
- •Глава 8 методы генной инженерии. Промышленный синтез белков, инсулина, соматотропина и интерферона
- •8.1. История создания генетической инженерии
- •8.2. Схема строения молекулы днк и триплетность генетического кода
- •Модель днк
- •8.3. Ферменты в генной инженерии
- •8. 4. Технология получения рекомбинантной молекулы днк
- •Рекомбинантной молекулы днк
- •8. 5. Векторы, используемые для клонирования днк
- •8. 6. Экспрессия генов в бактериальных клетках и микроорганизмах
- •До копирования всего структурного гена
- •С большой рибосомной субъединицей
- •В качестве объекта для клонирования и экспрессии
- •8.7. Метод электрофорезного разделения днк и этапы идентификации днк по Саузерну
- •Для электрофореза днк в агаровом геле
- •Идентификации днк методом Саузерн-блот гибридизации
- •8. 8. Секвенирование днк и получение генов
- •Семейства меченных фрагментов днк
- •Полученной методом секвенирования днк
- •Днк ферментативным методом
- •8. 9. Амплификация (увеличение числа копий) фрагментов днк с помощью метода полимеразной цепной реакции (пцр)
- •Фрагмента днк
- •8.10. Генетическая инженерия и ее возможности для практики
- •8. 11. Промышленный синтез белков
- •«Расплодки»
- •8. 12. Биотехнология получения инсулина, гормона роста и интерферона
- •При синтезе интерферона человека в e. Coli.
- •Глава 9
- •9. 2. Трансгенные животные (метод получения)
- •9. 2. 1. Методы введения чужеродного гена в организм животного
- •9.2.2. Создание разных видов трансгенных животных
- •9. 2. 3. Клонирование
- •В яйцеклетку (по Беквисту)
- •Методом пересадки ядер
- •9. 2. 4. Межвидовые пересадки эмбрионов и получение химерных животных
- •9. 2. 5. Получение гомозиготных диплоидных потомков
- •Диплоидных потомков
- •9. 2. 6. Создание партеногенетических животных
- •9. 2. 7. О генетическом риске и биобезопасности в биоинженерии и трансгенных технологиях
- •9. 3. Государственное регулирование безопасности генно-инженерной деятельности в Республике Беларусь
- •Глава 10 иммобилизованные ферменты
- •10. 1. Понятие «инженерная энзимология»
- •И иммобилизация ферментов
- •И Saccharomyces carlsberqensis, используемые для получения фермента инвертазы
- •10.2. Механизм биотехнологического действия ферментов
- •10. 3. Технология глубинного культивирования микроорганизмов – продуцентов ферментов.
- •10. 4. Технология выделения и очистки ферментных препаратов
- •10. 5. Иммобилизованные ферменты. Методы иммобилизации
- •10. 6. Практическое применение иммобилизованных ферментов
- •При растворении тромбов в кровеносных сосудах
- •«Искусственная почка»
- •Глава 11
- •Гидроксилирование кортизола
- •11. 2. Методы контроля репродуктивной функции у животных
- •11. 3. Нейро-гуморальная регуляция внутрияичниковых процессов. Рост и развитие эмбрионов
- •Внутрияичниковых процессов
- •11. 4. Биотехнология получения потомков животных желаемого пола
- •Быков производителей по полу
- •Глава 12 получение аминокислот и белка одноклеточных организмов
- •12.1. Содержание незаменимых аминокислот в белках некоторых микроорганизмов
- •12. 2. Выращивание кормовых дрожжей
- •12.3. Белковые концентраты из бактерий
- •На газообразных углеводородах
- •12.4. Кормовые белки из водорослей
- •12. 5. Белки микроскопических грибов
- •12. 6. Кормовые белковые концентраты из растений
- •12. 7. Производство незаменимых аминокислот
- •Из аспарагиновой кислоты
- •12. 8. Производство кормовых витаминных препаратов
- •12. 9. Кормовые липиды
- •12. 10. Производство ферментных препаратов
- •Глава 13
- •13. 2. Результаты использования пребиотиков
- •13. 3. Эффективность использования гербиотиков и симбиотиков
- •13. 4. Результаты применение заквасок для силосования
- •Заключение
- •Литература Основная
- •Дополнительная
- •Содержание
9. 2. 7. О генетическом риске и биобезопасности в биоинженерии и трансгенных технологиях
Встраивание в ДНК реципиентной клетки чужеродного донорского гена сопряжено с возможными последствиями, главными из которых являются:
1. Недостаточное обеспечение адресной доставки гена;
2.Недостаточное обеспечение его нормального функционирования – экспрессии;
3.Проблема генетического риска, т. е. возможного получения мутантов с содержанием токсических или аллергенных для человека и животных белков. Имеется в виду спонтанный перенос с пыльцой генов – модификаторов в другие растения, их взаимодействие с генами третьих генотипов, что приводит к появлению новых генотипов с опасными свойствами для человека, животных и окружающей среды.
