Перечень практических работ:

1. Бактериологическая диагностика при стафило-, стрептококковой, синегнойной, шигеллезной инфекциях.

бакскопич-мазки, бактериологичич-посевы.

В 2этапа

1-выдел-е в чист культ

2-идентификация

1 день-мазок окраска по Грамму-тинкториальн и морфол св-ва.Посев на пит среду

2день-описание культ св-в(высота, величина ,цвет, пов-ть,прозр, края, консистенция),Приготовл мазка из чист колоний Накопление ч. культ на скош агаре

3день-описание хар-ра роста чист культ. Посев на пестр ряд

4день-учет биохим св-в и заключение

Это информативный метод, чувств, опред чувств к антибиот , но долго и дорого

Синегнойная палочка-при сепсисе беру материал из раны, при гангрене из раны, мазок по грамму –палочка , на среде накопленя-мясо-пептонном агаре, образуются колонии малоактивные , плохо ферментируют глюкозу, хорошо-белки, есть пигмент пиоцианин темно синий, имеется запах земляничного мыла, облигатный аэроб, гемолизин-растворяет эритроциты, желатиназа, лецитиназа, экзотоксин А, патогенность обусловлена слизью капсулоподобного в-ва защищающего от фагоцитоза, чувствителен к антибиотикам. Шигеллы –на среду Плоскирева(желчные кислоты,лактоза и индикатор) шигеллы образуют мелкие, прозрачные, бесцветные колонны. Шигеллы Зонне могут давать колонны двух видов: одни плосковатые с зазубренными краями, другие - круглые, выпуклые, с влажным блеском. , гр- палочки, ферментирует манит, глюкозу и сахарозу-шигеллозоны, дифференцирует на роды. Стафилококки –В общем виде схема выглядит следующим образом. Проводят бактериоскопию, выявляя грамположительные кокки в виде гроздей винограда (стафилококки). Высевают материал на простые питательные среды. Подозрительные колонии отбируют и пересевают для изучения на дифференциальные среды - на кровяной агар (гемолиз), молочно - солевой и молочно - желточно - солевой агары (за счет NaCl угнетается рост посторонней микрофлоры, использование сред позволяет лучше выявить пигмент и лецитиназу). Выделенную культуру идентифицируют по видовым признакам, определяют наличие золотистого пигмента, плазмокоагулазную активность, сбраживание маннита, гемолиз, чувствительность к антибиотикам, проводят фаготипирование. бывают коагулазо+(St. aureus) и –(St. Hominis intermedius haemolyticus) . есть капсула, белок А-против фагоцитоза, лейкоцидин-уничтожает макрофагов, гемолизин- альфа и бета активность , энтеротоксин-вызывают, плазмокоагулаза-сгусток вокруг микроба, лецитиназа- расщепляют лецитин оболочки эритроцитов, гиалуронидаза-действует на соединительные ткани, фибринолизин- лизирует сгусток плазмы. Определяют видовую принадлежность, для ауреус –плазмокуагулазу, гемолизин, А-протеин.Стрептококки –Исследуемый материал за­севают на кровяной агар в чашку Петри. После инкубации при 37 °С в течение 24 ч отмечают характер колоний и наличие вокруг них зон гемолиза. Из материала, взятого из коло­ний, готовят мазок, окрашивают по Граму и микроскопируют. Для получения чистой культуры 1—3 подозрительные колонии пересевают в пробирки со скошенным кровяным агаром и сахарным бульоном.  На кровяном агаре Streptococcus pyogenes образует мелкие мутноватые круглые колонии. В  бульоне стрептококк дает придонно-пристеночный рост в виде хлопьев,   оставляя среду прозрачной. По характеру гемолиза на кровяном агаре стрептококки делятся на три группы: 1) негемолитические; 2) а-гемолитиче-ские 3) β-гемолитические, образующие вокруг колонии пол­ностью прозрачную зону гемолиза. Заключительным этапом бактериологического исследования является идентификация выделенной культуры по антигенным свойствам. По данному признаку все стрептококки делят на серологические группы (А, В, С, D и т. д.). Серогруппу определяют в реакции преципитации с полисахаридным преципитиногеном С. Серовар определяют в реакции агглютинации. Выявленную культуру стрептококка проверяют на чувствительность к антибиотикам методом дисков.гной, слизь из зева, моча- окраска по грамму, посев на кровяной агар, классифицруют по отутствию или наличию гемолиза, идентификация по Аг св-вам в р-и преципитации к серотипам A B D, при подозрении на сепсис посевы крови. Серологическое исследование для подтверждения ревматизма- определяют наличие ат к О-стрептолизину в РСК или преципитеции, а также С-реактивного белка.