Лейкоциты

С гистологической точки зрения белые кровяные тельца—типичные клетки; они имеют шарообразную форму и состоят из протоплазмы и ядра. При микро­скопии свежей крови видно, что лейкоциты имеют различную величину, неоди­наковую форму ядра и неоднородную протоплазму.

Точное знакомство с морфологией отдельных клеток лучше всего удается в окрашенных препаратах. Окраска анилиновыми красками, предложенная Эрлихом, дала возможность дифференцировать лейкоциты по их отношению к различным краскам: кислым, основным и нейтральным.

Зернистые формы лейкоцитов по свойству окрашивания зернистости делятся на базофилы, эозинофилы и нейтрофилы. Среди незернистых форм различают лимфоциты и моноциты.

Базофильные лейкоциты (Б), или тучные клетки, имеют круглую или округло-овальную форму. Диаметр базофилов колеблется в пределах 10—14 u.

Протоплазма базофила бледная, почти бесструктурная. Гранули, вклю­ченные в протоплазму, окрашиваются основными красками в темнофиолето-вый цвет. Окраска неравномерная. Одни гранули красятся темнее, а другие— светлее. Гранули имеют правильную круглую форму, но различную величину. Мелкие гранули заполняют почти всю протоплазму, в то время как крупные располагаются чаще кучками. Гранули легко вымываются водой и на их месте образуются пустоты и вакуоли.

Ядро базофила полиморфное: в одних случаях оно вытянуто в длину и пере­шнуровано на отдельные сегменты, соединенные толстыми перемычками, в других оно довольно массивное с вдавлениями и лопастями. Ядро окраши­вается диффузно в фиолетовый или слабофиолетовый цвет. В отдельных клетках вместо ядра выступают неконтурированные пятна. Ядро базофилов бедно хро­матином и имеет неясно выраженную структуру.

Базофилы всех животных в основном сходны между собой; варьирует лишь величина и форма зерен.

Эозинофильные лейкоциты (Э) в крови млекопитающих заметны хорошо благодаря желтоватому цвету и сильному блеску гранулей. Форма клетки круглая, реже овальная. Диаметр от 8,0 до 16,0 u.

Протоплазма между гранулями имеет нежноголубой цвет, по периферии клетки образует очень тонкий слой. Остальная часть клетки заполнена ацидо­фильными гранулями. Гранули зрелых эозинофилов окрашиваются в интен­сивно розовый цвет и сильно преломляют свет. Гранули молодых эозинофилов окрашиваются базофильно, причем базофилия исчезает по мере созревания клетки. Гранули лошади крупные и имеют одинаковую величину (2—3 u) и тесно лежат в протоплазме, оставляя лишь узкие прослойки между собой. Гранули нередко сдавливают одна другую и приобретают угловатую форму. Если гранули выпадают, то образуются пустоты (вакуоли). Довольно крупные гранули имеются также у кролика (1,5 u). У остальных животных гранули мелкие (0,5—1,0 u).

Ядро эозинофилов имеет дольчатую форму. Оно состоит из 2—3, редко 4 сегментов. Дольки ядра связываются между собой нитевидными перемыч­ками. Структура ядра выражена слабо. Глыбки хроматина крупные и плотно прилегают друг к другу. Ядро окрашивается в фиолетовый цвет и занимает, в большинстве случаев, эксцентричное положение.

Нейтрофильные лейкоциты. В циркулирующей крови обнаруживаются два вида клеток: палочкоядерные и сегментоядерные. Юные, более молодые, нейтрофилы встречаются в циркулирующей крови от 0,5 до 1% и не у всех животных.

Палочкоядерные нейтрофилы (П) имеют величину от 10 до 14 u. Форма клетки круглая. Протоплазма палочкоядерного нейтрофила окрашена в бледно-розовый цвет с серовато-дымчатым оттенком и заполнена мелкими, неодина­ковой величины нежнорозовато-фиолетовыми зернышками. В отдельных клетках зернистость может быть крупной, хорошо различимой на фоне протоплазмы. Протоплазма равномерно окружает ядро.

Ядро то вытянуто в виде палочки, то загнуто в виде буквы С, 3, а иногда и в виде цифры 6. Встречаются формы, напоминающие латинские буквы S, С, V. Ядро палочкоядерного нейтрофила имеет приблизительно одинаковую ширину и незначительные утолщения на концах. Ядро компактное, значительно уже, чем у юного нейтрофила. Окраска ядра фиолетовая различной интенсивности. Хроматин располагается неравномерно. Глыбки имеют различную величину и форму.