Эти проблемы существуют постоянно и их решение, во многих случаях, пока имеет бессистемный случайный характер. По мнению академика К. Г. Газаряна, реальный риск, связанный с поведением чужого гена в реципиентной клетке, существует всегда. Это, прежде всего, может вызываться плейотропным эффектом при взаимодействии и взаимозаменяемости чужеродных и собственных генов. Дестабилизация генома при трансгенозе может происходить не только за счёт обогащения генома новыми генами, а чаще, в силу индуцирования эндогенных систем рекомбинации и активации «молчащих» генов. Всё это даёт основания считать теоретически возможным появление при трансгенозе опасных для здоровья и жизни человека генотипов.
Автор указывает, что риск получения таких мутантов значительно возрастает при использовании искусственных генов для создания трансгенных растений, животных и микроорганизмов с улучшенными и принципиально новыми свойствами. Эти обстоятельства, в определённой мере, оправдывают тревогу большинства людей, их настойчивое требование запретить создание и, особенно, использование генетически модифицированных организмов и получаемых из них пищевых продуктов или, хотя бы, ввести систему их обязательного маркирования.
Начало дискуссии по проблеме биобезопасности в науке и обществе положили сами основатели нового направления – генетической инженерии. В 1974 году одиннадцать ведущих молекулярных биологов мира во главе с отцом генной инженерии П. Бергом, создавшим первую рекомбинантную молекулу ДНК, обратились к мировому сообществу с письмом через журнал «Science», в котором предложили отказаться от экспериментов с рекомбинантными ДНК до проведения международной конференции по этой проблеме. Однако уже в 1975 году на конференции в Асиломаре (США) эти и другие учёные пришли к выводу, что эксперименты в области генной инженерии и новейшей биотехнологии не более опасны, чем аналогичные эксперименты в других отраслях, что в них, как и везде, необходим строгий научный контроль за соблюдением мер безопасности.
В 1976 году в США были приняты первые правила, регламентирующие работу с рекомбинантными микроорганизмами, которые запрещали выпускать за стены лабораторий. К началу 80-х годов в большинстве стран мира также было разработано соответствующее законодательство. Постепенно эти правила корректировались в сторону смягчения жёсткости требований к трансгенным организмам и получаемым из них пищевым и другим продуктам. Это не замедлило привести к случаям отклонения в здоровье трансгенных животных. Так, большинство исследователей, получивших трансгенных животных с чужими генами указывали, что за ними установлен индивидуальный постоянный контроль. Они гарантировали, что те из них, у которых отмечены какие либо отклонения, не используются в дальнейшем размножении, то есть их сразу же выбраковывают и сдают на убой. Поэтому, появление такого рода аномальных отклонений у трансгенных животных не опасно для передачи их потомству. Однако, по данным американских исследователей (Pursel Р.et al., 1990), положительное влияние гена гормона роста на трансгенных свиней, наряду с ускорением роста, повышением эффективности использования корма и снижением содержания жира в туше, сопровождался хромотой и язвой желудка. Метаболизм глюкозы у них был несколько нарушен, воспроизводительная способность трансгенных свиней, секретирующих рекомбинантный гормон роста, имела также некоторые отклонения от нормы. Авторы связывают эти изменения в состоянии здоровья трансгенных свиней по причине длительного воздействия повышенного содержания гормона роста в крови.
В исследованиях учёных Московского Биотехцентра РАСХН на трансгенных овцах введение гена прохимозина не сопровождалось отклонениями в проявлении воспроизводительной функции и в состоянии здоровья, но наблюдалось резкое снижение удоя вследствие закупорки молочных протоков. В других исследованиях, на трансгенных кроликах с геном гранулоцитарного колониестимулирующего фактора, у некоторых самок наблюдалось нарушение воспроизводительной функции. В связи с этим в настоящее время идёт дискуссия по поводу безопасности применения в пищу генномодифицированных продуктов. Особенно это касается получения и применения лекарств с использованием трансгенных организмов, поскольку эта технология уже многие годы широко используется. Многие лекарственные белки, такие как инсулин, интерфероны, получают только с использованием трансгенных микроорганизмов или клеток млекопитающих и их широко используют в медицине во всём мире.
В 2007 году Европейский комитет по лекарственным препаратам дал разрешение на производство и использование в медицине лекарственных белков, полученных из молока трансгенных животных. Фирма «GTC Терапевтик» получила лицензию на производство и использование антитромбина из молока трансгенных коз.
В лабораториях данной фирмы, осуществляющей генно-инженерные исследования и получение трансгенных организмов (не связанных с созданием биологических средств поражения людей и природы), не зарегистрировано случаев получения генотипов растений и животных, опасных для здоровья и жизни человека, а также для окружающей среды. Микробиологи целенаправленно ведут работы по усилению или ослаблению вирулентных и других свойств бактерий, решая ряд важных проблем медицинской безопасности и защиты государства от бактериологического оружия и агрессии.
К сожалению, мировой терроризм не останавливается перед выбором средств для своих преступлений. Он использует в этих целях и опасные для жизни людей биоресурсы. Мировому сообществу предстоит срочно выработать и осуществить систему самых эффективных мер по пресечению терроризма и недопущения использования достижений биологической науки в его зловещих целях.