
- •Глава 8 методы генной инженерии. Промышленный синтез белков, инсулина, соматотропина и интерферона
- •8.1. История создания генетической инженерии
- •8.2. Схема строения молекулы днк и триплетность генетического кода
- •Модель днк
- •8.3. Ферменты в генной инженерии
- •8. 4. Технология получения рекомбинантной молекулы днк
- •Рекомбинантной молекулы днк
- •8. 5. Векторы, используемые для клонирования днк
- •8. 6. Экспрессия генов в бактериальных клетках и микроорганизмах
- •До копирования всего структурного гена
- •С большой рибосомной субъединицей
- •В качестве объекта для клонирования и экспрессии
- •8.7. Метод электрофорезного разделения днк и этапы идентификации днк по Саузерну
- •Для электрофореза днк в агаровом геле
- •Идентификации днк методом Саузерн-блот гибридизации
- •8. 8. Секвенирование днк и получение генов
- •Семейства меченных фрагментов днк
- •Полученной методом секвенирования днк
- •Днк ферментативным методом
- •8. 9. Амплификация (увеличение числа копий) фрагментов днк с помощью метода полимеразной цепной реакции (пцр)
- •Фрагмента днк
- •8.10. Генетическая инженерия и ее возможности для практики
- •8. 11. Промышленный синтез белков
- •«Расплодки»
- •8. 12. Биотехнология получения инсулина, гормона роста и интерферона
- •При синтезе интерферона человека в e. Coli.
- •Глава 9
- •9. 2. Трансгенные животные (метод получения)
- •9. 2. 1. Методы введения чужеродного гена в организм животного
- •9.2.2. Создание разных видов трансгенных животных
- •9. 2. 3. Клонирование
- •В яйцеклетку (по Беквисту)
- •Методом пересадки ядер
- •9. 2. 4. Межвидовые пересадки эмбрионов и получение химерных животных
- •9. 2. 5. Получение гомозиготных диплоидных потомков
- •Диплоидных потомков
- •9. 2. 6. Создание партеногенетических животных
- •9. 2. 7. О генетическом риске и биобезопасности в биоинженерии и трансгенных технологиях
- •9. 3. Государственное регулирование безопасности генно-инженерной деятельности в Республике Беларусь
- •Глава 10 иммобилизованные ферменты
- •10. 1. Понятие «инженерная энзимология»
- •И иммобилизация ферментов
- •И Saccharomyces carlsberqensis, используемые для получения фермента инвертазы
- •10.2. Механизм биотехнологического действия ферментов
- •10. 3. Технология глубинного культивирования микроорганизмов – продуцентов ферментов.
- •10. 4. Технология выделения и очистки ферментных препаратов
- •10. 5. Иммобилизованные ферменты. Методы иммобилизации
- •10. 6. Практическое применение иммобилизованных ферментов
- •При растворении тромбов в кровеносных сосудах
- •«Искусственная почка»
- •Глава 11
- •Гидроксилирование кортизола
- •11. 2. Методы контроля репродуктивной функции у животных
- •11. 3. Нейро-гуморальная регуляция внутрияичниковых процессов. Рост и развитие эмбрионов
- •Внутрияичниковых процессов
- •11. 4. Биотехнология получения потомков животных желаемого пола
- •Быков производителей по полу
- •Глава 12 получение аминокислот и белка одноклеточных организмов
- •12.1. Содержание незаменимых аминокислот в белках некоторых микроорганизмов
- •12. 2. Выращивание кормовых дрожжей
- •12.3. Белковые концентраты из бактерий
- •На газообразных углеводородах
- •12.4. Кормовые белки из водорослей
- •12. 5. Белки микроскопических грибов
- •12. 6. Кормовые белковые концентраты из растений
- •12. 7. Производство незаменимых аминокислот
- •Из аспарагиновой кислоты
- •12. 8. Производство кормовых витаминных препаратов
- •12. 9. Кормовые липиды
- •12. 10. Производство ферментных препаратов
- •Глава 13
- •13. 2. Результаты использования пребиотиков
- •13. 3. Эффективность использования гербиотиков и симбиотиков
- •13. 4. Результаты применение заквасок для силосования
- •Заключение
- •Литература Основная
- •Дополнительная
- •Содержание
И Saccharomyces carlsberqensis, используемые для получения фермента инвертазы
10.2. Механизм биотехнологического действия ферментов
Получаемая с помощью инвертазы фруктоза оказывает благоприятное действие на организм больного человека.