Палочкоядерные нейтрофилы имеются в циркулирующей крови в незначи­тельном количестве. При патологических процессах количество их значительно возрастает. Различают регенеративные и дегенеративные формы палочкоядер-ных нейтрофилов.

Регенеративные формы палочкоядерных нейтрофилов представляют собой не вполне созревшие клетки, выброшенные раньше времени в ток крови По внешнему виду они имеют признаки юного и палочкоядерного нейтро­фила.

Дегенеративные формы имеют однообразную, темнофиолетовую окраску и узкую лентообразную форму ядра. Края ядра неровные и деформированные.

Сегментоядерные нейтрофилы (С) имеют правильную, круглую форму. Диаметр клетки колеблется от 10 до 15 u. Протоплазма сегментоядерного ней­трофила бледнорозового цвета, равномерно заполненная нежной нейтрофиль-ной зернистостью. Гранули окрашиваются в розовый цвет с желтоватым оттен­ком, резко отличаясь от базофильной и азурофильной зернистости других видов лейкоцитов.

Ядро окрашивается в темнофиолетовый цвет. Благодаря тому, что темные поля хроматина чередуются со светлыми полосами, получается впечатление тигроидности (Рухлядев). Ядро делится на отдельные сегменты, соединяющиеся нитевидными перемычками. Количество сегментов колеблется от 2 до 5, реже до 6. Располагаются они или как звенья в цепи или налегают друг на друга, давая причудливые формы L, W, 8, или в виде банта.

Лимфоциты (Л)—незернистые формы лейкоцитов. По величине и мор­фологическим особенностям лимфоциты делятся на большие, средние и малые.

Большие лимфоциты имеют величины от 10 до 1,9 р.. Протоплазма боль­шого лимфоцита окрашивается в светлоголубой цвет. Благодаря эксцентрич­ному расположению ядра протоплазма с одной стороны выступает в виде узкой каймы, а с другой—в виде широкого пояса. При сильных увеличениях в прото­плазме можно обнаружить сетчатую структуру и азурофильные зернышки. Вокруг ядра отчетливо выступает перинуклеарная зона, окрашивающаяся значительно слабее самой протоплазмы.

Ядро больших лимфоцитов имеет довольно правильную, округлую форму, но иногда попадаются ядра угловато-круглые и овальные с незначительным вдавлением (почковидная форма). Структура ядра выражена хорошо. В ядрах отдельных клеток можно отметить до трех ядрышек.

Средние лимфоциты являются переходными клетками между большими и малыми лимфоцитами, а потому не могут быть резко разграничены.

Малый лимфоцит имеет шарообразную форму. Величина клетки от 5 до 11 u. Протоплазма малого лимфоцита окрашивается в интенсивно синий цвет, гомо­генная, иногда нежно петлистая. В протоплазму включены в разном количе­стве и разного размера азурофильные зернышки, иногда в ней можно обнару­жить вакуоли. Протоплазма окружает ядро только с одной стороны и узким слоем. Имеется светлая перинуклеарная зона.

Ядро малых лимфоцитов имеет шарообразную форму, но может быть овальным и бобовидным. Оно состоит из неясно очерченных, тесно прилегаю­щих друг к другу глыбок хроматина; окрашивается диффузно в темнофиолето­вый или фиолетовый цвет. Располагается эксцентрично.

Моноциты (М)—самые крупные клетки циркулирующей крови. Диаметр их колеблется от 12 до 20 u. Форма клетки круглая, реже—овальная. Цвет протоплазмы серовато-голубоватый или дымчато-серый (цвет сигарного дыма). Протоплазма сетчатая. В протоплазме имеется много мелких пылевидных азурофильных гранулей, больше всего сконцентрированных между лопастями ядра. Перинуклеарной зоны нет. В отдельных клетках можно встретить вакуоли. Ядро моноцита большое, овальное, эллипсовидной, бобовидной или колбасовидной формы с перетяжками и неровными краями. В клетке ядра располагаются эксцентрично. Красится ядро в слабофиолетовый цвет (слабее чем у лимфоцитов) и имеет нежную сетчатую структуру. Хроматиновые глыбки лежат не так тесно, как у лимфоцитов, вследствие чего образуются светлые поля. Ядро моноцита имеет наклонность к полиморфизму, вплоть до образова­ния грубых лопастей.

