1.3.8 Реакція на амінокислоти, що містять слабозв'язаний сульфур

(реакція Фоля).

Сульфгідрильні групи (—SН) у білку, пептиді, а також амінокислоти цистеїн і цистин в результаті лужного гідролізу при нагріванні утворюють натрію сульфід, який з натрію плюмбітом дає чорний або бурий осад плюмбуму сульфіду:

Pb(CH₃COO)₂ +2NaOH  Pb(OH)₂ + 2CH₃COONa

Pb(OH)₂ + 2NaOH  Na₂PbO₂ + 2H₂O

Na2S + Na₂PbO₂ + H₂O PbS + 4NaOH

Метилтіогрупа метіоніну більш стійка, тож при слабкому гід­ролізі не руйнується і цієї реакції не дає. Деякі білки практично не містять сульфуровмісних амінокислот, наприклад желатин.

Для виявлення сульфуру 0,05г метіоніну сплавляють з 30 % -вим розчином натрію гідроксиду. Відбувається руйнування молеку­ли молеку­ли метіоніну з утворенням похідних меркаптану і сульфідів:

Утворені сульфіди можна виявити кольоровою реакцією з розчином натрію плюмбіту або нітропрусиду.

У три пронумеровані пробірки вливають по 10 крапель 5 % -вого роз­чину плюмбуму ацетату і краплями до­дають 20 % -вий розчин натрію гідроксиду до розчинення по­передньо утвореного осаду. Потім у першу пробірку додають 1 мл 1 % розчину яєчного білка, у другу – 1 мл 1 % розчину желатини, у третю — 1 мл 0,1 %-вого розчину цистеїну гідрохлориду, у четверту – 1 мл 0,1 % розчину метіоніну. Суміші кип'ятять. Спостерігають за перетворенням забарвлення в кожній пробірці, дають пояс­нення і записують рівняння хімічної реакції.

1.3.9 Нітропрусидна реакція на сульфуровмісні амінокислоти.

В одну пробірку вносять 1 мл нерозведеного свіжого яєчного білка, у другу — 1 мл 0,1 %-вого роз­чину цистеїну гідрохлориду, у третю — 1 мл 0,1 %-вого розчину метіоніну. Приливають у всі пробірки по 1 мл 20 %-вого розчину натрію гідроксиду, кип'ятять 3 хв, охоло­джують і вносять 2—3 краплі 5 % -вого розчину натрію нітро­прусиду. Спостерігають за появою забарвлення, дають пояснен­ня і записують хімізм реакції.

Натрію сульфід, утворений при лужному гідролізі білків і суль­фуровмісних амінокислот, дає з натрію нітропрусидом комплексну сполуку червоно-фіолетового кольору:

1.4 Питання для самоконтролю

(домашнє завдання).

1. Дайте визначення білків.

2. Чим обумовлені кольорові реакції на білки?

3. Якщо з розчином одного білка реакції Міллона та ксантопротеїнова позитивні, а з розчином другого негативні, то що можна сказати про відмінність амінокислотного складу цих білків?

4. Як за допомогою кольорових реакцій виявити в білку аргінін, цистеїн?

5. Дані пептиди:

• Асп-Фен-Мет-Гис-Цис-Ала

• Тир-Цис-Про-Арг-Глу.

Які кольорові реакції будуть позитивні з цими пептидами? Обгрунтуйте ваш вибір.

6. За допомогою яких кольорових реакцій можна встановити відмінність

амінокислотного складу альбуміну й желатину?

7. Дани дві пробірки з розчинами: одна з розчином білка, друга вміщує суміш амінокислот. За допомогою кольорових реакцій визначити:

а) в якій пробірці міститься білок?

б) які амінокислоти містяться в другій пробірці?