Лабораторная работа по теме «белки»

Опыт№1: «ДИАЛИЗ БЕЛКОВ»

Диализ демонстрирует макромолекулярную природу белка. Как и все высокомолекулярные соединения, белок не проникает через искусственные (например, целлонам, пергамент и др.) и биологические мембраны, что позволяет использовать диализ как метод очистки белка от низкомолекулярных органических и неорганических примесей.

Метод основан на способности мембран задерживать макромолекулы белка и пропускать неорганические ионы.

Для приготовления раствора одну из смесей растворяют в 10 мг 50%-ного раствора муравьиной кислоты или в 10 мг дистиллированной волы, к которой добавляют несколько капель бутилового спирта.

Чтобы приготовить растворитель берут 4 части бутилового спирта, одну* часть ледяной уксусной кислоты и 5 частей дистиллированной волы жидкости наливают в делительную воронку, встряхивают в течение нескольких минут и оставляет для разделения слоев. Нижний олой сливают и используют для насыщения его парами камеры, в которой производится хроматография. Верхний насыщенный. водой бутилово-уксусньш слой, используют для хроматографии.

На дно хроматографической камеры наливают небольшое количество растворителя, который при испарении насыщает камеру парами, что предотвращает высыхание фильтровальной бумаги. В верхней части камера укрепляют ванночку, представляющей собой стеклянную трубку соответствующую длине камеры, запаянную с концов, имеющую продольный разрез шириной 2-3 мм, и наливают в нее растворитель.

Берут полоску хрономатографической бумаги шириной 5 см и, отступая от ее края на 8-10 см, при помощи микропипетки наносят 0,005-0,01 мл приготовленной смеси аминокислот. Образовавшееся пятно быстро просушивают над электроплиткой. Коней бумаги, ближе к которому нанесена капля смеси, опускают в ванночку с растворителем, а второй конец должен свободно свисать через отверстие в ванночке в камеру. Необходимо следить, чтобы полоска бумаги свисала строго вертикально и не прикасалась свободной концом ни к стенкам, ни ко дну камеры, ни к растворителю на дне камеры. В ванночке полоса бумаги фиксируется предметным стеклом или стеклянной палочкой.

В процессе хроматографии растворитель должен пройти вдоль всей полосы бумаги, увлекая за собой аминокислоты. Когда растворитель пройдет до конца полосы, ее извлекают из камеры и высушивают на воздухе в вытяжном шкафу. Для лучшего разделения смеси пропускание растворителя можно повторить. Высушенную полосу опрыскивают раствором 0,5%-ного нингидрина на ацетоне с добавлением уксусной кислоты и воды (95:1:4) и помещают в сушильный шкаф при температуре 60 °С на 10-15 чин. На высушенной полосе появляются отдельные лиловые пятна, соответствующие адсорбированныз аминокислот из взятой смеси.

Лабораторная работа по теме «БЕЛКИ»

Опыт №1 :«ДИАЛИЗ БЕЛКОВ»

Диализ демонстрирует макромолекулярную природу белка. Как и все высокомолекулярные соединения, белок не проникает через искусственные (например, целлонам, пергамент и др.) и биологические мембраны, что позволяет использовать диализ как метод очистки белка от низкомолекулярных органических и неорганических примесей.

Метод основан на способности мембран задерживать макромолекулы белка и пропускать неорганические ионы.

Ход определения:

В две пробирки наливают по 1 -2 мл раствора яичного белка с хлоридом натрия. В первую пробирку добавляют 1-2 капли раствора азотнокислого серебра AgN0₃, во вторую - 2 мл NaOH и 1 -2 капли CuS0₄ (т.е. проделывают биуретовую реакцию качественную реакцию на пептидную связь в мо­лекулах белка).

Целлофану, предварительно замоченному в дистиллированной воде, придают форму мешочка, который примерно на 1/3 заполняют исследуемым раствором белка. Края мешочка зажимают "между двумя стеклянными палочками, которые прижимают друг к другу с помощью надетых с двух концов резиновых палочек

Мешочек погружают в стакан с дистиллированной водой, положив зажимающие его стеклянные палочки на края стакана.

Через 45 мин. после начала диализа берут две пробы наружное жидкости. С одной из них проводят биуретовую реакцию на белок, с другой - реакцию на ион хлора, добавляя 2-3 капли AgNOa.

