Эталоны ответов к билету №9.

1. Ионо-обменная хроматография основана на разделении веществ, обладающих различными суммарными зарядами имеющихся в молекуле активных (ионизированных) групп атомов в данных условиях разделения: рН, солевая концентрация.

Проводится ионо-обменная хроматография на колонках, содержащих ионно-обменные смолы. Ионообменники представляют собой сухие вещества, которые проявляют активность будучи насыщены водой при замачивании в ней.

Разные ионообменники обладают различными свойствами ( см.табл.)

Таблица №5. Ионообменники.

Название	Состав	Функция
Анионообменники	Ионогенные группы «+»	Связывают анионы «-»
Катионообменники	Ионогенные группы «-»	Связывают катионы «+»

В качестве ионообменников применяются:

• целлюлоза

• диэтиламиноэтилцеллюлоза

2. Внешний механизм свертывания активируется серьезным повреждением ткани, при котором в кровь попадает тканевой тромбопластин. Присутствие тканевого тромбопластина активирует VII фактор, минуя факторы каскада. Активный VII фактор в комплексе с V фактором активируют Х фактор гораздо быстрее, чем это происходит при внутреннем механизме свертывания, а активный Х фактор превращает протромбин в тромбин, который превращает фибриноген в фибрин.

γ-ГТ

3. L-γ-глутамил-3-карбокси-4-нитроанилид + Глицилглицин →

L-γ- глутамилглицилглицин + нитроанилин (свободный)

Интенсивность окраски прямо пропорционально активности гаммаглутамилтранспептидазы.

Эталоны ответов к билету №10.

1. Колоночная хроматография – это вид хроматографии, при проведении которой сорбент помещают в колонку. Разделение может проводиться двумя способами:

• под обычным давлением – это медленный процесс, который может длиться очень долго (от получаса до нескольких часов)

• под высоким давлением – это значительно быстрее (до получаса и менее)

Колоночная хроматография очень часто ассоциируется с гель-фильтрацией, т.к. последнюю удобнее проводить именно в колонке.

Гель-фильтрация - это фракционирование смеси веществ по размерам молекул путем прохождения их через гели с определенной величиной пор (метод молекулярного сита).

Разные размеры молекул различных веществ влияют на скорость прохождения веществ через колонку. Разные соединения не одновременно выходят из колонки, заполненной сефадексом.

Более крупные молекулы являются и более тяжелыми, поэтому они быстрее передвигаются в вертикальной колонке и, соответственно, раньше выходят из колонки в составе водного или другого раствора в подставленную для сбора посуду. Менее крупные молекулы и низкомолекулярные соединения передвигаются медленнее, т.к. на них в меньшей степени действует сила тяжести. Они выходят из колонки позже и тоже могут быть собраны в посуду.

2. Общий путь свертывания начинается с активации протромбина в тромбин, не зависимо от того, какой механизм свертывания ему предшествовал: внутренний или внешний. Тромбин активирует превращение фибриногена в фибрин путем отщепления от α –цепей и β-цепей фибриногена сигнальных пептидов А и В соответственно. После отщепления пептидов образуются «липкие концы», которыми молекулы фибриногена соединяются друг с другом, образуя фибрин-мономер. После этого ХIII фактор, который является белковой полимеразой, образует поперечные «сшивки» между молекулами фибрин-мономера с образованием фибрин-полимера, имеющего вид сетки; сетка уплотняется за счет оседания в ней форменных элементов крови.

3. Реакция идет в две стадии:

ЩФ

- р-нитрофенилфосфат → р-нитрофенол + фосфат

периодат натрия

- Фенол + 4-аминофенозон → желтое окрашивание.

Интенсивность окраски пропорциональна активности ЩФ (щелочной фосфатазы).