Реакция связывания комплемента

Реакция связывания комплемента (РСК) – сложная двухэтапная серологическая реакция. В ней используют пять ингредиентов, составля­ющих две системы: антиген, антитело, комплемент (первая система);

эритроциты барана, сенсибилизированные (обработанные) гемолитической сывороткой, содержащей специфические к ним антитела (вторая, или индикаторная, гемсистема). При этом взаимодействие антитела с антигеном на первом этапе реакции приводит к образованию иммунного комплекса, который адсорбирует комплемент, но визуально обнаружить это невозможно. В качестве индикатора связывания комплемента на комплексе антиген–антитело на втором этапе используют гемсистему, кото­рая, являясь иммунным комплексом, тоже способна адсорбировать его. В конечном итоге возможны два вариан­та результата реакции. Если антитело и антиген соответствуют друг другу и комплемент адсорбируется образовав­шимся комплексом, лизиса эритроци­тов гемсистемы не произойдет. При несоответствии антитела антигену, и . наоборот, комплемент, оставаясь сво­бодным, присоединится к гемсистеме и вызовет гемолиз (рис. 31).

Как и другие серологические ре­акции, РСК можно использовать для выявления специфических антител по известному антигену или для определе­ния антигена по известным антителам.

Общая характеристика ингредиен­тов РСК.

1. Исследуемая сыворотка перед постановкой реакции прогрева­ется на водяной бане при температуре 56 °С в течение 30 мин для инактивации ее собственного комплемента и разводится начиная с 1:5.

2. Антигеном могут быть культуры бактерий, их лизаты, вирусы и вирус–содержащие материалы, экстракты па­тологически измененных органов и тканевые липиды.

3. Комплемент – сыворотка мор­ских свинок, полученная в день опыта. В настоящее время используется производственный сухой комплемент.

4. Гемолитическая система состоит из смешанных в равных объемах гемолитической сыворотки в тройном титре и 3 % взвеси эритроцитов барана по осадку. Для сенсибилизации эритроцитов гемолизинами смесь выдерживают в термостате при температуре 37С в течение 30 мин.

Табл. 1 Схема основного опыта реакции связывания комплемента

Номер системы	Ингридиент, участвующий в реакции, мл	Номер пробирки
		1 (опытная)	2 (контроль сыворотки)	3 (контроль антигена)
Первая	Исследуемая сыворотка, разведённая 1:5	0,5	0,5	–
	Антиген в рабочей дозе	0,5	–	0,5
	Комплемент в рабочей дозе	0,5	0,5	0,5
	Раствор натрия хлорида NaCl 0,85%	–	0,5	0,5
	В термостат при температуре 37С на 1 час
Вторая	Гемолитическая система	1,0	1,0	1,0
	В термостат при температуре 37С на 1 час
	Результат	+ / –	–	–

Постановка основного опыта РСК. Реакцию ставят в общем объеме 2,5 мл, каждый из ингредиентов добавляют к рабочей дозе, содержащейся в 0,5 мл. Как видно из табл. 1, в первую пробирку вносят сыворотку, антиген и комплемент, во вторую – сыворотку, комплемент и вместо антигена изотонический раствор натрия хлорида (контроль сыворотки), в третью – антиген, комплемент и тот же раствор натрия хлорида (контроль антигена). Пробирки ставят в термостат при температуре 37С на 1 ч. Одновременно готовят гемолитическую систему, смешивая поровну гемолитическую сыворотку в тройном титре и 3% взвесь эритроцитов барана, которую и добавляют по 1 мл во все три пробирки после извле­чения штатива из термостата. Смешав гемсистему с ингредиентами трех пробирок, последние вновь ставят в термостат на 1 ч, и спустя это время учитывают результаты РСК.

При учете РСК интенсивность реакции обозначается плюсами: «++++»– резко положительная реакция с полной задержкой гемолиза, жидкость в пробирке бесцветная, все эритроциты осели на дно; «+++», «++» –положительная реакция, отличается нарастанием окраски жид­кости вследствие гемолиза и уменьшения количества эритроцитов в осад­ке; «+» – слабоположительная реакция, жидкость интенсивно окрашена, на дне пробирки незначительное количество эритроцитов. Отрицательная реакция обозначается знаком «–», при этом наблюдается полный гемолиз, жидкость в пробирке имеет интенсивно–розовую окраску («лаковая кровь»).

РСК – весьма сложная, но очень чувствительная специфическая реакция. Широко применяется в диагностике сифилиса, хронической формы гонореи, коклюша, актиномикоза, всех риккетсиозов и вирусных инфекций.