2.5. Приготування поживних середовищ для виявлення цвільових грибів

Цвільові гриби можна виявляти, використовуючи для цього такі середовища:

• середовище Чапека;

• середовище Сабуро.

Середовище Чапека готують так: на 1 л води беруть сірчастокислого магнію — 0,5 г, кислого фосфорнокислого калію — 1г, хлористого калію — 0,5 г, азотнокислого натрію— 3 г, сірчистокислого заліза — 0,01 г і сахарози — З0 г. Після розчинення зазначених речовин додають ще 2,5% агару і готують щільне середовище звичайним способом. Стерилізують при 0,05 МПа протягом 15 хв.

Середовище Сабуро. До 100 мл стерильної дріжджової води додають 5 г пептону, 4 г глюкози, 1,8 г агару. стерилізують при 0,05 МПа протягом 20 хв.

2.6. Вивчення впливу окремих елементів поживних середовищ на ріст та розвиток мікроорганізмів

Для виявлення впливу окремих елементів, що входять до складу живильних середовищ, на ріст та розвиток мікроорганізмів, наприклад гриба Aspergillus niger, готують декілька варіантів середовищ. Суть полягає в тому, що в першому варіанті середовище повноцінне і містить усі необхідні елементи, а гриб Aspergillus niger добре на ньому розвивається. В інших варіантах відсутній один із елементів, або його замінено мікроелементом. За інтенсивністю росту гриба на різних середовищах роблять висновок про роль окремих елементів для розвитку мікроорганізмів.

Отже, готують такі варіанти поживних середовищ.

1. Повноцінне поживне середовище з таким складом (%): сахароза – 10,0; NH₄NO₃ – 0,3; KH₂PO₄ – 0,2; MgSO₄ – 0,05; FeSO₄ – 0,01. Його використовують як контрольне для характеристики та оцінювання росту гриба Aspergillus niger.

2. Аналогічне середовище, але без джереле Карбону, тобто без сахарози. Для компенсації осмотичної активності, яку забезпечувала сахароза, можна запропонувати Натрію хлорид (NaCl), який не впливає на ріст гриба.

3. Таке ж середовище, але без джерела Нітрогену. Отже, відсутній NH₄NO₃.

4. Це ж середовище, але без джерела Фосфору, тобто відсутній KH₂PO₄. Для компенсації йонів Калію, що входить до KH₂PO₄, можна використати KCl. Перед приготуванням середовища здійснюють перерахунок еквівалентних кількостей тих солей, які використовують для заміни відсутніх компонентів середовища.

5. Таке ж середовище, але без джерела Калію. Відсутній KH₂PO₄. Цей компонент заміняють еквівалентною кількістю NaH₂PO₄ для компенсації Фосфору.

6. Це ж середовище, але без джерела Сульфуру, тобто MgSO₄ і FeSO₄. Ці солі замінено еквівалентними кількостями MgCl₂ і FeCl₃ (або FeCl₂).

7. Таке ж середовище, але без джерела Магнію. Відсутній MgSO₄. Цей компонент заміняють еквівалентною кількістю Na₂SO₄.

8. Таке ж середовище, але без джерела Феруму. Відсутній FeSO₄, який замінено еквівалентною кількістю Na₂SO₄.

9. Аналогічне середовище з додаванням мікроелементів, зокрема ZnSO₄.

10. Аналогічне середовище з додаванням мікроелементів, зокрема МnSO₄.

11. Аналогічне середовище з додаванням мікроелементів, а саме H₃BO₃.

Варіант	Компоненти, %;
	сахароза	NH4NO3	KH2PO4	MgSO4	FeSO4	Замінено	Додано
1 Варіант	10,0	0,3	0,2	0,05	0,01	-	-
2 Варіант	-	0,3	0,2	0,05	0,01	NaCl	-
3 Варіант	10,0	-	0,2	0,05	0,01	-	-
4 Варіант	10,0	0,3	-	0,05	0,01	KCl	-
5 Варіант	10,0	0,3	-	0,05	0,01	NaH2PO4	-
6 Варіант	10,0	0,3	0,2	-	-	MgCl2, FeCl3	-
7 Варіант	10,0	0,3	0,2	-	0,01	Na2SO4	-
8 Варіант	10,0	0,3	0,2	0,05	-	Na2SO4	-
9 Варіант	10,0	0,3	0,2	0,05	0,01	-	ZnSO4
10 Варіант	10,0	0,3	0,2	0,05	0,01	-	МnSO4
11 Варіант	10,0	0,3	0,2	0,05	0,01	-	H3BO3

Виготовлення середовищ здійснюють в такій послідовності:

1. розраховують еквівалентні кількості тих солей, які використовують для заміни відсутніх компонентів середовища;

2. здійснюють перерахунок кількості компонентів (в грамах) для усіх поживних середовищ на об’єм відповідно до об’єму посуду, в якому вирощуватиметься гриб Aspergillus niger. Наприклад, для колб (100 см³) об’єм поживного середовища може становити 30 см³;

3. оскільки компоненти вносять у вигляді розчинів, то розраховують необхідні кількості компонентів для приготування цих розчинів. Використовують такі концентрації розчинів: сахарози – 20%, джерел Нітрогену, Фосфору, Сульфуру, Калію, Магнію, Феруму – 10%, мікроелементів – 1%.

4. вносять розраховані об’єми (см³) розчинів, необхідних для кожного варіанту компонентів поживних середовищ, і додають решту від загального об’єму середовища дистильованої води.

5. колби зі середовищами закривають ватними корками і підписують номер варіанту;

6. далі проводять термічну стерилізацію.