Техника полного паразитологического вскрытия рыбы
Держа рыбу брюхом кверху в левой руке, вводят острый конец ножниц в мягкую кожу, окружающую анальное отверстие, и коротким разрезом прорезают поперек брюшную стенку тела, впереди от анального отверстия. В разрез вводят тупую ветвь ножниц и разрезают брюшную стенку тела вдоль по средней линии до заднего края ротовой щели, по пути прорезая опорные косточки плавников и жабр. Затем, оттянув стенку левой стороны тела, рассекают ее ножницами от анального отверстия к боковой линии, поворачивают ножницы и ведут разрез параллельно боковой линии вперед до заднего угла жаберной крышки. Затем разрезают, направляя ножницы книзу, перепонку жаберной полости и доходят до переднего края брюшного разреза. После этого снимают вырезанную боковую стенку тела и кладут рыбу на правый бок в кювету. Лежащие в полости тела органы оказываются обнаженными (рис. 5). Чтобы достать головной мозг, скальпелем или ножницами срезают в горизонтальном направлении верхнюю стенку черепа между затылком и глазами. Для вскрытия спинного мозга перерезают позвоночник рыбы у головного мозга, а затем вблизи хвоста и вытягивают спинной мозг от головного конца. Глаза удобнее всего вырезать из орбит маленькими изогнутыми ножницами. Кожу с тела (для обнажения мышц) снимают в направлении от головы к хвосту при помощи острого скальпеля.
Сбор внутренних паразитов. Паразиты, находящиеся на поверхности органов, жировой ткани, брюшине, относятся к полостным паразитам (полость тела обследуют сразу после ее вскрытия). В полости тела встречаются в основном личинки паразитических червей, достигающие половой зрелости хищных рыб, рыбоядных птиц и млекопитающих. Это, например, личинки ленточных червей Ligula, Digramma, Schistocephalus, плероцеркоиды широкого лентеца – Diphyllobothrium latum. Этих паразитов собирают, фиксируют и отмечают их количество.
Затем соблюдают следующую очередность в исследовании органов: сердце; мочевой пузырь; желчный пузырь; печень; селезенка; жировая ткань; брюшина; кишечник; половые железы; плавательный пузырь; почки; глаза; головной мозг; спинной мозг; мускулатура; скелет.
Сердце вынимают вместе с крупными сосудами и кладут в глубокое часовое стекло с физиологическим раствором. Его осматривают снаружи, а затем вскрывают. Здесь можно обнаружить цисты миксоспоридий, личинки трематод. Затем стенка сердца исследуется компрессорным способом, для чего ее нарезают мелкими кусочками и просматривают между стеклами под бинокуляром. Обнаруженных паразитов выделяют, изготавливают из них препараты, отмечают их количество в карточке вскрытий.
Мочевой пузырь вырезают у самого основания так, чтобы его содержимое не вылилось. Его осторожно разрывают иглами на стекле и исследуют визуально (бинокуляр), затем методом соскоба (микроскоп) и компрессорным способом. Там встречаются миксоспоридии, инфузории, трематоды Phyllodistomum. В случае обнаружения простейших делают сухой мазок для последующего серебрения.
Печень, кишечник, жировое тело и брюшина препарируются вместе, помещаются в чашку Петри с небольшим количеством воды для избежания их подсыхания. Затем органы отделяются друг от друга и исследуются в установленном порядке.
Желчный пузырь выделяется из печени, стенка его прорезается и вылившаяся желчь исследуется под бинокуляром и микроскопом (без добавления воды). Здесь могут быть миксоспоридии, кокцидии, личинки трематод.
Печень осматривают невооруженным глазом, отмечая крупные цисты трематод, капсулы ленточных червей или самих червей, лежащих вне капсулы, цисты миксоспоридий, личинки круглых червей. Этих паразитов собирают, фиксируют, ведут количественный учет. Затем ткань печени небольшими порциями между стеклами просматривают под бинокуляром. Несколько проб следует просмотреть на наличие кокцидий под большим увеличением микроскопа.
Селезенку обследуют таким же способом. Здесь могут быть обнаружены кровепаразиты, личинки нематод и трематод.
Жировую ткань и брюшину снимают с кишечника отдельными частями и просматривают на стекле в капле воды под бинокуляром на наличие личинок трематод, ленточных и круглых червей и скребней. Под большим увеличением микроскопа можно найти споры миксоспоридий.
