3.Определение содержания холестерина в лвп сыворотки крови ферментативным методом.

Принцип метода. Фракции липопротеинов крови ( ХМ, ЛОНП, ЛНП) осаждают раствором фосфорно-вольфрамовой кислоты и хлорида магния. В надосадочной жидкости после центрифугирования остаются ЛВП, в которых определяется холестерин ферментативным методом.

Ход работы. К 2 мл раствора, содержащего смесь ферментов, добавить 0,02 мл центрифугата, содержавшего ЛВП. Перемешать, инкубировать в течение 30 минут при комнатной температуре. Затем добавить 1 мл хромогена, содержащего 4-аминоантипирина 0,7 ммоль/л и фенола 2 ммоль/л. Развивается красная окраска, интенсивность которой измеряется на ФЭКе при 500 нм в кювете 1 см. Степень поглощения исследуемого раствора ( А центрифугата) используется при расчете.

Расчет: ХС-ЛВП (ммоль/л) =( А центрифугата / А стандарт) × 1,29

А стандарт=0,4 – это степень поглощения стандартного раствора холестерина с концентрацией 1,29 ммоль/л ( 0,5 г холестерина в 1 мл раствора).

4.Определение коэффициента атерогенности.

ХС-ЛВП используется для определения коэффициента атерогенности, по которому судят о вероятности атеросклероза:

Общий ХС – ХС - ЛВП

Коэффициент атерогенности=

ХС – ЛВП

СХЕМА ПРОТОКОЛА

Определяемый показатель	Принцип метода	Норма содержания	Формула расчета	Результат
1. Определение содержания общего холестерина в сыворотке крови ферментативным методом	Холестерин и его эфиры выделяются из липопротеинов крови детергентами. Эфиры холестерина гидролизуются с участием холестеролэстеразы. Образуeтся окрашенное вещество хинонимин, по интенсивности окраски которого судят о количестве холестерина в исследуемом образце.	3,9-6,5 ммоль/л	( Аоп/Аст)×5,17 г/л А оп=0,25 А ст=0,3
2. Определение содержания холестерина в ЛВП сыворотки крови ферментативным методом	Фракции липопротеинов крови ( ХМ, ЛОНП, ЛНП) осаждают раствором фосфорно-вольфрамовой кислоты и хлорида магния. В надосадочной жидкости после центрифугирования остаются ЛВП, в которых определяется холестерин ферментативным методом.	1,3 ммоль/л	( А оп/Аст)×1,29 ммоль/л А оп=0,38
3. Определение коэффициента атерогенности	ХС-ЛВП используется для определения коэффициента атерогенности, по которому судят о вероятности атеросклероза.	2-2,5 (до 30 лет) 3-3,5 ( более 30 лет)	( Х общ-Х ЛВП)/ Х ЛВП