Визначення неорганічного фосфору і його клінічне значення

У лабораторній практиці визначення неорганічного фосфору в сироватці крові часто проводять за методикою Аммона і Гінсберга в модифікації С.А. Іванівського.

РЕАКТИВИ:

1. 20% розчин трихлороцтової кислоти (ТХО).

2. Стандартний розчин фосфору. – взяти 4,394 г калію фосфорнокислого однозаміщеного (КН₂РО₄) , (висушеного до постійної маси в эксикаторе над сірчаною кислотою) розчинити в 1 л дистильованої води і додати 5 мл хлороформу (в 1 мл розчину міститься 1 мг фосфору). Зберігають розчин у холодильнику до 1 року. З нього готують робочий стандартний розчин.

3. Робочий стандартний розчин розведенням у 50 разів – беруть 1 мл стандартного розчину і 49 мл дистильованої води (у 1 мл робочого стандартного розчину міститься 0,02 мг фосфору).

4. Розчин молібдену (молібдат амонія). Готують дві сміши:

• . 25 г молібдату амонію розчиняють у 300 мл дистильованої води.

• . 75 мл концентрованої сірчаної кислоти розбавляють 125 мл дистильованої води (кислоту доливають до води).

Коли розчин сірчаної кислоти остигне, обидва розчини змішують, суміш стійка, її зберігають у скляному посуді з білого скла.

5. 1% розчин аскорбінової кислоти (до 1 г аскорбінової кислоти додати 99 мл HCL).

МЕТОДИКА ВИЗНАЧЕННЯ:

1. Осадження білків. У центрифужну пробірку вносять 3 мл дистильовані води, 1 мл сироватки крові і 1 мл 20% розчину трихлороцетової кислоти. Добре змішують і через 5 хв центрифугують при 3000 об/хв протягом 15 хв або фільтрують через обеззолений фільтр.

2. Визначення фосфору. У дві пробірки (дослідну і контрольну) вносять, мл:

розчини	дослідна	контрольна
фільтрат сироватки	2.5	–
стандартний розчин фосфору	–	3
розчин молібдену	0,5	0,5
0.5 % р-н аскорбінової к-ти	1	1
дстильована вода	6,0	5,5

Ретельно змішують і через 10 хв колориметруют при зеленому світлофільтрі (довжина хвилі 540 нм) проти води.

Розрахунок проводять по формулі:

Р (мг%) = , де

Е_досл. – Екестинція досліджуваної проби,

Е_{контрол.} – Екстинція контрольної проби,

0,05 – кількість фосфору в стандартному розчині,

100 – коефіцієнт для перерахунку кількості Р на 100 мл сироватки.

Вміст неорганічного фосфору в сироватці крові у різних видів тварин, мг% .

Велика рогата худоба	4,5 – 6,0
Вівці	4,5 – 7,5
Кози	6,0 – 8,0
Коні	4,2 – 5,5
Свині	4,0 – 6,0

Фосфор відноситься до числа найбільше фізіологічно активних елементів, необхідних для життєдіяльності організму тварин. Він у великій кількості містіться в кістковій тканині, присутній у м’язових, нервових тканинах і в крові. Бере участь в регуляції кислотно-лужної рівноваги, активізує ферментні процеси, та процеси обміну енергії, вуглеводів, білків і жирів.

Гіпофосфатемія – зниження вмісту неорганічного фосфору в сироватці крові. Спостерігається при нестачі його в раціоні тварин, при рахіті, остеомаляції, остеодистрофії, гіперпаратиреозі, атрофічному риніті свиней, хронічній гематурії великої рогатої худоби .

Гіперфосфатемія – підвищення рівня неорганічного фосфору в крові. Відзначається при м’язовій перенапрузі, гіпервітамінозі Д, загоєння переломів кісток, ниркової недостатності, отруєння хлоридом натрію .