Кишечник вычленяют вместе с глоткой и анальным отверстием, растягивают, очищают от окружающей ткани и рассматривают по частям, начиная с заднего конца к переднему или наоборот. Условно кишечник подразделяется на переднюю, среднюю и заднюю части для просмотра. От кишки отрезают небольшие участки, которые предварительно осторожно разрезаются вдоль, чтобы не перерезать паразита, могущего находиться внутри. Тупой стороной скальпеля снимают содержимое кишечника на стекло в каплю воды. Всех паразитов, видимых простым глазом, иглой помещают в воду или физиологический раствор, а затем на стекле под бинокуляром рассматривают содержимое кишечника, где могут быть найдены более мелкие паразиты (трематоды, ленточные черви, круглые черви и скребни). Затем острой стороной скальпеля делают соскоб со слизистой оболочки исследуемого кусочка кишки. Соскоб просматривают под большим увеличением микроскопа с целью возможного обнаружения кокцидий и фиксируют так же, как мазки с кровепаразитами. Затем стенку кишечника исследуют компрессорным методом.
Половые железы сначала осматривают снаружи, а затем компрессорным методом мелкими частями под – бинокуляром. На их поверхности встречаются личинки трематод и нематод, часто в капсулах, а в толще ткани яичников и семенников – цисты метацеркарий, плероцеркоиды широкого лентеца, личинки триенофоруса и нематод. Из половых желез берется также несколько проб для просмотра под микроскопом на простейших (миксоспоридий, кокцидий).
Плавательный пузырь разрезают вдоль, разворачивают и осматривают снаружи и внутри. Затем делают соскоб с внутренней поверхности. После этого здесь можно обнаружить нематод рода филометра. После этого стенки пузыря просматривают в воде с их растяжкой и, наконец, небольшими участками – компрессорным способом. Так можно обнаружить миксоспоридий, кокцидий, инцистированных личинок трематод.
Почки рассматриваются последними из внутренних органов. Задний конец почки – орган выделения, передний конец – орган кроветворения. Ткань почек очень рыхлая, поэтому их не удается отпрепарировать целиком. Их удаляют, начиная от анального отверстия, скальпелем и небольшими частями исследуют под бинокуляром в сдавленном состоянии между стеклами. Просматриваемый слой должен быть тонким и прозрачным. В мочеточниках и выводных канальцах почек можно обнаружить трематод рода Phyllodistomum, цисты трематод, миксоспоридий, кокцидий. В головной почке иногда встречаются кровепаразиты (просматриваются мазки при большом увеличении микроскопа).
Глаза вырезают из орбиты полностью концами изогнутых ножниц. Вскрывают глазные оболочки, разрезают глазное яблоко поперек, высвобождают стекловидное тело и хрусталик, последний отделяют. Выскабливают всю внутреннюю часть глазного яблока. В этом соскобе можно обнаружить цисты миксоспоридий, личинки диплостомид. В стекловидном теле встречаются подвижные белые вытянутые личинки трематод родов Tylodelphys, Dyplostomum. В хрусталике рыб обычны личинки диплостомид. Увидеть их под бинокуляром легко, если хрусталик положить в воду и осторожно поворачивать его двумя препаровальными иглами (не давить между стеклами). Хрусталик зажимают пинцетом, соскабливают его слои до твердого центра, в которых можно также обнаружить диплостомид.
Головной и спинной мозг исследуются компрессорно на наличие личинок трематод. Несколько проб из разных мест мозга просматриваются под большим увеличением микроскопа на миксо- и микроспоридий.
Мускулатура часто служит местом обитания личинок множества паразитов, в том числе весьма опасных для человека и домашних животных. Острым скальпелем снимают с рыбы кожу, для чего делают надрез за головой и вдоль позвоночника кзади, а затем обнажают мускулатуру рыбы в ее спинной части. У крупной рыбы мускулатура осматривается только с одной стороны тела. Мышцы надрезают в виде «книжечки» и сначала «перелистывают» визуально. Затем острым скальпелем срезают с мышц тонкие пластинки и небольшими частями под предметным стеклом рассматривают под бинокуляром. Здесь можно обнаружить цисты миксоспоридий, трематод (в том числе опасные для человека цисты трематоды Opisthorchis felineus), личинки широкого лентеца, триенофоруса. Всех обнаруженных паразитов выделяют и фиксируют.
В хрящевых частях скелета (головы, хвоста, плавников) можно встретить плазмодии миксоспоридий. При исследовании хрящевой ткани ее мелко растирают в ступке, добавляют немного воды и просматривают вытяжку из этого «крошева» под большим увеличением микроскопа.