2.Перевиваемые кл. Культуры

Это стабильные или, как их нередко называют, иммортализованные (бессмертные) линии клеток, автономно размножающиеся, подобно бактериям. Получают их из нормальных тканей человека (амниона - FL, А-0, А-1; почек - Rh, 1ШЧ, диплоидных клеток); животных (почек обезьян - Vero, MS, BSC-1; почек кролика - ПК и его роговицы -SIRK) и злокачественных опухолей (шейки матки- HeLa, гортани - НЕр-2, полости рта - KB, костного мозга человека - Д-6 и др.), которые выращиваются путем последовательных пассажей на питательных средах вот уже многие десятки лет.Выбор системы определяется тропизмом вируса – способность репродуцироваться в опр-ых типах клеток. Гетероплоидные. Недостаток: склонны к злокачественному перерождению.

3.К полуперевиваемым культурам относятся диплоид­ные клетки человека. Они представляют собой клеточную систе­му, сохраняющую в процессе 50 пассажей (до года) диплоидный набор хромосом, типичный для соматических клеток использу­емой ткани. Диплоидные клетки человека не претерпевают зло­качественного перерождения и этим выгодно отличаются от опухолевых. НО! они труднее культивируются.

Чтобы увеличить кол-во клеток, исп-ют суспензионное культивирование (на микроносителях).

1. нейротропные (в. бешенства)

2. пневмотропные (в. гриппа)

3. дерматропные (в. оспы)

4. политропные (в. лейкоза мышей)

5. пантропные (в любых клетках – в. болезни Ауески)

Билет 19

1. Генетические и негенетические взаимодействия между вирусами

Моноинфекций почти не существует. Вирусы репродуцируются в условиях смешанной инфекции.

Генетические:

1)Множественная реактивация. Вирусная инфекция может возникнуть при заражении клетки несколькими вирионами с поврежденными геномами вследствие того, что функцию поврежденного гена может выполнять вирус, у которого этот ген не поврежден. Этот феномен был вначале обнаружен на бактериофагах и получил название множественной реактивации. В основе множественной реактивации лежит кооперативный процесс, при котором вирионы с поражением разных генов дополняют друг друга путем генетической рекомбинации, в результате чего репродуцируется исходный неповрежденный вирус.

2) Генетической рекомбинацией называют обмен генетическим материалом, происходящий между родительскими вирусами. Возможен обмен полными генами (межгенная рекомбинация), так и участками одного и того же гена (внутригенная рекомбинация). Образующийся вирус-рекомбинант обладает свойствами, унаследованными от разных родителей. Обычно рекомбинируемые штаммы обладают характерными признаками, которые обозначаются как маркеры. Для получения рекомбинантов используют штаммы, содержащие два или большее число маркеров.

3) Пересортировка генов. Она наблюдается при генетических взаимодействиях между вирусами, имеющими сегментированный геном. Образующиеся при этом гибридные формы вирусов называют реассортантами. Реассортанты вирусов гриппа получают при совместном культивировании вирусов с разными генами гемагглютинина и нейраминидазы. В этом случае из общего потомства путем нейтрализации соответствующих антигенов можно выделить интересующие исследователя варианты. Существуют определенные группировки генов, которые в данной системе клеток более стойки и делают вирус более жизнеспособным.

4) Перекрестная реактивация, кросс-реактивация или реактивация при скрещивании, происходит в том случае, когда у одного из штаммов вируса часть генома повреждена, а другой геном интактен. При смешанной инфекции двумя такими вирусами возможна рекомбинация неповрежденных участков генома инактивированного вируса с геномом интактного вируса, и в результате этого процесса появляются штаммы вируса со свойствами обоих родителей. Описываемый феномен также обозначается как «спасение маркера», поскольку реактивируется (рекомбинирует) лишь часть генома инактивированного вируса, несущая какой-нибудь признак (маркер).

5)Гетерозиготность. При совместном культивировании двух штаммов вируса может происходить формирование вирионов, содержащих в своем составе два разных генома или по крайней мере один полный геном и часть второго генома.

НЕгенетические:

1) Комплементация (дополнение) является таким видом негенетического взаимодействия при смешанной инфекции двумя вирусами, которое стимулирует репродукцию обоих партнеров или одного из них, но не изменяет генотипы вирусов. Принцип комплементации заключается в том, что вирус снабжает партнера недостающими компонентами, обычно белками, структурными или неструктурными.

2) При совместном культивировании двух вирусов может наблюдаться феномен фенотипического смешивания, когда геном одного вируса бывает заключен в капсид, состоящий частично или полностью из белков другого вируса. Легко преодолевают филогенетические барьеры и заражают неприродных хозяинов.