Фруктоза применяется: 1.В питании людей, больных диабетом. Ее расщепление не зависит от инсулина, что способствует нормализации синтеза гликогена в организме. 2.Фруктоза улучшает усвоение препаратов, содержащих железо, поэтому ее можно использовать при лечении анемии, вызванной недостатком ионов железа в организме. 3. Улучшает состояние людей, страдающих сердечной недостаточностью. 4. Она предотвращает накопление жира в печени. 5.Фруктоза снижает заболеваемость кариесом.
Лактаза – фермент, который расщепляет лактозу (сахар, содержащийся в молоке) на галактозу и глюкозу. Лактоза с трудом усваивается животными организмами, не сбраживается хлебопекарными дрожжами. Слабая растворимость лактозы мешает переработке молока. Применение иммобилизованной лактазы позволяет: 1. Получать концентрированные молочные продукты. 2. Избегать добавления химических стабилизаторов в мороженое. 3. Увеличить питательность смесей для детского питания. 4. Осуществлять ферментативный гидролиз лактозы в молочной сыворотке, что позволяет применять ее в качестве корма для животных и птицы.
Ферменты сохраняют свои уникальные свойства (эффективность, специфичность действия) вне клеток, поэтому их традиционно широко применяют в практике. Они являются нетоксичными биологическими катализаторами, оказывающими «мягкое» воздействие. Используется доступное сырьё (в том числе отходы), поэтому их получение в выгодно с экономической и экологической точек зрения.
По объёму производства ферменты занимают третье место после аминокислот и антибиотиков. Из более 2000 известных в настоящее время ферментов в промышленности используется около 30. Основная часть ферментов, поступающих на мировой рынок, приходится на долю гидролаз, из которых 60% составляют пептидогидролазы, использующиеся в качестве детергентов в производстве синтетических моющих средств, а 30% – гликозидазы, применяющиеся в производстве кондитерских изделий, фруктовых и овощных соков. Ферменты находят применение в текстильной, кожевенной, целлюлозобумажной, медицинской, химической промышленности (табл.10.1).
Таблица 10.1. Область использования ферментов
Название фермента |
Источники фермента |
Химические и биотехнологический процессы. Область использования |
1 |
2 |
3 |
Амилаза |
Бактерии, грибы (Bacillus sp. Aspergillus niger) |
Гидролиз крахмала до декстринов, мальтозы и глюкозы. Спиртовая, пивоваренная промышленность, хлебопечение, получение патоки, глюкозы |
Глюко-изомераза |
Более 80 видов микроорганизмов (Bacillus sp., Streptomices albus) |
Изомеризация D- глюкозы в D – фруктозу. Кондитерская, ликёроводочная, безалкогольная промышленность, хлебопечение |
Глюко-оксидаза и каталаза |
(Penicillium chrisogenum, P. casei) |
Удаление кислорода и глюкозы (из яичного порошка, мясных и др. продуктов). Виноделие, пивоваренная, консервная, соковая и безалкогольная промышленность |
Липаза |
Поджелудочные железы животных, семена растений, микроорганизмы (Candida lipolitica, Streptomices flavor-griseus) |
Гидролиз жиров и масел. Пищевая, лёгкая, медицинская промышленность, сельское хозяйство, коммунальное хозяйство, бытовая химия |
Пектиназа |
Многие микроорганизмы (Aspergillus ssp.,Fusarium ssp., Penicillium ssp.и др.) |
Гидролиз галактуронана, осветление вина и фруктогвых соков |
Целлюлаза |
Микроорганизмы: Closnridium ssp., Trichoderma reesei, Alternaria tenuis |
Гидролиз целлюлозы до глюкозы. Производство пищевых и кормовых белковых препаратов, этанола, глюкозо-фруктозных сиропов. Спиртовая, пивоваренная, пищеконцентратная промышленность. |