Клетки Тюрка, или клетки раздражения (К. Т.). Величина клетки от 10 до 15 u. В виде исключения могут попадаться очень мелкие клетки. Прото­плазма клеток Тюрка интенсивно синяя, мелкопетлистая и по окраске неравно­мерная; местами выступают светлые пятнышки и многочисленные вакуоли различной формы и величины. У отдельных клеток имеется перинуклеарная зона. Ядро имеет округлую или овальную форму, располагается в центре, причем в нем иногда отмечаются вакуоли. Окраска ядра интенсивно темнофио-летовая. У здоровых животных клетки Тюрка попадаются в виде исключения.

Лейкоциты птиц. Базофилы, лимфоциты, моноциты и клетки Тюрка мало чем отличаются от соответствующих клеток крови млекопитающих, и только эозинофилы и клетки, сходные по биологическим свойствам с нейтро-филами, имеют некоторое различие.

Эозинофилы (Э). Величина клетки 8,2—10,8 u. Клетка правиль­ной круглой формы. Протоплазма имеет нежноголубой цвет. В ней имеются блестящие круглые зерна. Распределение гранулей в протоплазме эозинофила равномерное. Окраска гранулей розовая с различными оттенками.

Ядро эозинофилов состоит из 2—3 сегментов, соединенных тоненькой перемычкой. Ядро окрашивается в фиолетовый цвет. В ядре выступает темнее окрашивающаяся хроматиновая сеть. Лебедев делит эозинофилы на юные, палочкоядерные и сегментоядерные по конфигурации ядра. Ядро юных имеет лентообразную, подковообразную и, реже, почкообразную форму; ядро палоч-коядерных напоминает буквы С и 3; ядро сегментоядерных состоит из 2—3 и даже 4 сегментов.

Псевдоэозинофилы, или лейкоциты со специфической грануля­цией, по структуре ядра делятся на: а) юные; б) палочкоядерные и в) сегменто­ядерные. Клетки имеют круглую форму и величину от 8,4 до 10,8 u.

а) Юные псевдоэозинофилы имеют протоплазму темноголубого или сине­ вато-голубого цвета. В протоплазме неодинаковой величины гранули. Наряду с красными имеются гранули голубого цвета. Форма гранулей круглая, иногда веретенообразная или же в виде коротких, заостренных палочек.

Ядро юных псевдоэозинофилов имеет почковидную форму или форму под­ковы. Оно располагается эксцентрично и окрашивается слабо.

б) Палочкоядерные псевдоэозинофилы имеют протоплазму бесцветную или окрашивающуюся в слабоголубой цвет. В протоплазме имеются палочко­ видные, окрашенные в красный цвет гранули. Иногда можно встретить и круг­ лые различной величины зерна. Ядро палочкоядерных псевдоэозинофилов имеет форму С, 3, реже латинское S. Ядро располагается эксцентрично.

в) Сегментоядерные псевдоэозинофилы имеют протоплазму нежноголубого цвета или неокрашивающуюся совершенно. В ней располагаются яркокрасные гранули, тесно прилегающие одна к другой. Гранули имеют веретенообразную форму или форму палочек с заостренными концами. Наряду с клетками, в кото­ рых грануляция палочковидная, встречаются клетки с грануляцией круглой формы. Иногда можно встретить смешанную грануляцию, когда круглые гранули чередуются с палочкоядерной или веретенчатой грануляцией.

ПОНЯТИЕ О ЛЕЙКОЦИТАРНОЙ ФОРМУЛЕ

Процентное отношение отдельных видов лейкоцитов, записанное по осо­бой формуле, называется гемограммой, или лейкоцитарной формулой. Состав­ными элементами, входящими в лейкоцитарную формулу, являются: базофилы, эозинофилы, нейтрофилы, лимфоциты, моноциты и клетки Тюрка. Нейтро-филы в свою очередь по возрасту клеток подразделяются на миэлоцитов, юных, палочкоядерных и сегментоядерных. Лейкоцитарная формула с буквен­ным обозначением форменных элементов имеет следующий вид.