Проделывают пробы на белок и ион хлора с жидкостью внутри мешочка.

Определяемые компоненты	До диализа		После диализа
	внешняя жидкость	внутренняя жидкость	Внешняя жидкость	внутренняя жидкость
Белок
Ион СГ				■1

В выводах отметить, какое свойство белка демонстрирует метод диализа.

Опыт №2: «ИССЛЕДОВАНИЕ ВЫСАЛИВАНИЯ БЕЛКОВ»

Высаливание - процесс осаждения белков солями щелочных и щелочно­земельных металлов, который является обратимым и сохраняет нативные свойства белков. Растворы солей нейтрализуют заряд белковых частиц вызывают их дегидратацию, что ведет к осаждению белка. При прилипании воды происходит восстановление его исходных физико-химических и биологических свойств.

Метод основан не способности сульфата аммония нейтрализовать заряд молекул белков я вызывать их дегидратацию, что приводит к осаждению белка

Ход определения: В пробирку наливают 2-3 мл раствора яичного белка и добавляют кристаллический сульфат аммония по появления осадка Затем добавляют дистиллированной воды, хорошо перемешивают наблюдают постепенное исчезновение осадка белка. Делают вывод.

Опыт №3: «ИССЛЕДОВАНИЕ ДЕНАТУРАЦИИ БЕЛКОВ»

Вещества, нарушающие структурную организацию белковой молекулы, (т.е. четвертичную, третичную и вторичную структуры) приводят к изменению физико-химических и биологических свойств белка. Это явление ваз. денатурацией. Денатурация изменяет физико-химические свойства белка, в частности его растворимость. При этом белок становится более гидрофильным и легко осаждается. Денатурация чаще всего необратима.

Денатурирующие факторы делятся на химические, физические и биоло­гические.⁴ Наиболее обширны группы химических факторов; кислоты, тя­желые металлы, алкалоиды, органические растворители, Физические фак­торы: температура, ионизирующая радиация, ультразвук и т.д.

Метод основан на способности минеральных кислот и органических растворителей вызывать разрушение пространственной структуры белка, что приводит к его осаждению.

Ход работы. В две пробирки наливают по 1-2 мл раствора белка. Прибавляют> по каплям в первую пробирку раствор концентрированной азотной кислоты, во вторую - раствор ацетона. В пробирках образуются осадки белков.

Делают вывод.

Лабораторная работа по теме «ВИТАМИНЫ»

Опыт №1: «КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ВИТАМИНА «С» В КАПУСТЕ».

Витамин С, или аскорбиновая кислота, относится к водорастворимым витаминам. Аскорбиновая кислота легко окисляется как в щелочной так и в кислой среде. Продукт ее окисления дегидроаскорбиновая кислота, которая восстанавливаясь (присоединяя два атома водорода), превращается в аскорбиновую кислоту. Благодаря этому свойству аскорбиновая кислота участвует в окислительно-восстановительных реакциях в организме, играя роль переносчика.

Ход работы: Навеску капусты 10 г тщательно растирают в ступке, небольшими порциями добавляя стеклянный песок (работать необходимо встеклянных очках). Затем прибавляют несколько мл соляной кислоты. Полученный гомогенат переносят е цилиндр, ступку и пестик смывает кислотой, полученный осадок также сливают в цилиндр. Объем жидкости доводят до метки 100 мл соляной кислотой. Едут пока выпадет осадок и отбирают 10 мл над осадочной жидкости в коническую колбу (делают 2 про­бы). Затем титруют реактивом Тильманса (раствором 2,6-дихлорфенолиидо-фенола) до появления розового окрашивания, не исчезающего в течение 30 сек.

Количество витамина С рассчитывают по формуле (мг/%)

А*0,088*10 *100

У* С

• где, а - количество реактива Тильманса (мл), пошедшее на титрование фильтрата, 0,088 - количество аскорбиновой кислоты (мг) эквивалентное

• 1мл реактива Тильманса; 100 - общий объем солянокислого экстракта; у - объем фильтарата (мл), взятый для фильтрования реактивом Тильманса;

• 10 - пересчет на 100 г растительного материала; С — навеска растительной массы.

Лабораторная работа по теме «ФЕРМЕНТЫ»