2. Разложение клетчатки, лигнина, пектинов м/о-ми (этого достаточно?? или нужны прям реакции? дополняйте, если что))

Ферментативное расщепление целлюлозы осуществляется под воздей­ствием целлюлазы. В условиях лабораторной культуры микроорганизмы обычно синте­зируют эти ферменты лишь в том случае, если целлюлоза-един­ственный имеющийся субстрат. Их синтез подавляют как другие суб­страты, так и продукт расщепления целлюлозы-целлобиоза.

Разложение целлюлозы в аэробных условиях. В хорошо аэрируемых почвах целлюлозу разлагают и используют аэробные микроорганизмы (грибы, миксобактерии и другие эубактерии), а в анаэробных усло­виях-в основном клостридии.

В аэробных условиях значительная роль в разложении целлюлозы принадлежит грибам. Cytophaga и Sporocytophaga- аэробные бактерии, разлагающие цел­люлозу.

В анаэробных усло­виях целлюлозу расщепляют чаще всего мезофильные и термофильные клостридии. Термофильный видClostridium thermocellum растет на про­стых синтетических средах, используя в качестве субстрата целлюлозу или целлобиозу, а в качестве источника азота-соли аммония; глюкозу и многие другие сахара эта бактерия не утилизирует. Продуктами сбра­живания целлюлозы являются этанол, уксусная, муравьиная и молочная кислоты, молекулярный водород и С0₂. Вне клеток целлюлоза расще­пляется, вероятно, только до целлобиозы. 

Целлюлозные микроорганизмы выполняют огромную санитарную роль, разлагая клетчатку отмерших растений, благодаря чему в почве накапливается гумус, повышающий ее плодородие.

3. Разложение пектиновых веществ

Пектины – это межклеточные вещества растительных тканей. Имеется

три типа пектиновых веществ: протопектин, пектин, пектиновая кислота,

которые подвергаются окислению или сбраживанию разнообразными

микроорганизмами.

Способность расщеплять пектин присуща многим грибам и бакте­риям. Патогенность различных микроорганизмов (Botrytis cinerea, Fusarium oxysporum f. lycopersici) для растений зависит от выделения ими ферментов, растворяющих пектины. Erwinia carotovora вызывает распад тканей у салата, моркови, сельдерея и т. п. В почве численность мик­роорганизмов, разлагающих пектины, чрезвычайно велика (10⁵ клеток на 1 г почвы). 

При анаэробиозе они сбраживаются маслянокислыми бактериями

Clostridium pectinovorum, C. felsineum с образованием масляной кислоты,

уксусной кислоты, водорода, углекислого газа.

Организмы, разлагающие пектины, играют важную роль при мочке льна и конопли. Цель этого процесса-отделение пучков целлюлозных волокон от остальных растительных тканей. В аэробной росяной мочке участвуют грибы, а в анаэробной водяной-главным образом бактерии. 

Разложение лигнина. Некоторые грибы могут разрушать лигнин да­же в живых растениях. Разрушающие древесину базидиомицеты можно разделить на две группы. Возбудители бурой гнили превращают древе­сину в красновато-коричневую массу; они разрушают главным образом целлюлозные и гемицеллюлозные компоненты древесины и не дей­ствуют на фенилпропановые полимеры. Возбудители белой гнили разру­шают древесину с образованием почти белой массы; они действуют в первую очередь на лигнин и почти не затрагивают целлюлозу. К гри­бам, разрушающим прежде всего лигнин, относятся Polystictus versicolor и некоторые другие (например, Stereum hirsutum). Есть также грибы, дей­ствующие одновременно на лигнин и целлюлозу; таковы Pleurotus ostreatus, Ganoderma applanatum, Polyporus adustus, Armillaria mellea.Раз­рушение древесины чистыми культурами грибов происходит так мед­ленно, что эксперименты растягиваются на месяцы и даже годы. С по­мощью различных методов удалось выявить способность к разложению лигнина также у представителей некоторых других родов (Pholiota,Clitocybe, Lenzites, Panus, Poria, Trametes и др.).

Выде­ленный лигнин или его производные (феноллигнин или лигнинсульфонаты) мо­гут служить единственным источником углерода не только для грибов, перечис­ленных выше, но и для многих аскомицетов и несовершенных грибов. Можно получать также накопительные культуры некоторых штаммов бактерий (Flavobacterium, Agrobacterium иPseudomonas) на частично переваренных препара­тах лигнина. В смешанных культурах разложение лигнина происходит быстрее и полнее, чем в чистых.