвечиваются, оставаясь красными. М. smagmatis под влиянием спирта эту краску теряют, но при докраске метиленовой синью становятся синими.

Окрасить мазок из дрожжеи по пешкову (выявление оболочки)

Техника окраски:

1. Приготовленный мазок фиксируют над пламенем спиртовки.

2. На фиксированный мазок наливают метиленовый синий Леффлера и кипятят над пламенем спиртовой горелки 20 - 30 секунд.

3. Остывший препарат промывают водой и докрашивают 0,5% раствором нейтрального красного в течение 30 – 60 секунд.

4. Опять промывают дистиллированной водой и высушивают на воздухе.

5. Микроскопируют с иммерсией.

Оценка результатов. Споры окрашиваются в голубой, либо в синий цвет. Протоплазма вегетативного тела бактерий — розовая или красная.

А) окраска нуклеоида бактерий ядротропным методом фельгена

Техника окраски:

1) Приготовить препарат из бактериальной культуры или дрожжей.

2) Высушить, зафиксировать в жидкости Карнуа 7 мин.

3) Промыть 80 % этанолом.

4) Обработать 1 N НСl, подогретой до 60⁰ С, в течение 7 мин, затем опустить препарат на 1-2 мин в холодную 1N HCl.

5) Обработать фуксинсернистой кислотой (реактив Шиффа) в течение 3-4 часов.

6) Промыть водой, высушить, микроскопировать с иммерсией.

Оценка результата. Ядерное вещество окрашено в фиолетовый цвет.

Б) окраска нуклеоида бактерий по романовскому – гимза

Техника окраски:

1. приготовленный препарат высушивают на воздухе;

2. фиксируют жидкостью Карнуа или смесью Никифорова;

3. фиксированные мазки подсушивают на воздухе и окрашивают рабочим раствором Романовского - Гимзы (к 10 мл дистиллированной воды добавляют 10 капель коммерческого красителя Романовского - Гимзы), погружая стекло в стаканчик с красителем.

4. Через 1 ч краситель сливают, и препарат промывают дистиллированной водой.

5. Готовый препарат высушивают на воздухе и микроскопируют.

Оценка результатов. Протоплазма форменных элементов ткани окрашивается в голубовато-синий цвет, ядра клеток - в фиолетово-красный, тела микробных клеток приобретают фиолетово-красный цвет.

А) выявление зёрен волютина по нейссеру

Техника окраски:

1. Готовят мазок, высушивают, фиксируют жаром.

2. Наливают на мазок 1-2 капли уксуснокислого метиленового синего Нейссера, красят 1 - 2 минуты.

3. Краску сливают, наносят раствор Люголя на 1 мин.

4. Промывают водой, подсушивают фильтровальной бумагой.

5. Наносят раствор везувина (хризоидина) для окраски тела бактерии на 1 – 3 мин.

6. Смывают водой, высушивают, микроскопируют.

Оценка результатов. В мазке цитоплазма бактерий окрашивается в жёлто-коричневый цвет, зёрна волютина - от сине-зелёного до сине-чёрного цвета.