3.Реакция флокулляции: определение, компоненты, механизмы, применение

3.1.Реакция флокулляции –

3.2.Практическое применение:

а)

б)

4.Реакция нейтрализации: определение, компоненты, механизмы, применение

4.1.Реакция нейтрализации –

4.2.Практическое применение

а)

б)

в)

Иммунологические реакции с использованием меченых антигенов или антител. Иммуноблотинг

№№	Содержание
1	Общая характеристика иммунологических реакций с использованием меченых антигенов или антител
2	РИФ, характеристика метода, его варианты
3	РИА, характеристика метода, его варианты
4	ИФА, характеристика метода, его варианты
5	Иммуноблоттинг

1.Общая характеристика реакций с использованием меченых антигенов или антител

Наименование метода	Метка	Выявление меток
РИФ (реакция иммунофлюоресценции)
РИА (радиоиммунный анализ)
ИФА (иммуноферментный анализ)

2.РИФ, характеристика метода, варианты, применение

2.1.Принцип метода –

2.2. Компоненты реакции

Прямая РИФ	Непрямая РИФ
а)	а)
б)	б)
	в)

3.РИА, характеристика метод, варианты, применение

3.1.Принцип метода –

3.2.Компоненты реакции

Прямой РИА	Конкурентный РИА
а)	а)
б)	б)
	в)

3.3.Недостатки РИА

а)

б)

в)

г)

4.ИФА, характеристика метода, варианты, применение

4.1.Принцип метода –

4.2.Компоненты реакции

Прямой ИФА («сэндвич-метод»)	Непрямой ИФА
а)	а)
б)	б)
в)	в)

5.Иммуноблотинг

5.1.Иммуноблоттинг - выявление антител (реже - антигенов) к определенным антигенам (реже - антителам)

5.2. Принцип метода: разделенный с помощью электрофореза комплекс антигенов наносят на полоску из нитроцеллюлозы. При этом различные антигены фиксируются раздельно в различных участках полоски. Дальнейшее исследование проводят по схеме ИФА - контакт с исследуемой сывороткой - добавление антиглобулиновой сыворотки с ферментной меткой - добавление субстрата для фермента (с целью его активации).

Реакции иммунного лизиса. Реакция связывания комплемента (рск)

№№	Содержание
1	Реакции лизиса, определение, механизмы, компоненты
2	Реакция бактериолиза, определение, механизмы, применение
3	Реакции гемолиза, определение, механизмы, применение
4	РСК, определение, механизмы, применение

1.Реакции лизиса, определение, компоненты, механизмы

1.1.Реакции лизиса –

2.Реакция бактериолиза

2.1.Реакция бактериолиза –

2.2.Компоненты реакции:

а)

б)

в)

3.Реакции гемолиза, определение, компоненты, применение

3.1.Компоненты реакции:

а) 3% взвесь эритроцитов барана (антиген);

б) гемолитическая сыворотка (антитела кроличьего происхождения, получают путем иммунизации эритроцитами барана);

в) комплемент (чаще сыворотка кролика или морской свинки).

4.РСК, определение, компоненты, применение

4.1.РСК - специфическое взаимодействие антигена с антителами, при этом образующийся комплекс адсорбирует комплемент. Результаты реакции учитывают после введения в реакцию гемолитической системы.

4.2.Компоненты реакции

а) исследуемая сыворотка;

б) антиген - взвесь убитых бактерий;

в) комплемент (сыворотка кролика или морской свинки)

г) эритроциты барана (3% взвесь);

д) гемолитическая сыворотка (сыворотка кролика, иммунизированного эритроцитами барана)

4.3.Схема РСК

Опытная система антиген - антитело	Комплемент	Индикаторная система	Результаты и их интерпретация
Антиген и антитела связались	С	Эритроциты барана + гемолитическая сыворотка	Положительный, задержка или отсутствие гемолиза
Антиген и антитела не связались	С	Эритроциты барана + гемолитическая сыворотка	Отрицательный, гемолиз

Пояснения к реакции - в данном методе опытная (исследуемая) и индикаторная (гемолитическая) системы конкурируют между собой за связывание комплемента. Если в опытной пробе произошло взаимодействие антигена и антитела, то именно она свяжет комплемент, его не останется чтобы вызвать гемолиз в индикаторной системе. Таким образом, положительный результат - отсутствие гемолиза после добавления индикаторной системы. Напротив, при отсутствии взаимодействия в опытной тест-системе комплемент останется не связанным и после добавления индикаторной системы вызовет гемолиз - наличие гемолиза означает отрицательный результат.

Для получения достоверного результата необходимо, чтобы все компоненты были взяты в оптимальных количествах, т.н. рабочих дозах. С этой целью как комплемент, так и гемолитическую сыворотку предварительно титруют для последующего расчета их рабочих доз.

4.4.Титр комплемента –

4.5.Рабочая доза комплемента на 20 - 30% выше титра.

4.6.Титр гемолитической сыворотки –

4.7.Рабочая доза комплемента сыворотки равна тройному титру.

ПРАКТИЧЕСКАЯ РАБОТА Реакция связывания комплемента (демонстрация)

Подпись преподавателя