Глава 20

КУЛЬТУРАЛЬНЫЕ МЕТОДЫ (ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ)

Питательные среды, выпускаемые промышленностью

Питательный агар, питательный бульон, агар Эндо, агар с эозин метиленовым синим (ЭМС-агар), агар Плоскирева, Висмут - сульфит агар, среда с индикатором ВР и одним из углеводов (глюкозой, лактозой, мальтозой, сахарозой или маннитом), тиамин - цистин глутаминовый агар, среда для определения чувствительности к антибиотикам Мюллер-Хинтон агар, агар цитратный Кристенсена агар цитратный Симмонса, агар ацетатный, агар элективный солевой для стафилококков,"Среда для контроля стерильности",среда Клиглера, селенитовый бульон.

Питательные среды, приготовляемые в бактериологических лабораториях.

Кровяной агар. Приготовление среды. В качестве основы используют сухой питательный агар. По прописи, указанной на этикетке, готовят 2% агар, рН 7,4-7,6. К расплавленному и охлажденному до 45 град. С агару, соблюдая правила асептики, добавляют 5% (5 мл крови на 100 мл питательной среды) дефибринированной бараньей, лошадиной или кроличьей крови, цитратной или дефибринированной крови человека без антибактериальных препаратов. Смесь тщательно перемешивают, чтобы не образовалось пены, и разливают в стерильные чашки Петри, предварительно подогретые в термостате, слоем 3-4 мм. Слой агара должен быть равномерно окрашен в красный цвет. Хранят не более двух недель в целлофановых мешках при 4 град.-6 град. С.

Агар с гретой кровью (шоколадный агар)

Принцип. Прогревание крови способствует освобождению из эритроцитов факторов роста X (гемин) и V (никотинамидадениндинуклеотид), необходимых для культивирования гемофилов.

Приготовление. 1. К 100 мл расплавленного и охлажденного до 80 град. С питательного агара, рН 7,4, добавляют 10 мл дефибринированной крови лошади или человека (без консервантов), тщательно перемешивают, после чего помещают в водяную баню и, постоянно встряхивая, держат при температуре 70 град. С - 80 град. С до тех пор, пока цвет агара не станет шоколадным (25-30 мин.).

2. 5 мл дефибринированной крови кролика и 100 мл питательного агара тщательно взбалтывают и ставят на 2-3 минуты в водяную баню при 80 град. С. Затем добавляют еще 5 мл крови и вновь ставят в водяную баню на 2-3 минуты. При приготовлении шоколадного агара следует обратить внимание на правильный прогрев, при слишком слабом прогреве агар будет иметь коричнево - красный цвет, при слишком сильном - темно - коричневый. Шоколадный агар должен иметь светло - коричневую окраску. Среду разливают в чашки Петри. Хранят не более двух недель в целлофановых мешках при 4 град.-6 град. С.

Сахарный бульон.

Приготовление среды. К 100 мл питательного бульона, рН 7,2-7,4, прибавляют 1 г глюкозы. Стерилизуют текучим паром 3 дня подряд по 30 минут или при 0,5 атм. 30 минут.

Сывороточный бульон.

Приготовление среды. К 80 мл стерильного питательного бульона, рН 7,2-7,4, стерильно добавляют 20 мл лошадиной или бычьей сыворотки. Среду разливают в пробирки по 5 мл, выдерживают 2 суток в термостате для контроля стерильности, а затем хранят в холодильнике.

Сывороточный агар.

Приготовление среды. В качестве основы используют 1,5% агар, рН 7,4, тиамин - цистин - глутаминовый; для коринебактерий - питательный агар, рН 7,6. К 90 мл расплавленного и остуженного до температуры 50⁰ . С агара добавляют 10 мл инактивированной при температуре 56⁰ С в течение 30 минут сыворотки, консервированной хлороформом, или без консерванта. После перемешивания среду разливают в чашки. Среда годна к употреблению только в течение 48 часов при хранении ее в холодильнике. Перед посевом чашки, хранившиеся в холодильнике, должны быть подогреты до температуры 37⁰ С.

Среда Тароцци.

Приготовление среды. Нежирное мясо или печень (можно плаценту) нарезают мелкими кусочками и заливают трехкратным количеством питательного бульона, рН 7,4-7,6. Кипятят 30 минут. Затем бульон фильтруют, а кусочки мяса или печени промывают на сите водопроводной водой и просушивают фильтровальной бумагой. Распределяют во флаконы по 15-20 г (8-10 кусочков) и в пробирки по 2-3 кусочка печени или мяса и заливают по 300 мл бульона во флаконы и по 5-6 мл в пробирки. Стерилизуют 30 мин. при 1 атм.

Желточно-солевой агар.

Приготовление среды. В качестве основы используют элективный солевой агар для стафилококков. По прописи, указанной на этикетке, готовят 1,8-2% агар, рН 7,2-7,4. К расплавленному и охлажденному до 45⁰ – 50⁰ С агару, соблюдая правила асептики, добавляют 20% желточной взвеси (асептически извлеченный из яйца желток взбалтывают с 200 мл изотонического раствора хлорида натрия). Смешивают тщательно агар с желточной взвесью, разливают по 20 мл в чашки Петри. Хранят в холодильнике в течение двух недель.

Среда Хью-Лейфсона.

Принцип. Среда позволяет уловить изменения рН даже при слабом окислении углеводов, что достигается заменой аминокислот питательной среды пептоном. В этой среде отсутствуют щелочные продукты расщепления аминокислот, которые могут нейтрализовать кислые продукты при утилизации углеводов.

Ингредиенты:

Пептон - 2,0 г

Натрий хлористый - 5,0 г

Калий фосфорнокислый двузамещенный (К2НРО4) - 0,3 г

Глюкоза - 10,0 г

Агар - 3,0 г

Бромтимоловый синий - 0,03 г

Дистиллированная вода - 1000,0 мл

Приготовление среды. К воде прибавляют пептон, натрий хлористый и агар. Смесь подогревают до расплавления агара. Затем добавляют калий фосфорнокислый двузамещенный и глюкозу. Продолжают кипятить 2-3 минуты. Смесь подщелачивают 20% раствором едкого натра до рН 7,4-7,5, доводят объем среды до первоначального и добавляют 3 мл 1% водного раствора бромтимолового синего. Среду фильтруют через ватно-марлевый фильтр, разливают по 10-15 мл в стерильные пробирки. Стерилизуют при 0,5 атм. 20 минут. Цвет среды до стерилизации - синий, после автоклавирования - травянисто-зеленый, рН 7,1-7,2. При кислом рН среда желтеет.

Среда Сабуро.

Приготовление. На 1 л дистиллированной воды 10,0 г пептона, 18,0 г агар - агара. Нагревают до расплавления агара, добавляют 40,0 г глюкозы, рН 5,8, стерилизуют при 0,5 атм. (116 град. С) 30 минут.