Продолжение таблл.10. 1. |
||
1 |
2 |
3 |
Пептидогидролаза |
Поджелудочная железа, и слизистая желудка животных; плоды, побеги, отходы переработки некоторых растений (дыня, инжир, ананас), микроорганизмы (Bacillus ssp., Aspergillus ssp., Penicillium ssp., Streptomices ssp.) |
Лизис белка. Получение аминокислот, производство и получение сыра, размягчение мясных и рыбных изделий, выделка кожи, активизация пищеварения. Пивоварение, виноделие, хлебопечение, пищевая промышленность, сельское хозяйство, медицина |
Фруктофуранозидаза |
Микроорганизмы: Aspergillus ssp., Penicillium ssp., Fusarium ssp., Bacillus subtilis |
Инверсия сахарозы. Кондитерская, ликёроводочная, безалкогольная промышленность, сиропопроизводство |
По прогнозам учёных, основным потребителем ферментов в ближайшем будущем остаётся пищевая промышленность. Главное место среди этих энзимов занимают глюкоизомераза и глюкоамилаза, применяющиеся для приготовления обогащённых фруктозой кукурузных сиропов и составляющие около 50% рынка пищевых энзиматических препаратов.
Для деградации и модификации органических соединений, поступающих в окружающую среду, используют ферменты пептидогидролазы. Перспектива для очистки сточных вод - новая технология, основанная на использовании реакции пластеинообразования, открытой А.Я. Данилевским в 1996 году. Сущность работ учёного состоит в практическом доказательстве возможности синтеза белковоподобных веществ (пластеинов) под действием ферментов. Сточные воды содержат аминокислоты и пептиды, концентрация которых возрастает в результате гидролиза белковых компонентов отходов под воздействием пептидогидролаз. Данная технология уже внедрена в большинстве стран Европы, нацелена на производство в промышленных масштабах кормовых белков из аминокислот и пептидов сточных вод.
Ферменты широко используют в медицине, например в составе лечебных препаратов. Амилазу и липазу применяют при заболеваниях желудочно-кишечного тракта и печени. В последние годы эффективно применяют протеиназы в лечении злокачественных новообразований. Это объясняется бóльшей проницаемостью мембран раковых клеток для ферментов в сравнении с нормальными клетками, благодаря чему опухолевые клетки быстро лизируются при введении смеси протеиназ (препарат «папайотин»).
Фермент плазмин используют для растворения тромбов в кровеносных сосудах; коллагеназу – для рассасывания рубцовых образований; эластазу – для задержки развития атеросклероза; лизоцим – для лечения конъюнктивитов; дезоксирибонуклеазу из стрептококка (стрептодорназа) – для лечения заболеваний верхних дыхательных путей и роговицы глаза.
Важнейшую область применения ферментов в медицине составляет диагностика, то есть тестирование патологии того или иного органа человека по уровню активности фермента или соотношению его множественных форм и изоферментов. Так, аспартатаминотрансфераза служит для выявления инфаркта миокарда; аланинаминотрансфераза – для диагностики заболеваний печени; глутамилтрансфераза – для блокировки отторжения органов при их пересадке и т. д.
Таким образом, производство ферментных препаратов занимает одно из ведущих мест в современной биотехнологии и относится к тем её отраслям, объём продукции которых постоянно растёт, а сфера применения неуклонно расширяется. По объёму производства ферментов лидируют страны Европы, но в последние годы активизировались также США и Япония.