Лейкоцитарная формула

ККолич. лейк.	Баз.	Эоз.	Миэл.	Юные	П/яд.	С/яд.	Лим.	Мон.	к/т
9000	0,5	4,0	—	—	4,0	8,5	0,5	3,0	—

В крови здоровых животных миэлоциты не встречаются совершенно, а юные имеются только у отдельных видов и в пределах, не превышающих 0,5%. То же можно сказать и относительно клеток Тюрка. Базофилы, эозинофилы и моноциты встречаются в незначительном количестве и только нейтрофилы и лимфоциты обнаруживаются в количестве свыше 50% всех остальных кле­ток, вместе взятых. Причем, у лошади, собаки и свиньи превалируют нейтро­филы, а у остальных животных—лимфоциты.

Количество тех или иных форменных элементов у здоровых животных может колебаться в зависимости от породы, пола, возраста, конституции и влияния некоторых посторонних факторов, но эти колебания незначительны и характер формулы сохраняется без изменений.

Анализ лейкоцитарной формулы при оценке функциональной способности кроветворных органов имеет большое диагностическое значение. При анализе особое внимание обращается на появление молодых форм нейтрофилов: юных и миэлоцитов. Это объясняется тем, что в свете учения Арнет—Шиллинга о ядерном сдвиге ведущая роль принадлежит неитрофилам, которые своими колебаниями отражают состояние кроветворных органов.

Арнет (1906) впервые поставил изменения ядра нейтрофилов в рамки клинического наблюдения и, отметив известную закономерность, указал на клиническое значение этих изменений. Он считал, что между возрастом нейтрофилов и степенью сегментации ядра существует определенная зависи­мость. Чем моложе клетка, тем меньше сегментация ее ядра. Подразделив нейтрофилы по степени сегментации ядра на пять основных классов, а послед­ние—на 24 подкласса, Арнет предложил записывать их слева направо в виде схемы.

Делая акцент на нейтрофилах, Арнет впоследствии присоединил и другие виды лейкоцитов. Громоздкая и малоприемлемая для клинических целей схема Арнета была упрощена Шиллингом, который разделил нейтрофилы не по степени сегментации ядра, а по структурным его особенностям. Он выде­лил четыре вида нейтрофилов: а) миэлоциты; б) юные; в) палочкоядерные

1 г) сегментоядерные. Во внимание принималась форма ядра и его окраска. Чем моложе клетка, тем нежнее окрашивается хроматин ядра, и чем старше клетка, тем интенсивнее его окрашивание. У молодых клеток ядро имеет круглую форму, которая с возрастом становится овальной, а затем все более и более вытягивается, становится тоньше и начинает сегментироваться. Нежная структура ядра молодого нейтрофила с возрастом становится все грубее.

Дифференциация клеток для выведения гемограммы производится в окра­шенном препарате и при соблюдении техники окрашивания, дифференциации и подсчета дает представление о состоянии кроветворных органов в момент исследования.

Гематологические воззрения Арнета и Шиллинга, будучи в основном для практических целей очень ценными, имеют и существенные недостатки. Центр

тяжести их учения лежит в учете возрастных изменений ядра. Изменения протоплазмы не учитываются совершенно, а между тем известно, что между степенью зрелости ядра и протоплазмы в отдельных случаях имеется опре­деленное несоответствие. Кроме того, в гемограмме Арнета и Шиллинга фигу­рируют только проценты, в то время как абсолютные числа имеют также боль­шое прогностическое и диагностическое значение.

Выведение лейкоцитарной формулы. При подсчете и дифференциации лейко­цитов необходимо придерживаться однотипной методики. Только при этом условии можно ожидать, что повторный подсчет в том же самом мазке даст близкий результат.

Для подсчета лейкоцитов можно использовать метод Филиппченко и метод Шиллинга. Шиллинг предложил производить подсчет лейкоцитов в четырех полях мазка по линии меандра. На препарате отмечается четыре поля. В каждом из отмеченных четырех мест подсчитьшается от 25 до 50 лейкоцитов. Всего должно быть подсчитано 200 клеток.

