Выделение чистых культур бактерий

Чистая культура – это определенный вид микроорганизма, по на­личию которого в организме больного человека и животного можно под­твердить поставленный диагноз инфекционного заболевания.

Получение чистой культуры и умение установить ее видовую при­надлежность в медицинской микробиологии имеют первостепенное зна­чение. При выполнении этой задачи следует иметь в виду, что в пато­логических материалах возбудитель заболевания, как правило, находится в ассоциации с банальной (посторонней) микрофлорой. Следовательно, для его изоляции гной, мокроту, осадки мочи, испражнения и прочие экскреты необходимо засеять так, чтобы получить колонии. С этой целью бактериальной петлей или шпателем материалы засевают на агаризованные среды в чашках Петри. Выросшие колонии после детального изучения пересевают на скошенные и жидкие среды для накопления биомассы. В процессе накопления исследуются культуральные свойства чистой куль­туры (I этап идентификации вида).

Окончательное заключение о природе чистой культуры (вида) делают только после всестороннего изучения биохимических свойств, которые тесно переплетены с культуральными; серологических реакций (действие специфических сывороток); фагочувствительности культуры и ее патогенности для экспериментальных животных (II этап идентификации). При этом следует учитывать некоторые различия в выборе метода по­лучения чистых культур аэробных и анаэробных бактерий.

Выделение и изучение культуральных свойств бактерий–аэробов

Рис. 18. Термостат

Бактерии–аэробы выращивают в обычных условиях кислородной сре­ды при температуре 37С в термостате (рис. 18). Схематично начальный этап исследования материала можно представить следующим образом.

Первый день исследования. Изучае­мый материал микроскопируют и высева­ют на плотную среду в чашки Петри шпа­телем или бактериальной петлей (в от­дельных случаях – в жидкую среду обо­гащения). Посевы помещают в термостат на 18–24 ч при температуре 37С.

Второй день исследования. На извле­ченных из термостата чашках Петри с по­севами изучают специфические признаки выросших на поверхности питательной среды колоний.

1. Вначале рассматривают их невоору­женным глазом со стороны дна чашки Пет­ри в проходящем свете. Если имеются два различных вида колоний, их нумеруют и описывают каждую в отдельности. В про­токоле отмечают следующие данные: а) размеры колоний (крупная – 4–5 мм в диаметре и более, средняя –2–4 мм, мел­кая – 1–2 мм, карликовая – менее 1 мм); б) форму очертаний (правильно или неправильно округлая, розеткообразная, ризоидная и др.); в) степень прозрачности (непрозрачная, по­лупрозрачная, прозрачная).

2. Далее колонии описывают в отраженном свете со стороны крышки, отмечая: а) цвет (бесцветная, пигментированная); б) поверхность (глад­кая, блестящая, влажная или морщинистая, матовая, сухая); в) положе­ние на питательной среде (возвышающаяся над средой, погруженная или сливающаяся с ней, плотно прилегающая к среде, уплощенная).

3. Приступают к микроскопическому изучению структуры колоний. Чашку Петри устанавливают вверх дном на предметном столике микро­скопа, опускают конденсор и объективом х8 изучают: а) характер краев (ровные, волнистые, зазубренные, бахромчатые); б) структуру (гомоген­ная или аморфная, зернистая, волокнистая).

Из колонии готовят мазок, окрашивают по Граму и микроскопируют. Остаток колонии пересевают на скошенный агар для получения чистой культуры в достаточном количестве. Пробирки с посевами помещают в термостат на 18–24 ч при температуре 37 °С.

Техника посева колонии на скошенный агар. Чашку Петри с отме­ченной колонией берут в левую руку. Бактериальную петлю держат ближе к концу петледержателя и фиксируют руку, опираясь мизинцем о борт чашки. Снимают петлей остаток отмеченной колонии, чашку Петри вкладывают в крышку и засевают скошенный агар.