5. Обнаружение жирных кислот.

К гидролизату добавить 10%-иый раствор соляной кислоты (до кислой реакции среды по лакмусовой бумажке). В кислой среде жирные кислоты — в виде хлопьев (в щелочной они находятся в виде растворимых натриевых солей). Жирные кислоты отфильтровать, а фильтрат* использовать для следующих двух опытов.

6. Обнаружение глицерина.

К одной части фильтрата добавить 10%-ный раствор едкого натрия (до щелочной реакции среды) и 5%-ный раствор сернокислой меди. Образуется ярко-синий осадок глицерата меди.

7. Обнаружение фосфорной кислоты.

Ко второй части фильтрата добавить 5 капель молибденового реактива Образуется осадок лимонного цвета.

Задание.

1. Объяснить физиологические свойства жиров.

2. Рассмотреть основные жирные кислоты, принимающие участие в синтезе жиров.

3. Разобрать примеры значения жира для животного организма.

Ответить на вопросы:

1. Какие химические вещества называются липидами?

2. Как классифицируются жирные кислоты?

3. Какое явление называется эмульгированием жиров?

4. Что называется кислотным числом и йодным числом жира?

5. Классификация фосфатидов.

6. Методы обнаружения продуктов гидролиза фосфатидов.

Лабораторная работа по теме «ОБМЕН БЕЛКОВ»

Опыт №1: КОЛОРИМЕТРИЧЕСКОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ БЕЛКА В СЫВОРОТКЕ БИУРЕТОВЫМ МЕТОДОМ

Метод основан на принципе биуретовой реакции, то есть на способности белка давать с сернокислой медью в щелочной среде комплексное соединение, окрашенное в красно-фиолетовый цвет. Интенсивность окраски прямо пропорциональна концентрации белка в растворе и измеряется ФЭКом.

Фотоэлектрический колориметр ФЭК-М предназначен для измерения оптической плотности или светопропускания жидких растворов по отношению к растворителю или стандартному раствору. В основу работы прибора положен принцип уравнивания интенсивности двух световых пучков, проходящих через оптические среды, при помощи переменной щелевой диафрагмы.

Изменение оптической плотности растворов

1. Включают прибор за 15-20 минут до начала работы.

2. Шкалой светофильтров устанавливают необходимый светофильтр

3. Индекс правого отсчетного барабана устанавливают на барабане (по красной шкале)

4. 4 в левом пучке света на все время измерения устанавливается кювета с растворителем.

5. В правом пучке света устанавливается кювета с растворителем стандарта. ',

6. Переключатель 7 ставят на отметку 1 (малая чувствительность) и приводят стрелку гальванометра в нулевое положение при помощи фотометрического клина 4.

7. Переключатель переводят в положение 2 (большая чувствительность) и приводят стрелку гальванометра 0 с помощью клина 5.

8. Переключатель переводят в исходное положение.

9. В правом пучке света устанавливают кювету с исследуемым раствором.

10. Стрелка гальванометра приводится в нулевое положение вращением правого отсчетного барабана при малой (1) и большой (2) чувствительности.

11. Переключатель вновь переводится в исходное положение.

12. По правому барабану отсчитывают оптическую плотность раствора (красная шкала).

Определение концентрации вещества в растворе

Для определения концентрации вещества в растворе необходимо построить градуировочную кривую для данного вещества. Построение этой кривой производится следующим образом.

Приготавливают ряд растворов данного вещества с известными концентрациями. Выбрав соответствующую кювету, проводят измерение оптической плотности этих растворов.

Строят градуировочную кривую, откладывая по горизонтальной оси известные концентрации, а по вертикальной - соответствующие оптические плотности.

Имея градуировочную кривую, можно определить неизвестную концентрацию вещества в растворе. Для этого определяют оптическую плотность раствора с неизвестной концентрацией, затем по градуировочной кривой находят концентрацию раствора, соответствующую данному значению оптической плотности.

Определение белка в сыворотке биуретовым методом.

Приборы: ФЭК. Штативы. Пипетки на 1 и 2 мл. Мерные цилиндры на 10

мл.

Реактивы: биуретовый реактив (сернокислая медь, едкий натрий) 200 мл.

Сыворотка крови, разбавленная в 20 раз - 50 мл.

Ход работы:

1. В пробирку наливают 1 мл сыворотки крови, разведенной в 20 раз, добавляют 1 мл воды.

2. В другую пробирку наливают 2 мл дистил. воды (контроль 95).

3. В обе пробирки наливают по 8 мл биуретового реактива. Перемешивают. Оставляют при комнатной температуре на 20 минут.

4. Колориметрируют на ФЭКе при зеленом светофильтре.

5. Записывают оптическую плотность и по градировочной кривой находят количество белка в пробе. (Градуироночная кривая для определения белка биуретовым методом строился путем определения оптической плотности растворов белка с известной концентрацией).

Расчет: Оптическая плотность раствора белка равна 0,15. По градуировочной кривой находят, что эта оптическая плотность соответствует содержанию белка в пробе - 3,25 мг. Следовательно, в 1 мл, разведенном в 20 раз сыворотке, содержится 3,25 г белка. Вычисляем количество белка в 100 мл сыворотки крови.

Ответить на вопросы:

1. Рассказать об устройстве ФЭКа.

2. Как измерить оптическую плотность раствора?

3. Как определить концентрацию вещества в растворе?

4. Описать определение белкаа в сыворотке крови биуретовым методом.

23