Отметив выбранные места каплей кедрового масла, помещают препарат на подвижный столик микроскопа. Первое поле устанавливается так, чтобы

был виден свободный край мазка. Подсчитав лейкоциты в этом поле зрения_г передвигают препарат вглубь на одно поле и вновь подсчитывают и дифферен­цируют все клетки, находящиеся в этом поле зрения. Учтя лейкоциты в четы­рех полях, передвигают препарат в сторону на такое же количество полей и затем передвигают мазок к краю. При таком продвижении вглубь, в сторону и к краю мазка получается линия, напоминающая букву П. В этой линии учи­тывается 12 полей зрения. Если количество лейкоцитов меньше 50, то про­цедура повторяется. Когда количество лейкоцитов будет равно 50, переходят на второе поле, затем на третье и чевертое. Всего в четырех участках должно быть подсчитано 200 клеток.

Подсчитывая и дифференцируя лейкоциты, необходимо результат сей­час же фиксировать. Полагаться на память не следует, так как выведение гемо­граммы представляет собой довольно монотонную и утомительную работу.

Запись обнаруженных лейкоцитов можно производить в специальных таблицах или с помощью специального счетчика.

Экспериментальные конструкторские мастерские при Институте экспери­ментальной биологии и патологии имени А. А. Богомольца предложили специальный счетчик для подсчета лейкоцитов. Использование этого счетчика облегчает и ускоряет работу, так как подсчет производится механически, без отвлечения внимания исследователя от микроскопа, причем исключается воз­можность появления ошибок, неизбежных при других методах регистрации. На счетчике имеется одиннадцать клавишей, восемь из которых имеют буквенное обозначение, соответствующее определенным видам лейкоцитов, а три клавиша предназначены для подсчета патологических клеточных эле­ментов.

Для отсчета нужно нажать пальцем на один из клавишей, затем отпустить палец, чтобы клавиш мог вернуться в исходное положение. При отсчете одно­временно с суммированием отдельных клеток автоматически производится суммирование общего количества клеток.

Рис. 93. Подсчет лейкоцитов: А - по четырехпольному методу; Б —по Филиппчен­ко; В—посередине мазка.

При появлении в крайнем правом смотровом окне числа 200 звонок авто­матически сигнализирует об оконча­нии подсчета. Гашение итогов произ­водится поворотом ручки против часовой стрелки до появления нулей во всех смотровых окнах.

Можно пользоваться также таб­лицей для дифференциального подсче­та лейкоцитов. Если результаты дик­товать помощнику, то можно добиться значительного ускорения этой работы. Подсчет и дифференциация без по­мощника требуют 20—30 минут, в то время как с помощником те же 200 лейкоцитов подсчитываются и диф­ференцируются в 3—5 минут (Егоров). Таблицы удобны еще и тем, что они дают возможность отмечать и атипич­ные клетки и все особенности мазка. Таблицы могут заготовляться типо­графским путем в массовом количе­стве, но можно сделать и одну таб­лицу с хорошими цветными рисун­ками и поместить ее под матовое стек­ло. Результат исследования в этом случае записывается на матовом стекле и после окончания работы пере­носится в протокол, а матовое стекло протирается мягкой и влажной тряпочкой.

Для подсчета и дифференциации можно также пользоваться бусинками, которые кладутся в гнезда с надписями, соответствующими отдельным видам лейкоцитов. Для этого необходимо иметь или коробочки, или специальный штатив с лунками, на краях которых написаны формы лейкоцитов, входящих в состав формулы. Предварительно нужно отсчитать 200 бусинок и разделить их на четыре части. Когда все бусинки одной части будут исчерпаны, будет подсчитано 50 лейкоцитов. Бусинки кладутся в лунки соответственно надпи­сям, когда в препарате обнаруживается та или иная клетка. При известном навыке и знании порядка расположения лунок отсчет производится почти механически.

Метод Филиппченко заключается в том, что мазок мысленно делится на три части: начальную, среднюю и конечную. Подсчет лейкоцитов ведется по каждой линии от одного края мазка до другого. В каждой части мазка должно быть подсчитано по 200 лейкоцитов. Всего таким образом в мазке учитывается €00 лейкоцитов. Этот метод рассчитан на то, что при неравномерном распределении лейкоцитов в мазке подсчет в трех различных частях даст предста­вление о среднем количестве более правильно и объективно.

Сравнительные подсчеты по методу Шиллинга и Филиппченко дают очень близкие результаты. Расхождение получается в пределах допустимых, 3—5%. Наиболее удобным Мухин считает подсчет лейкоцитов по ломаной линии в сере­дине мазка.