Подготовка преподавателей к лабораторной работе

В этом разделе описана подготовка преподавателей к лабораторным работам в уроках со второго по пятый.

Урок 2 Инокуляция и выращивание бактериальной культуры

Урок 3 Первая стадия очистки-концентрирование и лизис бактерий

Урок 4 Вторая стадия очистки-удаление бактериального дебриса

Урок 5 Третья стадия очистки – хроматография белка

Для того, чтобы ученики могли начать работу, им потребуются две чашки с трансформантами (LB/amp и LB/amp/ara) из набора по трансформации бактерий pGLO. Чтобы не произошел зарост, чашки надо использовать в течение недели после трансформации (чашки хранятся в холодильнике).

Урок 2 Инокуляция и выращивание бактериальной культуры

Предварительная подготовка

Задачи	Приготовить жидкую среду (стр 6-8)
	Подготовить рабочие места учеников и учителя (стр 5)
	Подготовить качающуюся платформу, качалку или термостат
Требуемое время	30 минут

Замечание: обратите внимание на технику стерильной работы. См. Приложение С

Приготовьте растворы ампициллина и арабинозы

Ампициллин и арабиноза поставляются сухими в маленьких флакончиках. После растворения в воде они добавляются в жидкую питательную среду. Ампициллин это антибиотик, ингибирующий рост контаминирующих бактерий, которые могут быть занесены в культуру из окружающей среды. Арабиноза это сахар, индуцирующий производство зеленого флуоресцентного белка в клонированных клетках. Обратитесь к приложениям А и D для более подробного описания.

И спользуя стерильную пипетку, добавьте 3 мл ТЕ буфера прямо во флакон с ампициллином. Используя другую пипетку, добавьте 3 мл ТЕ во флакон с арабинозой. Перемешайте и аккуратно встряхните флаконы, чтобы ускорить процесс.

Замечание: растворять ампициллин и арабинозу надо в тот же день, в который вы готовите жидкую среду. Арабинозе требуются около 10 минут на растворение – будьте терпеливы.

Приготовьте жидкую питательную среду

В урока 2 на каждое рабочее место учеников понадобятся две пробирки с 2 мл жидкой питательной среды в каждой. Они будут использованы для выращивания бактериальной культуры. Чтобы приготовить жидкую среду, добавьте 55 мл воды в 250-мл колбу Эрленмейера и доведите до кипения в микроволновой печи. Затем добавьте одну капсулу LB в колбу. Оставьте таблетку намокать в горячей воде на 20 мин, это поможет среде легче раствориться. Еще раз доведите содержимое колбы до кипения в микроволновке. Перемешайте, вращая колбу. Повторяйте кипячение-помешивание до тех пор, пока таблетка полностью не растворится. Будьте осторожны, давайте колбе остыть несколько секунд перед перемешиванием, иначе среда может выплеснуться вам на руки.

Когда таблетка полностью растворится, дайте среде остыть до температуры, когда вы сможете спокойно держать колбу в руке, не боясь обжечься (меньше 50º С). Пока среда остывает, достаньте растворы ампициллина и арабинозы, которые вы готовили на шаге 1 (выше). Когда среда остынет, возьмите чистую пипетку и добавьте по 0.5 мл ампициллина и арабинозы в колбу. Перемешайте, вращая колбу. Остатки растворов вам больше не понадобятся.