9.5.3. Методы приготовления биопроб

Как отмечено в 6.4, назначение доаналитического этапа ЛА определяется тем, что объект исследования может находиться в разных исходных условиях, в которых нельзя отбирать пробу. Это особенно важно при медицинских исследованиях, поэтому имеет смысл более подробно рассмотреть условия отбора и приготовления биосубстратов. Этот этап важен и для аналитических исследований веществ из ОС, так как его правильное выполнение исключает влияние случайных факторов, способных внести искажения в результаты.

Необходимо отметить, что чаще всего вещество БП_ИС еще не является непосредственным объектом исследования. Из него формируется так называемое исходное вещество ИВ_БП, которое может существенно отличаться по своему составу и агрегатному состоянию от вещества БП_ИС, отобранного из организма или окружающей среды. Далее исходное вещество подвергается различным операциям и воздействиям в соответствии с технологической схемой выполнения исследования. Это связано с тем, что до начала ППЭ проба должно быть соответствующим образом подготовлена. Например, в кровь предварительно вводят антикоагулянт для предотвращения ее свертывания, центрифугируют для отделения сыворотки и т. д.

При отборе биопроб для медицинского исследования необходимо использовать специально оговоренные в методиках устройства и оборудование, а также по возможности соблюдать следующие требования:

- сохранять необходимый уровень стерильности;

- устранять негативные психологические факторы у пациента;

- сводить к минимуму субъективные факторы (зависят от квалификации персонала).

Кроме того, при отборе пробы необходимо учитывать дополнительные факторы, которые могут повлиять на результаты анализа: используемую лекарственную терапию, назначение диеты, положение пациента в момент отбора пробы и др. В том случае, если исследование проводится не сразу после отбора, при хранении (доставке) важно обеспечить определенные условия для сохранения пробы (температуру, влажность, давление, герметичность контейнеров для хранения, при необходимости - проведение консервации). Рассмотрим особенности методов отбора и приготовления биоматериалов на примере периферической крови, которая, пожалуй, чаще других биожидкостей участвует в проведении МЛА.

Кровь представляет собой жидкость сложного состава – плазму, в которой суспензированы форменные элементы: эритроциты, лейкоциты и тромбоциты. При коагуляции крови после отделения сгустка остается жидкость, которая называется сывороткой. В периферической крови в норме содержатся зрелые клеточные элементы, а незрелые их предшественники находятся в органе кроветворения – красном костном мозге. Клинический анализ периферической крови является одним из важнейших лабораторных тестов и иногда дает возможность сразу определить направление диагностического поиска [ ].

Исследование крови рекомендуется проводить утром натощак. Не рекомендуется брать кровь после физической и умственной нагрузки, применения медикаментов, воздействия рентгеновских лучей и после физиотерапевтических процедур. Все необходимые исследования, а также приготовление мазков крови следует выполнять как можно быстрее, если же это невозможно – тогда пробу крови, тщательно перемешанной с антикоагулянтом, помещают в холодильник при 4⁰С. Перед взятием крови из контейнера или пробирки ее осторожно перемешивают неоднократным перевертыванием для исключения возможных погрешностей.

Капиллярную кровь получают с помощью прокола соответствующего участка кожи глубиной 3-4 мм. Перед проколом кожу обязательно обрабатывают 70%-ным этиловым спиртом или специальным раствором, дают высохнуть и затем прокалывают. Первую каплю снимают ватным тампоном.

Затем в зависимости от дальнейшей процедуры пробоподготовки, которая четко определена для каждого конкретного компонента или исследуемого показателя крови (числа эритроцитов и лейкоцитов, концентрации гемоглобина, скорости оседания эритроцитов и т. д.) подготовка отобранной крови производится по-разному. Существуют также специальные методики предварительной подготовки плазмы и сыворотки крови, которые по своему составу сильно отличаются от цельной крови, отобранной непосредственно из организма.

В процессе отбора и хранения пробы возможно также изменение ее состава из-за загрязнения компонентами, поступающими из материала пробоотборников, различных приспособлений, емкостей для хранения, воздуха лабораторных помещений и т. д. Ввиду этого обычно хранят пробы в посуде из особых сортов стекла или полиэтилена, материал определяется также типом анализируемого компонента.

Таким образом, учитывая все перечисленные факторы, следует строго регламентировать методику пробоотбора. Особо рассматривают вопрос о хранении и консервации пробы. Допустимый промежуток времени между ее отбором и анализом зависит от состава пробы, природы определяемых компонентов и условий хранения. Если невозможно сразу после отбора провести анализ, то пробу консервируют. Некоторые вещества устойчивы в течение длительного времени и не требуют особых условий консервации: в этом случае используются резкое охлаждение, изменение pH среды, добавление стабилизирующих веществ. Иногда для сохранения определяемого компонента его экстрагируют органическими растворителями или сорбируют на различных твердых веществах. Пробы природной воды для получения достоверных результатов необходимо анализировать в течение 1-2 часов после отбора.

Для консервирования определяемых компонентов в пробу добавляют различные консерванты (чаще всего, кислоты и вещества, образующие комплексные соединения). Хранение пробы необходимо проводить в определенных условиях, гарантирующих постоянство ее состава в отношении определяемых компонентов (температура, освещенность, материал посуды и т. д.).