0Пыт№1.Качественные реакции на инсулин.
а) РЕАКЦИЯ ГЕЛЛЕРА. К 10 каплям конц. HN03 осторожно по стенке пробирки приливают равный объем 10 капель раствора инсулина. Пробирку наклоняют под углом 45 градусов так, чтобы обе жидкости не смешивались.
На границе двух жидкостей образуется белый аморфный осадок в виденебольшого кольца.
б) БИУРЕТОВАЯ РЕАКЦИЯ. К 10 каплям инсулина добавляют 5 капель 10%-го раствора едкого натра и 1 каплю 1%-го CuS04.
Жидкость окрашивается в фиолетовый цвет.
в) РЕАКЦИЯ ФОЛЯ. К 5 каплям раствора инсулина приливают 5 капель реактива Фоля и кипятят. Через 1-2 минуты при стоянии появляется бурый или черный осадок.
Опыт №2. КАЧЕСТВЕННАЯ РЕАКЦИЯ НА АДРЕНАЛИН.
В пробирку наливают 10 капель раствора адреналина и добавляют 1 каплю FeCl3. Наблюдается зеленое окрашивание вследствие присутствия пирокатехина в молекуле адреналина. Добавив 1 каплю 10%-го раствора NaOH, наблюдают вишнево-красное окрашивание.
Опыт №3. ЩЕЛОЧНОЙ ГИДРОЛИЗ ТИРЕОИДИНА.
В ступку помещают 5 таблеток тиреоидина и тщательно их растирают. Растертую массу пересыпают в колбочку для гидролиза, добавляют 5 мл. 10%-го раствора щелочи и 5 мл. Н20. Затем кипятить колбочку на асбестовой сетке в течении 10-15 минут.
а) ОТКРЫТИЕ ЙОДА В ПОЛУЧЕННОМ ГИДРОЛИЗАТЕ.
К 25 каплям охлажденного гидролизата прибавляют 10%-ый раствор H2SO4 до кислой реакции на лакмус. После подкисления добавляют 3 капли 1%-го раствора крахмала и 5-10 капель 2%-го раствора йодноватого калия (не избыток). Выделившийся йод дает синее окрашивание с крахмалом.
Опыт Ш. КАЧЕСТВЕННАЯ РЕАКЦИЯ НА ФОЛЛИКУЛИН /эстрон/ с КОНЦ. H2SO4.
В маленькую пробирку наливают 2 капли спиртового раствора 'фолликулина и помещают ее в кипящую водную баню на 5-10 минут для удаления спирта. К оставшемуся в пробирке фолликулину добавляют 10 капель конц. H2SO4, и помещают пробирку вновь в кипящую водяную баню на 5-10 минут. Появляется соломенно-желтое окрашивание, переходящее при нагревании в оранжевое.
Лабораторная работа по теме "обмен углеводов" Опыт № I. «получение гликогена по пфлюгеру»
Принцип метода. Печень или мышечная ткань только что убитого животного кипятят с равным объемом 60%-ного раствора КОН.
При этом гидролизуется белки ткани, а гликоген переходит в раствор, из которого затем осаждается спиртом.
Ход работы: В центрифужную пробирку налагают 2 мл 60%-ного КОН гуда же кладут 1,5-2 г ткани. Пробирку ставят на час в кипящую водяную баню, часто взбалтывают. Через час пробирку вынимают из бани, охлаждают и добавляют в нее 8-10 мл спирта. Выпадает ОСАДОК ГЛИКОГЕНА. Пробирку ставят в центрифугу и центрифугируют. Жидкость сливают. Осадок растворяют в 2 мл 15%-ного раствора КОН и снова добавляют 8-10 мл спирта. Снова выпадает осадок гликогена. Центрифугируют и жидкость над осадком сливают.
Опыт №2. «ГИДРОЛИЗ ГЛИКОГЕНА»
Ход работы: Осадок гликогена растворяют е 3-4 мл 2,5%-ного раствора соляной кислоты и кипятят 15-20 минп Охлаждают и нейтрализуют 10%-ным раствором щелочи, добавляют реактив Фслинга и кипятят Проба должна бить положительной
Лабораторная работа по теме «ОБМЕН ЛИПИДОВ.
ФОСФОЛИПИДЫ»
Опыт №1: «ВЫДЕЛЕНИЕ ЛЕЦИТИНА ИЗ ЖЕЛТКА
куриного яйца
Понятие о лецитинах. Лецитины относятся к фосфоглицеридам (фосфатидилхолинам). При гидролизе лецитинов освобождается молекула глицерина, две молекулы жирных кислот ( из которых одна является непредельной), молекулы фосфорной кислоты и азотистого основания холина.
Фосфорная кислота в молекуле лецитина соединена сложноэфирной связью со спиртовой группой холина
холин
В зависимости от того, к какому углеродному атому глицерина присоединен остаток холинфосфорной кислоты, выделяют а и р-лецитины. Лецитины различаются также по жирным кислотам, входящим в их состав.
Реактивы: 1) желток куриного яйца, б) этиловый спирт, в) ацетон, г) хлористый кадмий, насыщенный спиртовой раствор.
Ход работы:
В небольшой стаканчик вносят желток куриного яйца и, помешивая стеклянной палочкой, добавляют 10 мл горячего спирта. После остывания содержимое фильтруют в сухую пробирку. Фильтрат должен быть прозрачным.
1. Осаждение ацетоном.
В сухую пробирку наливают 2-3 мл ацетона и по каплям прибавляют спиртовой раствор лецитинов. Выпадает осадок. Так как лецитины в ацетоне не растворяются.
2. Получение эмульсии лецитинов.
Для получения эмульсии к 2-3 мл спиртового раствора добавляют по каплям дистиллированную воду. Образуется устойчивая эмульсия лецитинов в воде.
3. Осаждение хлористым кадмием
В сухой пробирке к 1 мл спиртового каплям насыщенный раствор хлористого кадмия. Выпадает белый осадок соединения лецитинов с хлористым кадмием.
4. Обнаружение холина.
После осаждения ацетоном осадок лецитинов нагревают с несколькими мл 10%-ного раствора едкого кали или едкого нарта. Лецитины гидролизуются на свои компоненты. При гидролизе происходит частичный распад холина с отщеплением триметиламина, обладающего селедочным
запахом.
Приборы: Штатив с пробирками, спиртовка, воронки, фильтры.
Реактивы. Раствор желтка (161), едкий натр 10%-ный раствор, лакмусовая бумажка, соляная кислота 10%-ный раствор, сернокислая медь 5%-ный раствор, молибденовый реактив.
Ход работы: В пробирку поместить 2 мл раствора желтка добавить 2 мл едкого натрия и прокипятить. Идет гидролитический распад лецитина Наряду с гидролизом лецитина распадается холин с образованием триметиламина, который можно обнаружить по посинению влажной лакмусовой бумажки, поднесенной к пробирке.